HIV测定(胶体金法)操作规程
HIV 测定操作规程(胶体金法)
1、检验目的 用于快速定性检测人全血、血清或血浆样品中的HIV 1/2型抗体。
2、原理
采用胶体金免疫技术和层析原理,定性测定全血、血清或血浆样本中的HIV 1/2型抗体。检测陽性样本时,样本中的HIV 抗体与胶体金标记抗原结合形成复合物,由于层析作用复合物沿纸条向前移动,经过检测线时与预包被的重组抗原结合形成夹心物而凝聚显色,游离的胶体金标记重组抗原则在对照线处与抗HIV 单克隆抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色,30分钟内观察结果即可。
3、性能参数
● 用国家参考品测定,阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、精密性、最低检出量、稳定
性能均符合要求,测定类风湿因子阳性血清、乙型肝炎、甲型肝炎、梅毒及非肝炎传染病患者等各种类型的血清不得引起干扰。
● 本测试条/卡仅用于体外诊断试验,仅用于人全血、血清或血浆,其他体液和样本可能得不
到准确的结果。
● 对于下列物质在所给出的浓度下对测试结果不造成影响:
4、标本要求
● 标本类型:血清或血浆,血浆样本对临床常用抗凝剂(EDTA 、肝素、枸橼酸钠)无要求。 ● 标本采集:见标本采集手册。
● 标本储存和运输:如果血清或血浆样品收集后7天内检测,样品须放在2~8℃保存,如果
大于7天则须冷冻保存;全血标本建议在3天内检测,样品放在2~8℃保存,不得冻存。 ● 标本拒收状态:细菌污染,严重溶血或严重脂血标本不能作测定。
5、容器和添加剂类型
使用一般干燥管(不添加任何东西),或EDTA 、柠檬酸钠、肝素抗凝管盛放血液。
6、贮存条件及有效期 储存条件:4--30℃密封干燥处保存,有效期为16个月。
7、操作步骤
【血浆或血清】(1)将待测标本从储存条件下取出,平衡至室温并编号。
(2)将所需数量的测试试剂从包装盒中取出并平衡至室温,打开铝箔包装袋,平置于台面上。
(3)用微量加样器取60ul 血清或血浆样本,加到试剂卡的加样处。
(4)加样后阳性标本可在1—30分钟内检出。经过试验确证,反应时间超过30分钟将对实验
结果的观察造成影响,因此,建议30分钟内最终观察并记录实验结果。
【全血】
(1)将待测标本从储存条件下取出,平衡至室温并编号。
(2)将所需数量的测试试剂从包装盒中取出并平衡至室温,打开铝箔包装袋,平置于台面上。
(3)用微量加样器取60ul 全血样本,加到试剂卡的加样处,随即加一滴金标全血样本稀释液。
(4)加样后阳性标本可在1—30分钟内检出。经过试验确证,反应时间超过30分钟将对实验
结果的观察造成影响,因此,建议30分钟内最终观察并记录实验结果。
【结果判定】
阳性:测试条/卡在检测区(T )和对照区(C)位置各出现一条紫红色条带。如果检测区(T)的紫
红色条带隐约可见,建议对该样本重复试验,并使用其他方法确认。
阴性:测试条/卡只在对照区(C)位置出现一条紫红色条带。
失效:对照区(C)未出现紫红色条带,表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中
抗体的含量过高。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并将待测样本稀释后用新的测试条/卡重新测试。如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品,并与试剂供应商联系。
【注意事项】
● 检测线颜色深浅的程度与样品中抗体的滴度没有一定的必然联系。测试区(T )内的紫红色
条带可呈现颜色深浅的现象,但是,在规定的观察时间内,无论该色带颜色深浅,即使只有非常弱的色带,也应判定为阳性结果。
● 本品检测陽性者,需进一步确证。
● 实验环境应保持一定的湿度,避风。避免在高温下进行实验。测试条从包装中取出后,应
尽快进行实验,避免放置于空气中过长时间,导致受潮。
8、质量控制:阴性对照显示为阴性;阳性对照显示为阳性。
9、临床意义:监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体,用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者,需进一步确证。
10、其它注意事项
● 必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有" 检定合格" 防伪标签的试剂。 ● 试剂各组分在正当处理和保存的情况下直至效期都保持稳定,不能使用过效期的试剂盒。 11 参考文献
《人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(胶体金法)说明书》