体内药物分析读书报告

体内药物分析读书报告

卞鹏

药物制剂1101 110202124 LC-MS 联用技术在体内药物分析中的应用

摘要： 在体内药物分析中, 色谱技术一直是研究体内药物及其代谢物最强有力的手段。目前, 随着药物分析技术与其他学科新技术相结合, 色谱技术在进样方式、分离模式、检测技术及适用对象等方面迅速发展。近年来, 色谱技术在体内药物分析中应用的最新研究进展主要集中在色谱联用技术、柱切换技术、手性色谱技术、高效毛细管电泳、超临界流体色谱。

液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS) 已成为体内药物分析及其相关研究领域中不可或缺的工具. 虽然该技术具有高选择性、高灵敏度以及高通量等特点, 但在体内药物分析方法学研究中, 仍然会面临诸如待测物需衍生化、复方制剂体内多组分同时测定时高浓度组分的质谱响应饱和、方法专属性误判、基质效应、残留效应等一系列挑战和问题, 本文综述了这些常见问题的相应对策.

一 . 色谱与质谱的联用技术

色谱与质谱的联用是应用于药物分析中最为活跃的技术, 能够使样品的分离、定性、定量一次完成。色谱技术为质谱分析提供了纯化的试样, 质谱则提供准确的结构信息。纵观色-质联用在新药

研究中的部分应用，可以看到，无论是含量测定、有关物质检查、质量标准制定等新药质量研究、还是药代动力学研究中血药浓度测定、代谢途径分析、代谢物鉴定等，都是属于含量少、干扰多，要求分析方法灵敏度高、选择性好、快速准确。随着应用范围的扩展和新药研究的深入，色一质联用法已由单纯的提供数据，上升到从数据、图谱中获得有用的信息和因素, 以解决新药研究中的实际问题，随着电子计算机和仪器装置不断升级，色一质联用法形成越来越广泛地应用范畴。21世纪的色一质联用法仍将显示其蓬勃的生命力。

1． 气相色谱与质谱的联用

[1]气相色谱法（Gas chromatography ，GC ）是近年来应用日趋广泛的分析技术，特别适用于具有挥发性的复杂组分的分离、分析，由于是以气体作为流动相，所以传质速度快，一般的样品分析可在20-30s 左右完成，具有分离效能高，灵敏度高的特点，在有对照品的条件下，可作定性、定量分析，但对重大事件或有争议的样品不能做出肯定鉴定报告，必须连接如质谱的检测器。另外对于不能气化的样品则需要作衍生化处理后再分析. GC-MS 联用技术已经是一门成熟的分析鉴定技术, 适合于挥发性强、热稳定的药物的分离。Gaillard 等[2]用自动在线固相萃取GC-MS 法测定了头发和全血中的右丙氧芬和去甲右丙氧芬, 采集1mL 血样或50mg 发样, 处理后加入碳酸氢盐缓冲溶液离心,

在C18 固相萃取小柱上用0.5%醋酸的甲醇溶液洗脱, 用GC-MS 法分离定量。右丙氧芬的LOQ 值血样是0.07mg/L,发样0.05μg/g,去甲右丙氧芬LOQ 值血样0.09mg/L,发样0.04μg/g 。Blum 等[3]将牛血红蛋白、大鼠血液和狗血液保温后用HRGC-化学电离质谱法快速鉴定了蒿甲醚及代谢物, 试样经乙酸乙酯萃取, N -甲基- N -三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺衍生化后, 在熔融硅石英毛细管柱内程序升温, 质谱法检测, 检测出3 种代谢物.[4]阿片类物质样品衍生化后用GC - MS 可定性定量地检测。GC-MS 色谱部分通常配备12-15 m 的熔硅毛细管柱, 填充极性固定相, 如交联二甲基硅烷、酚基甲基硅烷或聚硅烷。一般以氘化的吗啡、可待因和6- MAM 为内标。质谱检测多采用选择离子检测方式(SIM) ,电子撞击( EI)能量为70eV 。用特征质荷比(m/z)的离子碎片定性各物质。姜杰等[5]采用高分辨气相色谱／高分辨双聚焦磁式质谱联用仪(HPGC／HRMS) 定量检测了鱼体中12种类二恶英多氯联苯(PCBs)化合物。该方法可对PCBs 同系物进行有效分离，同位素标准物的回收率分布于44.8％—93．1％之间，7种类二恶英PCBs 在鱼体中可检测出，总TEQ 值为0.35pg/g。杨丽莉等[6]建立人血浆中阿斯匹林和水杨酸气相色谱-质谱联用测定法, 用色谱柱HP25.25 m ×0.12 mm ID 石英弹性毛细管柱，内标苯甲酸, 血样酸化后经乙醚—二氯甲烷(4:1)提取,BSTFA 衍生化

进样, 采用选择离子方式检测、定量。阿斯匹林、水杨酸的日内及日间的RSD 分别小于4.178 %及6.116 %。平均回收率大于96.19%。最小检测浓度:阿斯匹林1.10ng/mL ,水杨酸0.11μg/mL.

2. 液相色谱与质谱的联用

GC-MS 联用虽然检测灵敏度很高, 但对样品的极性的热稳定性有一定要求, 对样品的预处理十分重要, 有时要经过衍生化才能检测。而与之相比,LC-MS 联用分析前样品预处理简单, 一般无需衍生化或水解, 更适合于体内药物的分离和鉴定。LC-MS 联用分析的样品来自于液体流动相, 对接口的要求比GC-MS 联用苛刻得多, 因而LC-MS 联用最关键的问题就是仪器的接口技术。目前应用最广的接口有电喷雾法(ESP)、离子喷雾法(ISP)、大气压化学电离(APCI)三种操作模式。吴民淑等[7]犬6 只iv 盐酸关附甲素7.156 mg/kg后采集一系列血样, 利用LC-MS 联用系统测定血浆药物浓度, 并用3P87软件拟合求算药代动力学参数。盐酸关附甲素浓0.142-21.12g/mL ,线性关系良好(γ= 0.9994)。绝对回收率高于80% ,日内、日间RSD 均小于15 % ,符合生物样品分析要求.[8]于治国等研究大鼠单剂ig5mg/kg 6.72二甲氧基香豆素后各生物样品中主要代谢产物。采用高效液相色谱法对代谢物进行分析和分离, 并利用电喷雾离子阱质谱注射泵直接进样技术及液相色谱, 质谱联用技术（LC-MS ）

对大鼠尿液、胆汁中6.72二甲氧基香豆素主要代谢产物进行结构鉴定, 根据代谢物色谱行为及质谱断裂规律，推定

6.72二甲氧基香豆素在大鼠体内的两个主要代谢产物（M1和M2）为6.72二甲氧基香豆素经水解脱甲基生成的羟基化合物，均以硫酸酯结合物形式存在，且互为同分异构体。Wieboldt 等[9]用液相色谱-四极离子阱***质谱仪测定了血浆中的奥利司他(orlistat),样品先经过液液萃取, 经HPLC 分离后, 经ESP 离子化, 多次应用碰撞诱导解离(CID)技术得到质量碎片图; 检测LOQ 为0. 3 µ g/L , 线性范围0. 3 ～10μg/L。文红梅等[10] 利用HPLC-MS(TOF)法测定了犬5 只ig 环维黄杨星D 10 mg/kg后采集一系列血样, 测定血浆药物浓度, 并用3p97 软件拟合求算药代动力学参数。 参考文献：

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; 中国药学会第二次全国药物分析学术会议在西安市召开[J];中国中药杂志;1985年01期 2

3 郭涛;; 体内药物分析[J];药学实践杂志;1985年02期

4 ; 本院一九八四年院庆学术报告会题录[J];中国药科大学学

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王伟, 王玉华; 甲硝唑体内药物分析测定方法概况[J];中国医院5 药学杂志;1988年12期

毕红钢, 周同惠; 体内药物分析中的液-固提取样品制备技术[J];6 国外医学. 药学分册;1988年01期

孔庆洪; 贺卫东;; 体液中药物浓度测定与免疫分析[J];药学实践7 杂志;1988年02期

沙世炎; 《色谱法在药物分析中的应用》全国学术会议简讯[J];8 药学学报;1989年02期