植物化学大实验实习报告

植物化学大实验

实习报告

姓 名：刘 伟

学 号：

专 业：应用化学10

指导老师：付惠 雷然

前言……………………………………………………………………………………2 一 实验目的与要求…………………………………………………………………..3

二 实验原理…………………………………………………………………………..3 1. 提取原理………………………………………………………………………….3 2. 分离原理………………………………………………………………………….3 3. 检测原理………………………………………………………………………….4

三 仪器、试剂与材料………………………………………………………………..4 1. 仪器……………………………………………………………………………….4 2. 试剂……………………………………………………………………………….4 3. 材料……………………………………………………………………………….4

四 实验步骤…………………………………………………………………………..5 1. 实验流程图…………………………………………………………………….....5 2. 葛根素的提取…………………………………………………………………….5 3. 葛根素的分离…………………………………………………………………….6 4. 葛根素的检测…………………………………………………………………….6 1薄层层析………………………………………………………………………6 ○

2薄层扫描………………………………………………………………………6 ○

3化学检测………………………………………………………………………7 ○

五 结果与讨论………………………………………………………………………..7 1. 波谱解析结果分析……………………………………………………………….7 2. 薄层板结果分析………………………………………………………………….8

葛根素提自于葛根，葛根是豆科植物野葛[Pueraria lobata(Willd) Ohwi]的干燥根，为中医常用祛风解表药，主治发热无汗，头痛劲强及斑疹不透等症状。葛根乙醇浸膏片与葛根素用于治疗伴有劲强的高血压，心绞痛及突发性耳聋等症状，疗效显著。

葛根中的主要成分是异黄酮类化合

物。所含非黄酮类化合物有芳香族化合物、香豆素类、甾体类、三萜皂苷类及蔗糖等。从葛根中分出的异黄酮类化合物主要有葛根素、大豆素及大豆苷。

葛根素是由葛根提取制成，主要剂型有片剂、注射剂等，主要化学成份为黄酮类化合物葛根黄酮。

葛根素低含量时为棕色粉末，高含量为白色针状结晶粉末, mp 187℃。甲醇中溶解, 乙醇中略溶, 水中微溶, 氯仿或乙醚中不溶。如果是针剂现在基本为要求99.5%以上的含量，而且有要求相关物质。

葛根作为一种黄酮类化合物，有多方面的药理药效： 1. 含有皂苷类化合物，对肝组织免疫损害具有保护作用。 2. 可有效逆转化学诱导的肝纤维化。

3. 增强心肌收缩力，保护心肌细胞作用。 4. 能扩张血管、降低血压、改善微循环。

5. 保护红细胞的变形能力，增强造血系统功能。

6. 具有抗血小板聚集，增加纤溶活性，降低血粘度作用。 7. 对肾炎、肾病肾衰模型均有保护作用。

8. 对非特异性免疫、体液免疫、细胞免疫有明显的调节作用。

9. 可促进正常人和肿瘤病人的淋巴细胞转化率，增强自然素作用。 10. 对干扰系统有明显的刺激和诱生作用。

葛根素的提取、分离与鉴定

一 实验目的

1. 掌握葛根素提取、分离与鉴定的原理及操作 2. 了解异黄酮类化合物的波谱解析程序及特征 3. 掌握旋转蒸发仪的操作方法

二 实验原理 1. 提取原理

在植物有效成分的提取过程中，溶剂提取法是最常用的一种方法。葛根素与乙醇结构相似，根据“相似相溶”的原理，利用葛根素在乙醇中的溶解度大的性质，采用回流提取可以用乙醇将葛根中的葛根素提取出来。实验提取的装置图如右图所示

使用低沸点的乙醇加热提取葛根素，为减小溶剂的挥发损失，保持溶剂与药材的持久接触，将反应容器与冷凝装置连接在一起，溶剂受热蒸发后变成气体上升，遇冷再冷凝为液体回流到反应容器中，如此反复提取直至葛根素被提取完全。回流提取法避免了有机溶剂散发到空气中，减少了溶剂的消耗量，而且提取效率也很高。

为了回收多余的乙醇试剂和提高的葛根素的浓度，对提取到的葛根素可以利用旋转蒸发仪对其进行减压浓缩。

旋转蒸发仪减压浓缩的装置图如右图所示。

在真空条件或低压的条件下，溶液的沸点也大大降低，对溶液进行恒温水浴加热并使旋转瓶恒速旋转，溶剂在低温下就能沸腾并气化溢出，物料在瓶壁形成大面积薄膜，高效蒸发。溶媒蒸气经高效玻璃冷凝器冷却，回收于收集瓶中，大大提高蒸发效率。这样对溶液进行蒸发后，

溶液的浓度增加，用量大的乙醇溶剂得到了回收，而且在低温下进行蒸发，葛根素也不会被破坏。 2. 分离原理

主要运用结晶和重结晶法。在结晶和重结晶纯化化学试剂的操作中，溶剂的选择是关系到纯化质量和回收率的关键问题。选择适宜的溶剂时应注意以下几个问题：a. 选择的溶剂应不与欲纯化的化学试剂进行化学反应；b. 选择的溶剂对欲纯化的化学试剂在热时应具有较大的溶解能力，而在较低温度时对欲纯化的化学试剂的溶解能力大大减小； c. 选择的溶剂对欲纯化的化学试剂中可能存在的杂质或是溶解度甚大，在欲纯化的化学试剂结晶和重结晶时留在母液中，

在结晶

和重结晶时不随晶体一同析出；或是溶解度甚小，在欲纯化的化学试剂加热溶解时，很少在热溶剂溶解，在热过滤时被除去。; 用于结晶和重结晶的常用溶剂有：水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、冰醋酸、二氧六环、四氯化碳、苯、石油醚等。此外，甲苯、硝基甲烷、乙醚、二甲基甲酰胺、二甲亚砜等也常使用。在选择溶剂时必须了解欲纯化的化学试剂的结构，因为溶质往往易溶于与其结构相近的溶剂中遵循“相似相溶”原理。极性物质易溶于极性溶剂，而难溶于非极性溶剂中；相反，非极性物质易溶于非极性溶剂，而难溶于极性溶剂中。

3. 检测原理

薄层原理薄层色谱，色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种重要实验技术，属固液吸附色谱，兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）上，形成薄层（常用厚度为0.25毫米左右）后，在此薄层上进行层析分离的分析方法。薄层层析的分析程序：将样品溶液用毛细管点在薄层板的一端，置密闭槽中，加入适宜溶剂为流动相。由于毛细管原理，溶剂被吸上，沿板移动，并带动样品中各组分向前移动，这个过程称为展开。由于各组分性质不同，移动距离不同，展开一定距离后，即得互相分离的组分斑点。可用适当方法使各组分在板上显示其位置，如组分本身有颜色，即可直接观察，否则可喷显色试剂或在紫外灯下观察荧光等办法确定斑点位置。通常用比移值来表示其移动，Rf ＝组分移动的距离／溶剂前沿移动的距离 ＝原点至组分斑点中心的距离／原点至溶剂前沿的距离。在薄层、溶剂、温度等各项实验条件恒定的情况下，各物质的Rf 值是不变的，它不随溶剂移动距离的改变而变化

三 仪器、试剂与材料 1. 仪器

量筒、玻璃棒、电炉、铁架台、橡皮管、水浴锅、圆底烧瓶、冷凝管、烧杯、纱布、布氏漏斗、旋转蒸发仪、抽滤瓶、漏斗、铁圈、高速离心机、点样板、薄层扫描仪、毛细管、天平、层析缸、胶头滴管 2. 试剂

95%乙醇、水、冰过氧乙酸、CHCl3、MeOH 、葛根素标准品、显色剂 3. 材料

葛根粉（菊花村中药市场）、定量滤纸、定性滤纸、冰块

四 实验步骤 1. 实验流程图

2. 葛根素的提取

称取葛根粗粉150g ，加4倍量的95%乙醇，回流提取一小时，用纱布过滤出上清液，剩下的残渣加入2倍量的乙醇再回流提取一次。合并两次提取出的滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩至体积为150mL 左右。最后将浓缩的滤液放入冰箱中冷冻过夜。 3. 葛根素的分离

将过夜的滤液用定性滤纸过滤出去沉淀，再用定量滤纸过滤一次。过滤后的滤液加入400mL 无水乙醇，然后放在电炉上加热溶解。溶解完后将其自然冷却，用旋转蒸发仪蒸发至溶液剩余200mL 左右为止。将浓缩后的溶液放入冰箱中冷冻过夜。

4. 葛根素的检测

将过夜的滤液取出，用漏斗过滤后加入等量的冰过氧乙酸（甲液100mL 、乙液100mL ）混匀后静止一会儿，然后冰浴析晶，再用离心机离心10min 后，沉淀用无水乙醇溶解，即得到葛根素溶液。

取一块薄层板画五个点，两边的点点上葛根素标准品，中间的三个点点上葛根素待测液。取CHCl 310mL 和MeOH2mL 加入层析缸中，将点好的薄层板放入层析缸中跑板，当跑板的距离超过板长度的1/2时即可。

将跑好的板取出干燥后，放入薄层扫描仪中进行扫描，并进行扫描结果分析及处理。

扫描好后，取出薄层板，取一定量的染色剂于烧杯中将薄层板放入其中进行染色，染好色后对其进行结果分析

五 结果与讨论

2. 薄层板结果分析