荷叶中荷叶碱与荷叶黄酮的提取工艺

２００８年ｌＯ月

中国中药杂志

ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅ

ＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ

Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００８

星点设计．效应面法优选荷叶中荷叶碱与

荷叶黄酮的提取工艺

王国华，张保献’，聂其霞，李

慧，臧琛

（中国中医科学院中药研究所，北京１００７００）

［摘要】

目的：优化荷叶中２类有效成分的醇提工艺。方法：采用星点设计，以荷叶碱，荷叶总黄酮的提取率

为指标，对２种指标进行归一化处理，采用效应面法优化荷叶的提取工艺条件。结果：确定最优提取工艺为７５％一８０％乙醇，提取时间１２０—１８０ｍｉｎ，加醇量２０一２５倍，提取２次，荷叶碱和荷叶总黄酮提取率的实际值与预测值的偏差分别为５．５３％，一６．０２％。结论：采用星点设计一效应面法优选荷叶的醇提工艺，实际值与预测值吻合度高，预测性良好，是可行的。

［关键词】荷叶碱；总黄酮；提取工艺；星点设计；效应面优化法；总评归一法

［中图分类号］Ｒ２８４．１［文献标识码】Ａ［文章编号］１００１－５３０２（２００８）２０－２３３２－０４

荷叶（１０ｔｕｓｌｅａｆ）为睡莲科植物莲Ｎｅｌｕｍｏｎｕｃｉｆ－ｅｒａｇａｅｒｔｎ的叶，属药、食两用植物，荷叶中主要含荷叶生物碱和黄酮类２类功效性成分，在目前报道的荷叶提取工艺文献中，大都以其中１种成分为指标，本试验拟以荷叶碱，荷叶总黄酮两类成分的提

品适量，加甲醇制成每１ｍＬ含荷叶碱０．１００ｍｇ的标准溶液。

２．１．３０．０１００

供试品溶液的制备取荷叶浸膏粉约

ｇ，精密称定，置１０ｍＬ量瓶中，加入甲醇适

量，超声３０

ｒａｉｎ，加甲醇至刻度，摇匀，０．２２归微孔

取率为指标，对２种指标采取归一化法处理，优选

出合理的荷叶提取条件，为开发荷叶相关的产品提供依据。１仪器与试药

Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ２６９５－２４８７系统）；Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作站；Ｔ６紫外一可见分光光度

膜滤过，续滤液作为供试品溶液。

２．１．４标准曲线制备分别精密量取标准品溶液

５，１０，１５，２０，２５止注入液相色谱仪，测定峰面积，

分别以进样量为横坐标（盖），峰面积为纵坐标（ｙ），绘制标准曲线，Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱软件处理得荷叶碱回

归方程Ｙ＝３。３２×１０６ｘ一９。６２×１０４（ｒ＝０．９９９

ｎ＝５）。

８，

计。荷叶碱对照品（批号１１１５６６－２００４０２，中国药品

生物制品检定所），芦丁对照品（批号１０００８１・２００４０６，中国药品生物制品检定所），乙腈为色谱醇，其他为分析醇，水为高纯水。荷叶购自北京纤草饮片有限公司。２方法与结果

２．１荷叶碱的含量测定

２．１．１色谱条件色谱柱ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（４．６

２５０

ｍＩｎ×

２．１，５荷叶碱的测定按上述方法对浸膏进行含量测定，并计算荷叶碱的提取率。２．２荷叶总黄酮的含量测定

２．２．１１．２５

标准曲线的制备精密称取芦丁对照品

ｍｇ，用６０％乙醇微热溶解，冷却后转移至２５

ｍＬ量瓶中，摇匀定容，得０．０５ｇ・Ｌ。１芦丁标准溶液，分别吸取标准液０，１，２，３，４ｍＬ于１０ｍＬ量瓶中，分别加入６０％乙醇２ｍＬ，加入５％ＮａＮＯ：０．３ｍＬ，放置５ｒａｉｎ，加入１０％ＡＩ（Ｎ０３）３，摇匀，放置６

ｍｍ，５斗ｍ）；流动相乙腈．水一三乙胺一冰醋酸（２７：

７０．６：１．６：０．７８），检测波长２７０ｎｎｌ，理论板数按荷叶碱峰计算不低于２

０００。

ｍｉｎ，再加入１０％的ＮａＯＨ

３

ｍＬ，加６０％乙醇至刻

２．１．２对照品溶液的制备精密称取荷叶碱对照

【收稿日期】２００７．１２—１３［通讯作者】・２３３２・

’张保献，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１・２９５７

度，摇匀，静置１０ｒａｉｎ，于５１０ｎｌｎ处测定吸收度，以

试剂空白作参比液，以芦丁质量浓度为横坐标，吸收

度为纵坐标作标准曲线。２．２．２荷叶总黄酮的测定

精密称取荷叶浸膏粉

２００８年１０月

中国中药杂志

ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅ

ＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｅａ

表１因素水平

Ｏｅｔｏｂ日，２００８

０．０１００

ｇ，置１０ｒａｉＬ，量瓶中，加６０％乙醇微热溶解，

冷却，加６０％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取滤

液２ｍＬ于１０ｍＬ量瓶中，按与标准曲线相同的方法

测定吸光度，并计算荷叶提取率。２．３星点设计试验

２．３．１

因素、水平及指标的确定醇提因素为提取

次数、乙醇浓度、提取时间和溶剂倍量，因提取次数

为非连续变量，不能进行回归处理，结合预实验结果

２．３．２试验安排与指标测定取荷叶１０ｇ，按表４进行提取，提取液滤过，经浓缩后真空干燥，得浸膏粉，按照２．１及２．２项下测定方法，分别测定浸膏中荷叶碱及荷叶总黄酮的含量，计算提取率，结果见表２。

和工业生产的实际，暂固定为２次，其余因素的水平见因素水平见表ｌ。

表２星点试验设计与结果

Ｎｏ．

置恐玛浸膏得率／％

１７．８Ｉｔ．７１８．７１５．５２０．６１８．７２１．１１８．９２０．５１２．４１８．４２０．２１７．２２２．６２１．９２１．２２１．６２１．４

荷叶碱提取率／％总黄酮提取率／％

６０．８５６８．８５７７．９９８４．１５６５．９１９２．０６８７．６９９３．３３７５．０ｒ７９０．１３８４．８０８８．７３８１．０４８９．５７８８．５０８６．１９８７．１３８８．１ｌ

７２．９１４１．２８７０．１２５８．５２６１．０１７７．９８

ＯＤ０．３１５０．００００．４７５０．３４１０．２６５０．６８６０．７８３０．７４６０．５５５０．００００．５３３０．６４２０．４２６０．６２６０．７１５０．７２９０．７８８０．７７１

１．．１．．１．．１２３

４

４－ｌ

—１＋１

一１—１

４－１４－１

—１—１４－１

＋１

５．．１．．１６

７

４－１—１４－１—１．７３２１．７３２００００００００

—１４－１

４－ｌ

＋１

４－１

蚍７０

８２．０９

８９１０１１１２１３１４１５１６１７１８

００—１．７３２１．７３２００００００

００００—１．７３２１．７３２００００

∞．６７

３４．５１７０．４４７６．６３６４．６２７４．７５８３．１７８６．７１９１．７８８８．９６

２．３．３数据处理

２．３．３．１

墨，ｒ＝０；９８３

４；

多指标的数据处理采用总评“归一值”

ｙ（荷叶碱）２—１．０８８＋２．４７１Ｘｌ＋０．００９３ｘ２＋

０．０３０６Ｘ３—１．２３８Ｘ１２—０．００００．００６

法。荷叶碱和总黄酮提取率越大越好，拟定荷叶碱０１天幺一０．０００

９ｘ３２—

及总黄酮的提取率可接受的最大值和最小值为

１００％和５０％，采取线性归一化法处理：当Ｋ≤５０％，ｄｉ＝０；当５０％＜Ｋ＜１００％，ｄｉ＝（Ｋ—ｙ二。）／

ＯＸｌ恐＋０．０２１

４ＸｌＸ３—０．０００

０３鼍Ｘ３，ｒ＝

０．９７５６；

ｙ（黄酮）＝一１．２０１＋４．８６１Ｘ１＋０．００４

０．０１４４Ｘ３—５．１６２Ｘ１２—０．００００．００２３Ｘｌｘ２４－０．１２６０．９５２７；

９Ｘ２＋２Ｘ３２—

（ｋ—ｋ）；当Ｋ≥１００％，ｄｉ－１；ＯＤ＝（ｄｌｄ２）１／２。

２．３．３．２二次模型的拟合和简化建立二次模型

０３丑≥一０．００３

２Ｘｌ鼍＋０．０００２如匙，ｒ＝

方程ｌ，＝ｂｏ＋ｂｌＸｌ＋ｂ２恐＋ｂ３墨＋ｂ４互２＋ｂ５如４－ｂ６

玛２＋ｂ７置五＋ｂ８ＸＩ墨＋ｂ９恐邑，采用Ｓｔａｔｉｓｔｉｅａ方程，结果如下。

ｙ（浸＂ｌｆ）＝一０．３４９１＋１．１５１Ｘｌ＋０．００１２ｘ２＋

０．０１ｌ

６．０

ｙ（６Ｄ）＝一３．１３５＋８．８７５Ｘｌ＋０．０１０

９．４００Ｘ１２—０．０００ｒ＝０．９３４８。

ｌＸ２—

拟合参数，并以Ｐ＜０．０５进行逐步递减回归，简化

０４彳么一０．００３９ｘ３２＋０．２２９２Ｘｔｘ３，

２．３．４效应面法优选工艺条件根据拟合方程，绘制指标ｏＤ随因表变化的效应面图（图１—３），确定

．２３３３・

１五一０．０００

４ｘ３２—０．０００６Ｘｌｘ２＋０．０１１

６Ｘｌ

第３３卷第２０期２００８年１０月

中国中药杂志

ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅ

Ｖ０１．３３，Ｉｓｓｕｅ

２０

ＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ

Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００８

荷叶的最佳工艺条件为乙醇浓度为７５％一８０％，提

取时间１５０～１８０ｒａｉｎ，加醇量２０～２５倍。

的数学模型预测性好。

表３各指标预测值与实际值的比较

％

３讨论

在以往的荷叶提取文献报道中，大都以一类有效成分的提取率为指标，荷叶碱及荷叶总黄酮都是荷叶

图１

乙醇体积分数和提取时间对ＯＤ值影响三维图

中的功效性成分，荷叶生物碱宜用高浓度醇提取，荷

叶黄酮宜用稀醇提取，笔者认为综合考察较为合理。

多指标的试验设计中，指标间往往互相影响，对某一

项指标有利的条件可能不利于另一指标，最终选择条

件往往依据这些指标的综合效应，采用总评“归一值”

法将荷叶醇提工艺优化中的两指标综合起来，并成功

建立数学模型进行优化与预测分析，由实验结果可知，采用２０倍量７５％的乙醇提取２次，每次２ｈ，荷叶碱及荷叶总黄酮的提取率均能达９０％以上。

图２乙醇体积分数和加醇量对ＯＤ值影响三维图

正交设计是目前国内较常用的提取工艺设计方法，但预测性不如星点设计法；均匀设计虽然也能进行回归处理，但试验次数太少，文献报道回归结果多为线性模型，不能纳入响应面设计；星点设计

实验所得的信息量更大，更直观，更适合于探索性

的试验研究。

［参考文献］

［１］钟先锋，黄桂东．荷叶成分及功能的研究进展［Ｊ］．食品与机

械，２００６，２２（４）：１３９．

［２］中国药典．一部［ｓ］．２０００：１８．

图３加醇量和提取时间对ＯＤ值影响三维图

［３］

吴伟，崔光华．星点设计徼应面优化法及其在药学中的应用

［Ｊ］．国外医学・药学分册，２０００，２７（５）：２９２．

２．３．５最优条件的验证经综合评价，确定最优提取条件为７５％的乙醇提取２次，每次１２０ｍｉｎ，加醇量为２０倍，重复３次实验，将预测值与实测值进行比较并计算偏差，结果见表３。由表３可知，所建立

［４］吴伟。崔光华，陆彬．实验设计中多指标的优化星点设计

和总评“归一值”的应用［Ｊ］．中国药学杂志，２０００，３５（８）：

５３０．

Ｏｐｔｉｍａｌ

ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｎｕｃｉｆｅｒｉｎｅａｎｄｆｌａｖｏｎｅｆｒｏｍｌｏｔｕｓｌｅａｆｂａｓｅｄ

ｏｎ

ｃｅｎｔｒａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅｄｅｓｉｇｎａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ

ＷＡＮＧＧｕｏ—ｈｕａ，ＺＨＡＮＧＢａｏ・ｘｉａｎ，ＮＩＥＱｉ－ｘｉａ，ＬＩＨｕｉ，ＺＡＮＧＣｈｅｎ

（１ｎｚｔ／ｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，Ｃｈｉｎａ

Ａｃａｄｅｍｙ

ｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｆｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ

ｈｉｅｓ

ｗｅｒｅ

ｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍｌｏｔｕｓｌｅａｆ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ

ｖａｒｉａ－

ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒｅｆｌｕｘｔｉｍｅａｎｄｓｏｌｖｅｎｔ

ｆｏｌｄ．ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ

ｖａｒｉａｂｌｅｓｗｅｒｅ

ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ玎她ｏｆｎｕｃｆｆｅｆｉｎｅ

ａｎｄｆｌａｖｏｎｅｉｎｌｏｔｕｓ

・２３３４・

第３３卷第２０期２００８年ｌＯ月

中国中药杂志

ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅ

Ｖ０１．３３．ｋ鲫ｅ

２０

ＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ

Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００８

ｌｅａｆ，ｃｅｎｔｒａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅｄｅｓｉｇｎａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

ｗｅｒｅ

ｕｓｅｄｆｏｒｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｌｏｔｕｓｌｅａｆ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｏｐｔｉ—

ｔｉｍｅｓｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｂｉａｓ

ｖａｌ—

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｗｅｒｅ

７５％－８０％ｅｔｈａｎｏｌ，２－３

ａｎｄ

ｆｌａｖｏｎｅ

ｈｏｕｒｓｆｏｒｒｅｆｌｕｘ，２０－２５ｆｏｌｄｓｏｌｖｅｎｔａｎｄ２

ｂｅｔｗｅｅｎｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｐｒｅｄｉｃｔｅｄｏｆ

ｒａｔｅｓ

ｔｏ

ｏｆｎｕｃｉｆｅｒｉｎｅ

ｖａｌｕｅｓｗｅｒｅ

５．５３％，一６．０２％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ

Ｕｅｓｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｐｒｅｄｉｃｔｅｄ

ｉｒｅ

ｗｅｒｅ

ｃｋｅｅ

ｅａｃｈｏｔｈｅｒ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＩｃｔｕｓｌｅａｆｂｙｃｅｎｔｒａｌｃｏｍｐｏｓ－

ｄｅｓｉｇｎａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｗａｇｒｅａｓｏｎａｂｌｅａｎｄＳＵＣＣｅＳＳｆｕｌ．

［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｌｏｔｕｓ

ｓｉｒａｂｉｌｉｔｙ

ｌｅａｆ；ｎｕｅｉｆｅｒｉｎｅ；ｆｌａｖｏｎｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｃｅｎｔｒａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅ

ｄｅｓｉｇｎ；ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ；ｏｖｅｒａｌｌｄｅ－

【责任编辑鲍雷】

酒制龙胆的最佳炮制工艺研究

王彩君１”，王智民１，王维皓ｈ，彭新君２，高慧敏１，冯伟红１，杨立新１

（１．中国中医科学院中药研究所，北京１００７００；

２．湖南中医药大学药学院，湖南长沙４１０００７）

［摘要】

目的：探讨酒炙龙胆的炮制工艺。方法：以水浸出物的含量及永浸出物中龙胆苦苷的量为指标，采用

正交设计筛选炮制工艺。结果：龙胆切短段（５—１０ｍｍ）、加入药材质量１／５的白酒、闷润２ｈ，文火炒制的炮制品中水浸出物的含量及其中龙胆苦苷的量最高。结论：酒的种类、酒加入量、闷润时间能够影响龙胆苦苷的量，炮制火候也是影响酒制龙胆中龙胆苦苷含量的非常重要的因素。

［关键词］

龙胆；正交试验；水浸出物；龙胆苦苷；炮制工艺

２８４．１

【中图分类号】Ｒ［文献标识码】Ａ【文章编号】１００１—５３０２（２００８）２０－２３３５－０４

龙胆为龙胆科植物条叶龙胆Ｃｅｎｔ／ａｎａ

Ｃａ

ｒｅａｒ．ｈｕｒｌ－

龙胆（购自辽宁省清原龙胆基地，经中国中医

Ｋｉｔａｇ．、龙胆Ｇ．ｓｃａｂｒａＢｇｅ。、三花龙胆Ｇ．ｔｒｉｆｌｏｒａ科学院中药研究所何希荣老师鉴定为龙胆科龙胆

Ｇ

Ｐａｌｌ。或坚龙胆￡ｒｉｇｅｓｃｅｎｓＦｒａｎｃｈ。的干燥根及根ｓｃａｂｒａ干燥根和根茎）。龙胆苦苷（批号

茎。龙胆在《神农本草经》中作为中品收载，具有清

热燥湿，泻肝胆火的功效，用于治疗湿热黄疸，阴肿阴痒，带下，强中，湿疹瘙痒，目赤，耳聋，胁痛，口苦，惊风抽搐等症。龙胆传统的炮制方法有酒炒、炒炭、蜜炙等。中医认为，酒炒上行能矫其苦涩大寒的本

１１０７００）、咖啡因对照品（批号９５０２）均购自中国药

品生物制品检定所；塔牌绍兴花雕酒（酒精度≥

１６．５％，浙江塔牌绍兴酒厂）、东北小烧（酒精度≥３８％，黑龙江省伊春市翠峦区翠光白酒厂）、黄酒（酒精度１＞２４％，濮阳亚光制药厂）；甲醇（色谱纯，Ｔｅｄｉａ），水（娃哈哈饮用纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司），其余化学试剂均为分析纯。一Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ

Ｗａｔｅｒｓ

７１７

Ｐｌｕｓ

１５１５ｉｓｏｃｒａｔｉｃ

ＨＰＬＣＰｕｍｐ，Ｗａｔｅｒｓ２４８７ＤｕａｌＡｂｓｏｒｂａｎｃｅＤｅｔｅｃｔｏｒ，

性，用于虚弱病人则酒炒炭。至今酒制龙胆在临床

上仍广为应用。目前酒制法多为经验操作，缺乏规范工艺过程和质量标准。作者以水浸出物的含量及

水浸出物中龙胆苦苷的量为指标，采用正交设计，探

讨酒制龙胆的最佳炮制工艺。１材料

Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ，Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作

站）；ＭＥＴＹＬＥＲＡＥ２４０电子天平；ＤＧＢ／２０—００２台

式干燥箱（重庆试验设备厂制造）；电子调温电热套

［收稿日期】２００８－０３－０４［基金项目】

国家。十一五”科技支撵计划项目

（型号９８—１一Ｂ，规格１００ｍＬ，天津市泰斯特仪器有限公司）；水浴锅（河南巩义市英峪予华仪器厂）；

美的牌电磁炉（美的集团）。

（２００６ＢＡＩＯｇＢ０ｂｍ－６）

［通讯作者】

‘王维皓，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１４１２８，Ｅ．ｍａｌｌ：ｏｌｌｖｅ＿ｗｈ＠

１２６．ｃⅫ

２方法与结果

・２３３５・