2015版中国药典纯化水微生物限度检测方法验证方案
1. 审批
起草人签名:
审核人签名:
批准人签名:
2. 目录
1. 审批 .......................................................................................................................................................... 1 2. 目录 .......................................................................................................................................................... 2 3. 目的 .......................................................................................................................................................... 3 4. 范围 .......................................................................................................................................................... 3 5. 职责 .......................................................................................................................................................... 3 6. 执行程序 .................................................................................................................................................. 4 7. 描述 .......................................................................................................................................................... 4 8. 方法验证 .................................................................................................................................................. 4 8.1. 8.2. 8.3. 8.4. 8.5. 8.6. 8.7. 8.8. 8.9. 8.10. 8.11.
人员培训 ..................................................................................................................................................4 文件确认 ..................................................................................................................................................5 仪器确认 ..................................................................................................................................................5 供试品确认 ..............................................................................................................................................6 培养基及缓冲液确认 ..............................................................................................................................6 菌种确认 ..................................................................................................................................................7 培养基 ......................................................................................................................................................7 菌种:枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌。 ..............................................................................................7 供试品制备 ..............................................................................................................................................8 试验结果 ..............................................................................................................................................9 验证结果分析与评价 ........................................................................................................................10
9. 偏差处理 ................................................................................................................................................ 10 10. 11. 12. 13. 14.
变更控制 ............................................................................................................................................ 10 附件日志 ............................................................................................................................................ 11 再验证 ................................................................................................................................................ 11 参考书目 ............................................................................................................................................ 11 修订历史 ............................................................................................................................................ 12
3. 目的
纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法,验证该方法适用于纯化水中需氧菌总数的测定。
4. 范围
本验证方案适用于上海XXXX有限公司QC实验室,对纯化水微生物限度检查方法(薄膜过滤法)适用性的验证。
5. 职责
5.1.
验证小组组成:
5.2.
验证小组组长负责
5.2.1. 组织起草或审核验证方案及变更申请; 5.2.2. 对验证小组成员进行培训; 5.2.3. 验证方案的组织实施;
5.2.4. 对验证过程中的记录审核,保证其真实性、可靠性和完整性; 5.2.5. 组织验证报告的起草、汇总并参与对其进行审核及验证周期的拟定。 5.3.
QA参与人员负责
5.3.1. 审核验证方案、报告及报告中出现的偏差、变更; 5.3.2. 参与验证方案的实施及评价;
5.3.3. 对验证方案及报告进行编号并纳入验证文件系统且归档。 5.4.
QC参与人员负责
5.4.1. 起草验证方案;
5.4.2. 已经批准的验证方案的具体实施;
5.4.3. 收集测试数据,应评估数据并对测试数据做出评论; 5.4.4. 参与偏差调查、变更申请等; 5.4.5. 起草验证报告。
6. 执行程序
6.1. 6.2. 6.3. 6.4.
一旦方案被批准和发布,组长对本验证小组人员进行本方案的培训; 所有用于测试的仪器/仪表都必须经过校验/验证后才能用于测试; 验证小组负责核查所有完成的测试结果和附件的完整性; 测试完成后,由组长及相关部门做出确认结论。
7. 描述
取三个不同批号的纯化水用薄膜过滤法检测微生物限度,通过比较试验菌的恢复生长结果评价整个检验方法的准确性、有效性,通过计算回收率来判断检查方法是否有影响,通过验证来确认薄膜过滤法适合于纯化水需氧菌总数的测定。三次试验中,稀释剂对照回收率应在50%~200%范围内,试验组回收率也应在50%~200%范围内。进行微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证时,所有的平皿和稀释剂都应该严格灭菌消毒、灭菌,确保对试验结果没有影响。
8. 方法验证
8.1.
人员培训
文件确认
8.2.
8.3. 仪器确认
8.4.
供试品确认
8.5.
培养基及缓冲液确认
8.6.
菌种确认
8.7.
培养基
8.7.1. 培养基:按《IOP-QC-014培养基灵敏度测试规程》检查。 8.8.
菌种:枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌。
8.8.1. 菌液制备:取枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌冻存管0.1ml接种至10mlTSB培养基,30~35 ℃
培养18~24h。
8.8.2. 菌液计数:取枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌液0.1ml接种至TSA培养基,用涂布棒快速地
将其均匀涂布,30~35 ℃培养48~72h计数。
8.8.3. 菌落计数结果 8.8.3.1.
8.8.3.2.
8.9.
供试品制备
8.9.1. 试验组:取纯化水1ml注入滤器,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml冲洗,分别在
冲洗液中加入上述2种菌液各1ml,过滤、各平行制备2个平皿。
8.9.2. 供试品对照组:取纯化水1ml注入滤器,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml冲洗,
过滤、测定供试品本底菌数,各平行制备2个平皿。
8.9.3. 稀释剂对照组:取100mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液注入滤器,加入上述2种菌液各
1ml,测定其菌数,各平行制备2个平皿。
8.10. 试验结果
8.10.1. 试验组的菌数回收率(%)=(试验组的平均菌落—供试品对照组的平均菌落数)/菌液组的
平均菌落数X100%。
8.10.2. 稀释剂对照组的回收率(%)=(稀释剂对照组的平均菌落/菌液组的平均菌落数)X100%。 8.10.3.
8.10.4.
8.11. 验证结果分析与评价
8.11.1. 以上验证结果表明,纯化水_________采用上述方法进行需氧菌总数的测定。
9. 偏差处理
偏差处理:严格按照《IOP-QC-015工艺用水微生物限度检查操作规程》操作,如方案执行过程中有偏差产生,根据《SOP-QA-016偏差管理规程》进行处理;并按要求填写偏差列表(表9-1)
10. 变更控制
方案执行过程中如需要变更控制,应按照《SOP-QA-017变更控制规程》的流程进行处理,并按要求填写变更控制列表(表10-1)和变更申请控制记录(SOP-QA-017-A)。
11. 附件日志
在附件日志中列明所有附件,每个附件都要有自己唯一的附件号,并在“描述”栏标明每一个附件的总页数,如附件涵盖多项内容,应标明每项内容所在的页码。
12. 再验证
微生物限度检查方法变更、试验条件改变等可能影响检查结果时需要对本方法进行再验证。
13. 参考书目
13.1. 中国药典2015版四部
14. 修订历史