荭草不同药用部位抗心肌缺血作用及化学成分比较研究
时珍国医国药2010年第21卷第10期
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010VOL．21NO．10
荭草不同药用部位抗心肌缺血作用及化学成分比较研究
黄
勇，郑
林，王爱民，兰燕宇，李勇军，何
迅，王永林
*
（贵阳医学院·药学院，贵州贵阳550004）
摘要：目的针对荭草对心血管方面的作用，确定荭草药材的药用部位。方法以大鼠和家兔为实验动物，采用结扎冠脉
造成急性心肌缺血和离体心脏冠脉流量灌注模型，分别观察荭草各部位（全株、根及粗茎、带叶茎枝、花穗）对上述实验模
型心电图、心肌梗塞范围和冠脉流量的影响；同时对不同药用部位化学成分（异荭草素、荭草素和原儿茶酸）及其指纹图谱进行测定，以探讨荭草对心血管作用的物质基础。结果荭草全株、带叶茎枝、花穗均能不同程度改善缺血心肌心电图，使缺血范围降低；可明显增加离体心脏的冠脉流量。其中带叶茎枝和花穗的综合作用较优，而根及粗茎最弱。不同部位异荭草素、荭草素和原儿茶酸的含量均呈现相同趋势：带叶茎枝＞花穗＞根及粗茎；指纹图谱亦显示不同药用部位
并且其中异荭草素、荭草素等化的特异性差异。结论荭草的带叶茎枝和花穗可能是心血管疾病治疗的有效药用部位，
学成分的多寡与药效强度具有一定相关性，可为药材的临床应用和质量控制提供依据。
关键词：荭草；药用部位；心肌缺血；化学成分DOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2010．10．044
0805（2010）10-2520-03中图分类号：R285．5文献标识码：A 文章编号：1008-
Comparative Study on Antimyocardial Ischemia of Chemical Constituents with Different
Medicinal Parts of Polygonum orientale
min ，LAN Y an-yu ，LI Y ong-jun ，HE X un ，lin HUANG Y ong ，ZHENG L in ，WANG A i-WANG Y ong-*
（School of Pharmacology ，Guiyang Medical College ，Guiyang 550004，China ）
Abstract ：Objective To find out the effect of medicinal parts of Polygonum orientale on cardiovascular disease．Methods The
models of acute myocardial ischemia induced by ligating coronary artery in rats and coronary artery flow （CF ）in isolated heart of
root ＆main stem ，branch with leaves ，rabbits were applied．The effects of different medicinal parts （including the whole plant ，
ear ）on the ECG ，the infarct sizes and CF of heart were observed．The contents of chemical constituents （isorientin ，orientin ，pro-tocatechuic acid ）and HPLC fingerprint were determined in order to find out the substance basis in cardiovascular disease re-spects．Results The extracts from whole plant ，root ＆main stem ，branch with leaves and ear of the plant could improve the change
decrease the range of myocardial ischemia and increase the CF to varying degrees．The samples of branch with leaves and of ECG ，
ear showed more comprehensive effect ，while the ones of root and main stem did poor．Contents of isorientin ，orientin and proto-catechuic acid of different medicinal parts showed the same tendency ：branch with leaves ＞ear ＞whole plant ＞root ＆main stem．The HPLC fingerprint also reflected distinctive characteristic of the different parts．Conclusion The branch with leaves and ear of Polygonum orientale may be the effective medicinal parts on cardiovascular disease ，and the intensity of pharmacodynamics is closely related to the contents of isorientin ，orientin and protocatechuic acid ，so these chemical constituents can provide scientific basis for clinical application and quality control of Polygonum orientale ．
Key words ：Polygonum orientale ；
Medicinal parts ；Myocardial ischemia ；Chemical constituents
民间将其用于治疗胸痹心痛，心胃气痛，但用药部位较资源丰富，
为混乱。因此，为了更好地利用荭草的药用价值，有效开发药材资本研究采用实验性大鼠心肌缺血、兔离体心脏冠脉流量灌注实源，
验对比考察了荭草不同药用部位的药效强度；化学成分研究的结
［6］［7 10］
果表明荭草主要含黄酮类和酚酸类成分，根据文献本研究对荭草不同部位中黄酮类成分异荭草素和荭草素、酚酸类成分原儿茶酸测定了含量，同时考察了各部位的HPLC 指纹图谱，以期找
为其在到化学成分同心血管方面作用的有效部位之间的相关性，
心血管方面的临床应用提供实验研究依据。1仪器与材料
12-23；修订日期：2010-05-30收稿日期：2009-1．1仪器岛津LC －10A 系列高效液相色谱仪；WML 色谱工
基金项目：国家科技重大专项课题（No．2008ZX09101－021）；南宁威玛龙色谱科技有限公司产品；心电图仪，日本NI-作站，
国家自然科学基金（No．30860366）；HON KOHDEN 公司产品；DH140人工呼吸器，浙江医科大学医学
［2007］6010号）贵州省科技计划重大专项项目（黔科合重大专项字仪器实验厂产品。Langendorff 法灌流装置。
：（1976-），（），，作者简介黄勇男汉族贵州贵阳人现任贵阳医学院药学1．2药品与试剂荭草Polygonum orientale L．产地：贵州省惠水
院副教授，硕士学位，主要从事中药新药的研究开发工作．采收期9月，由贵阳医学院药物研究所生药学研究室龙庆德县，*
），通讯作者简介：王永林（1954-男（汉族），贵州贵阳人，现任贵阳医学副教授鉴定。复方丹参注射液，上海通用药业股份有限公司第三
学士学位，主要从事中药新药的研究开发工作．院药学院教授，公司产品；异荭草素和荭草素对照品是从荭草中分离、纯化而得，
荭草为蓼科植物荭蓼Polygonum orientale L．的干燥全草，生
于路旁和水边湿地，分布较广，具有祛风利湿，活血消肿的功效，用
［1］
《中华本草》《中药大冠心病、疝气等。据于治疗风湿性关节炎、
［2，3］
辞典》等记载荭草的茎叶、果实、根和花均可作为不同部位入药，而且功能主治有所差异。而据现代药理学研究表明，以单味荭草制备的注射液有广泛的心血管系统药理活性，如增加心肌营养血流量及冠脉流量，改善急性心肌缺血缺氧状态，同时能减少心肌耗氧和提高机体在低氧状态下的氧利用能力；减弱离体心脏的收
［4，5］
。贵州荭草缩力和心率，能使外周血管扩张，血压轻度下降等
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MS 鉴定为异荭草素、HPLC 归一化经NMR 、荭草素（另文报道），
法测定其纯度均在98%以上；原儿茶酸对照品（中国药品生物制品检定所）。硝基四氮唑蓝（NBT ），上海前进试剂厂产品。1．3动物SD 大鼠，体质量250 300g ；家兔，体质量2 2．5kg ；雌雄兼用，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK （黔）2002－0001。2方法
2．1样品制备取荭草各药用部位（全株、根及粗茎、带叶茎枝、花穗），水煎煮提取浓缩后65%乙醇沉淀，滤液浓缩，加水微热溶解，调pH 至6，滴加明胶溶液至无沉淀产生，再加乙醇使含醇量达75%，静置，滤过，回收至近干，以注射用水稀释至每毫升含2g 生药，调pH 值至7，煮沸，滤过，冷藏24h ，用0．45μm 微孔滤膜
B 滤液分装，灭菌，备用。各药用部位样品分别记为A 组、滤过，
C 组、D 组。组、
2．2剂量设置根据《贵州省中药材、民族药材质量标准》（2003年版）荭草用药剂量和预试验药效学结果，设定了本实验剂量方案。
11］
2．3抗实验性心肌缺血实验［
2．3．1对大鼠急性心肌梗塞心电图的影响取雄性SD 大鼠，随机分为6组，分别为模型对照组，阳性对照组（复方丹参），样
B （根及粗茎）组、C （带叶茎枝）组、D （花穗）组。品A （全株）组、
动物用10%乌拉坦麻醉，固定，将针形电极插入四肢皮下，连接心电图机，记录正常肢体Ⅱ导联心电图。打开胸腔前接上人工呼
各组动物结扎左冠状动脉前降支后，迅速关闭胸腔，恢复呼吸机，吸，记录心电图，有明显J 段抬高或压低者为手术成功征象（剔除未出现明显心肌梗塞心电图波形者）。结扎后即刻分别股静脉
15，30，60，120给药，模型组给予等体积生理盐水。记录结扎后5，
min 各时间点心电图，计算各时间J 点上下偏移mV 数。2．3．2对大鼠急性心肌梗塞范围的影响实验结束后，立即取出心脏，用生理盐水洗净余血，剪去心房及各大血管、筋膜、心耳等，称取心室重量，然后将心肌切成等厚度的5片，置于37ħ 0．5%NBT 染色液中染色10min ，取出剪去被染色的非梗塞心肌，称重未染色的梗塞区心肌，以重量法计算心肌缺血区百分率。
表1
组别模型对照
样品A 样品B 样品C 样品D 阳性对照
表2
组别模型对照样品A 样品B 样品C 样品D 阳性对照
2．4对离体兔心冠脉流量的影响［11］取家兔，雌雄兼用，击后脑致昏，迅速开胸取出心脏，按Langendorff 法主动脉插管，心脏固定在灌流装置上后，用恒温38ħ ʃ 0．5ħ 且不间断通入纯氧的Ringer －Lock ’s 液灌流，灌流压恒定为50cmH 2O 。待灌流稳定后，采取交叉给药法，分别由灌流侧管注入供试药液，观察记录给
后1min 的流量值。药前、
2．5异荭草素、7，8］荭草素和原儿茶酸含量测定参照文献［方法，采用高效液相色谱法测定药材各部位上述指标。测定异荭
5荭草素色谱条件：Diamonsil C 18色谱柱（4．6mm ˑ 250mm ，草素、
μm ），流动相乙腈－0．1%磷酸水溶液（18ʒ 82），流速1ml ·
－1min ，柱温40ħ ，检测波长350nm ；测定原儿茶酸色谱条件：Hy-5μm ），persil C 18色谱柱（5mm ˑ 250mm ，流动相甲醇－水（10ʒ
－1
90），流速1ml ·min ，柱温40ħ ，检测波长258nm 。2．6HPLC 指纹图谱测定参照文献方法［9，10］，采用高效液相色谱法测定药材各部位指纹图谱。色谱条件为：色谱柱Inersil
5μm ，ODS －3柱（4．6mm ˑ 250mm ，日本GL Sciences Inc．）；流
B 为0．1%磷酸，A 梯度洗脱：0min 45min ，动相A 为乙腈，
（13% 21%）；45min 60min ，A （21% 33%），柱温35ħ ；流
－1
速1ml ·min ；检测波长300nm 。2．7数据统计处理数据以x ʃ s 表示，s －t 检验。珋采用Student ’3结果
3．1对急性心肌梗塞心电图及梗塞范围和对离体心脏冠脉流
J 点异常改变，量的影响模型组动物心电图出现明显波形改变，
心肌缺血程度持续加重。各药物组除荭草的根及粗茎样品组外，其他各组不同程度改善缺血性心肌心电图，使心肌缺血区的百分率降低，对急性心肌梗死有明显的保护作用，与模型对照组比较差异具有显著性（P ＜0．05或P ＜0．01）；在对离体心脏冠脉流量的实验研究中，全株、带叶茎枝和花穗增加冠脉流量的作用最为明显（P ＜0．05或P ＜0．01），同样根及粗茎效果不理想。综合两
荭草带叶茎枝和花穗是改善急性心肌缺血状项药效学实验结果，
态和心脏血液供应的有效部位。见表1 3。
ʃ s ）对大鼠结扎左冠状动脉前降支后ECG 的影响（x 珋
5min
0．59ʃ 0．090．52ʃ 0．080．54ʃ 0．080．50ʃ 0．08*0．51ʃ 0．090．50ʃ 0．09*
15min 0．62ʃ 0．090．55ʃ 0．100．58ʃ 0．070．52ʃ 0．11*0．52ʃ 0．09*0．52ʃ 0．09*
结扎后J 点位移U /mV
30min 0．67ʃ 0．100．57ʃ 0．11*0．63ʃ 0．09
*
0．56ʃ 0．110．56ʃ 0．12*0．58ʃ 0．12
60min 0．72ʃ 0．120．64ʃ 0．110．64ʃ 0．120．61ʃ 0．140．62ʃ 0．130．61ʃ 0．09*
120min 0．75ʃ 0．160．69ʃ 0．130．67ʃ 0．140．66ʃ 0．120．64ʃ 0．100．64ʃ 0．11
剂量C /g·kg －1
－8．08．08．08．08．0结扎前J 点位移
U /mV0．46ʃ 0．060．45ʃ 0．050．48ʃ 0．100．46ʃ 0．060．46ʃ 0．070．45ʃ 0．07
*＊＊P ＜0．05，P ＜0．01；n =10与模型对照组比较，
ʃ s ）对急性心肌梗塞范围的影响（x 珋
心室重
m /g1．12ʃ 0．430．99ʃ 0．231．01ʃ 0．221．06ʃ 0．221．11ʃ 0．31
梗死区重m /g0．15ʃ 0．070．17ʃ 0．090．15ʃ 0．080．19ʃ 0．070．16ʃ 0．06
梗死区/心室
（%）
16．04ʃ 10．86*19．12ʃ 11．7715．16ʃ 8．06*17．67ʃ 6．32*15．25ʃ 6．57*
剂量C /g·kg －1
8．08．08．08．08．0
3．2荭草药材不同部位异荭草素、荭草素和原儿茶酸的含量荭草不同药用部位异荭草素、荭草素和原儿茶酸的含量有显著性
以茎枝和叶的含量最高，根和粗茎仅含有少量异荭草素，几差异，
乎不含荭草素和原儿茶酸。结果见表4。
表4
药材部位
根粗茎带叶茎枝花穗
荭草药材不同部位含量测定结果异荭草素0．0160．0210．2070．056
荭草素－0．0070．0980．019
原儿茶酸
－－0．0170．011
%
*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01；n =10与模型对照组比较，
表3
剂量
V /mlA 0．2样品
0．2样品B
0．2样品C
0．2样品D
阳性对照0．2组别
动物数1514151313
ʃ s ）对离体兔心冠脉流量的影响（x 珋冠脉流量/ml·min －1
给药前给药后增加值12．3ʃ 3．516．2ʃ 2．3＊＊3．9ʃ 1．312．9ʃ 2．514．1ʃ 3．11．2ʃ 0．812．5ʃ 3．016．3ʃ 3．7＊＊3．8ʃ 2．712．6ʃ 2．415．3ʃ 3．0*2．7ʃ 0．9
*13．1ʃ 2．915．6ʃ 2．32．5ʃ 0．7
增加率
（%）32．2ʃ 10．29．32ʃ 8．831．1ʃ 12．822．4ʃ 6．319．8ʃ 5．2
“－”表示未检出
*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01；n =10药前与药后比较，
3．3荭草药材不同部位HPLC 指纹图谱各药用部位指纹图谱
的差异直观而明显，根和粗茎的色谱峰较为单一，色谱峰的数量与强度都大大少于花穗和带叶茎枝；花穗和带叶茎枝色谱图的指纹信息较为丰富，具有各自的特征性，又具备一定的相似性，提示花穗和带叶茎枝的有着共同的物质基础。结果见图1 5。
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图1荭草药材根的HPLC
指纹图谱
图2荭草药材粗茎的HPLC
指纹图谱
因此本研究以Langendorff 离体心难评价药物对心脏的直接作用，
脏冠脉灌流量实验，采用兔离体心脏模型比较观测了荭草不同药用部位对冠脉流量的影响。Langendorff 法是筛选心血管药物的常用方法，常使用大鼠或豚鼠，但动物心脏太小操作不便且稳定性和重复性较差，本研究采用兔为实验对象，结果稳定、重复性好。
根据文献报道，荭草素在舒张血管平滑肌，保护急性缺血在体模型心肌、降低整体动物的心肌耗氧及增加心肌供血等方［12 14］
对心血管系统具有广泛的药理作用；原儿茶酸具有降低面
心肌氧耗、缓解心肌局部缺血的作用，在治疗心血管疾病方面也
［15］
有良好的活性，故在选择含量测定的指标成分时，既考虑荭草
又兼顾药材中极性差别较大的黄酮类成分在心血管方面的应用，
确定了含量相对较高而化学性质稳定的荭草素及和酚酸类成分，
同系物异荭草素和原儿茶酸，尽量使测定的指标成分与药材药理活性一致。
本研究采用药效学试验结合化学指标成分及指纹图谱综合
对贵州产药材荭草的根及粗茎、带叶茎枝、花穗等不分析的方法，
同药用部位进行了比较研究。本研究表明，在心血管作用方面带叶茎枝和花穗具有较好的药理活性；理化性质研究的结果显示带叶茎枝和花穗中黄酮类化合物和有机酸类的含量较高，而根及粗茎中黄酮类化合物和有机酸类的含量极低，提示黄酮类化合物和有机酸可能为荭草的有效成分群；指纹图谱信息量的差异亦从更广泛的意义上反映了各药用部位物质基础共性与个性的关系。本研究的后续工作将放大样本量，更进一步、系统地比较荭草中黄酮和有机酸类成分在不同药用部位的分布及不同产地、采收季
将为临床荭草药材节等因素对其产生的影响。以上的研究工作，
的使用是否区分部位或地域提供科学的依据。
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