抗感染药学
抗 感 染 药 学 Ant Inf Pharm 2008 September; 5(3)刘 , . 扬等RP-HPLC 法测定复方珍珠咽喉宁含片中梓醇和甘草酸含量
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·研究生论文·
RP-HPLC 法测定复方珍珠咽喉宁含片中
梓醇和甘草酸含量
刘 扬
1
*1
1*2
龚金红, 储 宁, 许 洁, 张学农, 阮华君, 廖 杰 ,
1
1
1
1*3
2
2
苏州大学药学院, 江苏 苏州 215123; 2浙江长生鸟药业有限公司, 浙江 褚暨 311800
【摘 要】 目的： 同时测定复方珍珠咽喉宁制剂中的梓醇和甘草酸含量, 以控制复方珍珠咽喉宁含片质量。方法：超声提取, 采用 ODS-C18 反相柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 分别用流动相水-乙腈(99.4 ∶ 0.6)和乙腈- φ(乙
的水溶液(33∶ nm检测波长(λ)分别为 和 对梓醇和甘草酸进行测定。结果：采用 φ(甲酸)0.1% 67), 210 254nm 结论：该法简便、快速、专属性强, 适用于咽喉宁含片的含量控制。 含量测定; 【关键词】 咽喉宁口含片; ; 甘草酸梓醇; RP-HPLC
【中图分类号】 R 927.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1672-7878(2008)03-0163-04
超声30 梓醇的平均回收率 甘草酸的平均回收率 。为溶剂, RSD 0.45% min, 98.33RSD 0.78%; 96.89% 醇)50% %, ,
Determination of Glycyrrhizin and Catalpol in Zhenzhu Yanhouning
Buccal Tablets by RP-HPLC
*1
LIU Yang1*2, GONG Jin-hong1, CHU Ning1, XU Jie1, Zhang Xue-nong1*3,
YUAN hua-jun, LIAO Jie
1
22
School of Pharmacy, Soochow University, Suzhou Jiangsu 215123, China
2
Zhejiang changshengniao Pharmarceutical Co., Ltd, Zhuji Zhejiang 311800, China
【ABSTRACT】 Objective: To establish a method for determination of glycyrrhizin and catalpol in Zhenzhu by HPLC. Glycyrrhizin and catalpol were determined by RP-HPLC on C18-column yanhouning buccal tablets Methods:
at 210 nm and 254 nm, with 0.6% acetonitrile and acetonitrile: 0.1% acetic acid solution (33∶67) as mobile phase
respectively. Results: The linearity of this method was good. The average recovery for glycyrrhizin and catalpol were 96.89%(RSD 0.45%) and 98.33%(RSD 0.78%),respectively. Conclusion: The established method is simple, quick and specific, which is suitable for the quality control of the compound drug.
【KEY WORDS】 Zhenzhu yanhouning buccal tablets; glycyrrhizin; Catalpol; determination; RP-HPLC
[Ant Inf Pharm, 2008, 5(3):163~166]
复方珍珠咽喉宁含片是在古代名方“珍珠丸”基础上加减化裁而成, 以珍珠粉、玄明粉、冰
*1
片、硼砂、生地黄、甘草等中药配伍, 共奏清利咽喉, , 消肿止痛解毒生肌之功, 可用于防治急、慢性
【基金项目】：“十一五”国家科技支撑计划(编号: 2006BAI09B00); 浙江省科技厅重点攻关课题(编号: 2004C1201)男讲师, 硕士研究生【作者简介】：*2刘 扬(1978-), ,
【通讯作者】：张学农(1962-), , 教授博士生导师, 主要研究方向: 药物新剂型与新技术
【联系电话】： 0512-66998348 E-mail: [email protected]
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ISSN 1672-7878 / CN 32-1726/R Ant Inf Pharm 抗 感 染 药 学 2008 September; 5(3)
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咽喉炎, 急、慢性扁桃体炎,声带黏膜下出血,声带小结, ,牙周病 口腔溃疡。其中甘草具有清热解毒, 祛痰止咳, 缓急止痛以及调和诸药之功效。甘草酸(glycyrrhizin)为甘草解毒抗炎的有效成分
[1-2]
, 梓醇
(catalpol)是地黄中的主要有效成份之一[2-3] , 故选此2 种成分作为含片质控指标。有关甘草酸的测定方法, 文献报道有重量法、高效毛细管电泳法、比色法、薄层色谱法、气相色谱法、HPLC 法等[4]
;
梓醇的含量测定方法有高效液相色谱法、薄层一比色法、高效毛细管电泳法等 [5]
。中药复方制剂
组分复杂, , 为了有效的控制内在质量采用 RP-HPLC , 法同时测定甘草酸和梓醇含量该方法简便易行, , 结果准确稳定。1 仪器与试剂1.1 仪器
LC-10A 高效液相色谱系统(SPD-M10A 紫外检测器, SCL-10A系统控制器, CTO-10AS 恒温箱;
CR－10A , 数据处理机日本岛津); 色谱柱: Hypersil ODS-C18 (4.6 柱mm×250 mm, 5 μm, 大连依利特公司); (超声波发生器上海科导超声仪器有限公司); 80-2 (型离心沉淀机上海市仪器厂)。1.2 试剂
梓醇(中国药品生物制品检定所, 批号: 110808-200407), (甘草酸单铵盐中国生 物制品检定所 , 批号: 110731-200408) (,乙腈和甲醇美国Tedia Company, 色谱纯), 其余试剂均为分析纯。
复方珍珠宁咽喉宁含片(由苏州大学药剂学教研室自制, : 批号20051215)。2 方法与结果2.1 梓醇含量测定[6-7]
2.1.2 色谱条件
色谱柱:Hypersil ODS-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm,大连依利特公司); : 流动相水-乙腈(99.4∶0.6);
柱温: 40 ℃; 检测波长: 210 nm; 流速: 1.0 mL/min; 进样量: 3 μL。梓醇峰保留时间为 10.5 min。2.2.2 线性考察
取梓醇对照品贮备液(1 mg/mL), 分别进样 0.5,
1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5 μL, 测得梓醇峰面积响应值(A),
以峰面积响应值(A)对进样量(C)回归。回归方程为: A =509 490 C－29 255 (r =0.999 5), 结果表明: 进样量(C)在 0.2~1.2 μg/mL 间有良好的线性。2.2 甘草酸含量侧定[8-9] 2.2.1 色谱条件
色谱柱: Hypersil ODS-C18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm,大连依利特公司);
流动相: 乙腈-φ(乙酸)0.1% 水溶液(33∶67); 柱温: 25 ℃; 检测波长: 254 nm; 流
速: 1.0 mL/min; 进样量: 20 μL。甘草酸的保留时间
为 21.5 min。2.2.2 线性考察 精密量取甘草对照品贮备(1 mg/mL)液 0.05, 0.25,
0.50, 0.75, 1.00, 1.25 mL,
置5 mL 量瓶中, 甲醇定容至刻度, 摇匀。用0.45 μm 微孔滤膜滤过, 取续滤液。分别进样 20.0 μL, 测得甘草酸峰面积响应值(A), 以峰面积响应值(A)对进样量(C)回归。回归方程为:
A = 563636C－28 756 (r = 0.999 7),
结果表明: 进样量在 0.2~4.8 g/mLμ
间有良好的线性。2.3 样品处理 精密量取提取液 2.5 mL, 置 5 mL 量瓶中, 用适量溶媒溶解, , 超声振荡提取冷却, 甲醇定容, 离心
30 min(2 500 r/min), 上清液用 0.45 μm 微孔滤膜滤过, 取续滤液(A 液)备用。精密量取(A )
液 2.5 mL, 置 5 mL 量瓶中, 流动相定容至刻度, 摇匀, 0.45 μm 微孔滤膜滤过, 取续滤液为样品(B )液溶液。2.3.1 提取溶媒选择 分别以 φ(甲醇)50%, φ(乙醇)50%
为溶媒, 超声30 min, 2.2
其余同“”法。含量测定结果表明: 用φ(甲醇)50%
或φ(乙醇)50% 为溶媒提取效果差别不大, 50% φ(甲醇)效果稍好, 故选择 50% φ(甲醇)为提取溶媒, 不同溶媒对梓醇和甘草酸峰面积响应值(A)的影响, 见表1。
2.3.2 超声时间对含量测定影响
以 φ(甲醇)50% , 为溶媒分别超声 20, 30, 40, 50, 60 min, 按“2.2.2”测定。实验结果表明: 超声处理30 min 即可提取完全, 故选择 30 min 为样品超声振荡处理时间, 超声时间对梓醇和甘草酸峰面积响应值(A)影响, 见表 2。2.4 阴性对照溶液的制备
精密量取按处方量不含甘草(或地黄)的药材
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表 1 不同溶媒对梓醇和甘草酸峰面积响应值的影响
甘草酸峰面积响应值(Ax/mUA·S) 梓醇峰面积响应值(Ax/mUA·S)
溶媒
A1 A2 A3 A1 A2 A3
φ(甲醇)50% 4 342 308 4 229 062 4 246 558 4 272 643 139 839 148 709 130 300 139 616 φ(乙醇)50% 4 236 461 4 302 675 4 269 119 4 269 418 112 089 112 381 115 041 113 170
表 2 超声时间对梓醇和甘草酸峰面积响应值的影响时间 甘草酸峰面积(Ax/mUA·S) 梓醇峰面积(Ax/mUA·S)
表 3 甘草酸与梓醇中加样回收率试验比较
样品 样品含量 加入量 实测量 回收率 平均回收率 RSD名称 (c/mg·mL）(c
-1
B
B
(t/min） A1 A2 A1 A2 /mg·mL）(cB/mg·mL）(%) (%) (%)
-1
-1
20 3 311 262 3 189 037 3 250 150 86 054 104 740 95 39730 3 308 162 3 382 131 3 345 147 111 883 103135 107 50940 3 260 188 3 255 650 3 257 919 84 247 82 908 83 57850 3 170 055 3 276 759 3 223 407 133 404 92 598 113 00160 3 166 400 3 217 941 3 192 171 79 646 115 349 97 498
0.098 0 0.354 7 96.94
甘草酸 0.2597 0.078 4 0.335 3 96.43 96.89 0.45 0.049 0 0.307 4 97.29 0.200 0 0.286 7 97.50
梓醇 0.0917 0.100 0 0.190 2 98.50 98.33 0.050 0 0.141 2 99.00
0.78
提取液 2.5 mL, 按“2.2”法处理得阴性对照(C 液) 溶液。甘草酸和梓醇的分离色谱图, 见图1。
2.5 精密度试验
, 同一样品溶液在上述色谱条件下, 重复进样 5 , 次结果求得甘草酸和梓醇的日内 RSD 分别为1.63%, 2.23%; 连续测定 5 d, 得日间 RSD 分别为3.35%, 4.68% 。说明系统和方法的精密度良好, 方
法稳定。 2.6 样品测定
取对照品溶液和样品溶液分别进样测定, 采
.0时间
(t/min)
A.甘草酸对照
品 B.样品C.甘草阴性空白
用外标法测得 3 批样品, 样品中梓醇和甘草酸含量比较, 见表4。
表 4 不同批号样品中梓醇与甘草酸比较
批 号 梓 醇(wB/mg·g) 甘草酸(wB/mg·g)
-1
-1
时间(t/min)
D.梓醇对照品
E.样品F.地黄阴性空白
20050305 4.71 15.5020050310 4.66 15.2820050315 4.87 16.23
图 1 甘草酸与梓醇分离色谱图
2.4 回收率试验
精密量取已知含量(甘草酸或梓醇)2.5mL的提取液各 3 份, 分别分为高、中、低 3 组, 定量加入
不同浓度的对照品(甘草酸或梓醇), 按样品溶液制备方法处理并测定。甘草酸与梓醇中加样回收率
3 讨论
为确定甘草酸和梓醇的最大吸收时的检测波长, 采用紫外分光光度计预先分别对样品溶液、甘草酸
和梓醇对照液在 波长(λ) 200~400 范围内进行扫nm
描, 254 结果发现甘草酸在(λ) 处有最大吸收峰, nm 梓醇和样品中的其它组分吸收微弱
,
梓醇在(λ)
试验比较, 如表 3。
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210 nm 处有最大吸收峰, 甘草酸和样品中的其它组
分吸收微弱。故分别选择(λ) , 作为254nm210nm
甘草酸和梓醇的测定波长。
复方珍珠咽喉宁含片为复方中药制剂,药味复
参考文献
[1] 金 宏.浅谈甘草药理作用[J].李时珍国医国药, 2000,11(1): 78.一部北京化学化业出版社, [2] 国家药典委员会.中国药典[S]. . :
2005: , 59-60274, .82-83
[3] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出杂。HPLC 测定含量时,发现流动相pH 对峰形及
版社,1997:100.分离度的影响较大。加入适量的冰醋酸调节酸
度,起到离子抑制剂的作用,将甘草酸游离出来,使被测成分以分子形式存在,从而改善了峰形,避免了色谱峰的拖尾现象,但 pH 太低不利于色谱柱的保养。HPLC 测定梓醇,文献报道多采用乙腈-水系
统,实验考察了不同浓度的乙腈,结果发现采用 φ(乙腈)0.6% 时,分离效果最好。
[4] 杨文远, 郝凤霞. 用 RP-HPLC 法同时测定甘草中的甘草酸和
甘草次酸[J]. (宁夏大学学报自然科学版), 2005,26(1):56-58.
赵新峰, 孙毓庆.毛细管区带电泳法测定地黄中梓醇的含量 [5] [J].药物分析杂志, 2002, 22(6): 471-473. 汪程远,张 浩,孟 莉,等HPLC 测定地黄及其制剂中梓醇的[6] . 含量[J]. , 华西药学杂志2003, 18(2): 134-135. 罗燕燕,张绍青 高效液相色谱法测定地黄中梓醇的含量[J]. 中[7] .
国药学杂志, 1994, 29(1): 38-39.
[8] . 王 荣,胡晓丽甘草复方制剂中甘草酸含量的 HPLC 测定研究
[J].中国药学杂志, 1996, 31(9): 548-550.
[9] . 王兰霞,杨玲霞,张伯崇RP-HPLC 测定五味沙棘口服液中甘草酸的含量[J].中国药学杂志, 1997, 32(7): 434-435.
(收稿日期：2008-03-19)
以 φ(甲醇)50% 为溶剂,超声振荡提取样品中甘草酸和梓醇, 30 min 即可充分将有效成份提取出来,样品 1 次处理后分别采用不同流动相系统进行同时分离,快速简便,适用于含甘草和地黄制剂的质量控制。
头孢吡肟致神经毒性 1 例
杜月芬
苏州市广济医院,江苏 苏州 215000
【关键词】 头孢吡肟; ; ; 神经毒性慢性肾衰不良反应
【中图分类号】 R 978.11 【文献标识码】 A 【文章编号】 1672-7878(2008)03-0166-01
+
1 临床资料 患者, 男, 60 岁, 因慢性肾衰行 CAPD
治疗, 约3 周后出现乏力、纳差入院。入院第 天, 有2 咳嗽、咳痰及轻度哮喘, 双肺听诊可闻及干、湿罗音, 考虑存在肺部感染,给予头孢哌酮钠/舒巴坦钠3.0g,b.i.d, 静脉滴注。用药 4 d 后肺部感染无明显好转, 换用头孢吡肟(马斯平,中美上海施贵宝制药有限公
阴性菌均有很强的抗菌作用, 药代动力学呈线性,在尿液、胆汁、腹腔、气管粘膜、痰液、胆囊中均可达到
治疗浓度, 并可通过炎性血脑屏障。头孢吡肟80% 经肾分泌排泄, 肾功能不全患者药物的总清除率与肌酐清
h。除率相关, 血液透析患者的平均消除t1/2 (3.5±2.7)
年调查了例有关头孢吡肟Chow 等 56 2003
司)1.0 g, b.i.d, 静脉滴注, 用药 5 d 后患者出现双手抽(42 )例和头孢他啶(12 )例的神经毒性反应情况, 发现最搐症状, 但神志意识清晰,停用头孢吡肟, 至第 天, 7 常见的临床症状为精神错乱伴定向力障碍(占96%),其患者出现四肢抽搐、全身阵挛、牙关紧闭、双眼上次为肌阵挛(33%)和癫痫发作(13%), 并且这些神经学障翻、意识丧失, 持续1.5 予min。考虑中枢神经损害, 碍常见于尿毒症及老年患者。其发生原因, 可能为肾, 补充维生素B1、复合维生素治疗至第12天,患者仍
有小幅度四肢抽搐, 并出现烦躁不安、胡言乱语, 予口服丙戊酸钠缓释片 250 mg, t.i.d, 至第 15 天, 患者症状明显好转, 无意识障碍, 四肢抽搐减少。
功能不全患者肾清除率降低, 导致头孢吡肟在体内过度积蓄, 致脑脊液中头孢吡肟的浓度同步升高, 从而产生中枢神经系统不良反应。因此, 肾功能不全者、老年人应用头孢吡肟应参照肾功能水平调整给药计划。
(收稿日期：2008-05-19)
2 讨论 头孢吡肟为第 4 代头孢菌素, 对革兰阳性和