鱼类不同生长阶段的急性毒性

２０１５年㊀ 第１０卷第５期ꎬ１５０￣１５６

生态毒理学报

V ol. 10, 2015No.5, 150￣156

Asian Journal of Ecotoxicology

DOI:10.7524/AJE.1673￣5897.[1**********]

蒋金花, 吴声敢, 陈江滨, 等. 三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的急性毒性比较[J].生态毒理学报ꎬ2015, 10(5):150￣156

Jiang J H, Wu S G, Chen J B, et al. Acute toxicity effects of triadimefon on different life stages of zebrafish (Danio rerio ) and Chinese rare minnow (Go ￣

biocypris rarus ) [J].Asian Journal of Ecotoxicology, 2015, 10(5):150￣156(inChinese)

三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的急性毒性比较

蒋金花ꎬ吴声敢ꎬ陈江滨ꎬ吴长兴ꎬ蔡磊明ꎬ赵学平*

浙江省农业科学院农产品质量标准研究所省部共建国家重点实验室培育基地 浙江省植物有害生物防控重点实验室农业部农药残留检测重点实验室ꎬ杭州310021收稿日期:2014￣11￣18㊀ ㊀ 录用日期:2014￣12￣30

摘要:为探明三唑酮对鱼类不同生长阶段的毒性效应ꎬ以斑马鱼和稀有鮈鲫为测试生物ꎬ检测了三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的急性毒性差异ꎮ研究发现ꎬ三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎为低毒ꎬ其96h ￣LC 50值分别为21.1(14.4~31.0) 和14.2(9.65~20.9) mg L ￣1ꎻ高浓度的三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎的孵化有明显的抑制作用ꎬ染毒96h 后ꎬ23.7mg L ￣1三唑酮组斑马鱼胚胎的孵化率为4.17%ꎬ22.5mg L ￣1三唑酮组稀有鮈鲫胚胎的孵化率为33.3%ꎮ三唑酮对斑马鱼仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼为低毒ꎬ其96h ￣LC 50值分别为24.8㊁ 21.3㊁ 13.1mg L ￣1ꎬ三唑酮对稀有鮈鲫仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼为中毒ꎬ其96h ￣LC 50值分别为鱼>幼鱼>仔鱼ꎮ试验结果表明ꎬ相对于斑马鱼ꎬ稀有鮈鲫对三唑酮的毒性作用更为敏感ꎬ三唑酮对稀有鮈鲫不同生长阶段的毒性均高于斑马鱼相应生长阶段的毒性ꎮ关键词:三唑酮ꎻ斑马鱼ꎻ稀有鮈鲫ꎻ急性毒性

文章编号:1673￣5897(2015) 5￣150￣07㊀ ㊀ 中图分类号:X171.5㊀ ㊀ 文献标识码:A

9.96㊁ 7.89㊁ 6.89mg L ￣1ꎮ因此ꎬ三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的毒性效应排序一致ꎬ毒性从高到低顺序依次为:成

ＡｃｕｔｅＴｏｘｉｃｉｔｙＥｆｆｅｃｔｓｏｆＴｒｉａｄｉｍｅｆｏｎｏｎＤｉｆｆｅｒｅｎｔＬｉｆｅＳｔａｇｅｓｏｆＺｅｂｒａｆｉｓｈ(Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ) ａｎｄＣｈｉｎｅｓｅＲａｒｅＭｉｎｎｏｗ(Ｇｏｂｉｏｃｙｐｒｉｓｒａｒｕｓ)

Jiang Jinhua, Wu Shenggan, Chen Jiangbin, Wu Changxing, Cai Leiming, Zhao Xueping *

State Key Laboratory Breeding Base for Zhejiang Sustainable Pest and Disease Control, Key Laboratory for Pesticide Residue Detec ￣tion of Ministry of Agriculture, Institute of Quality and Standard for Agro ￣Products, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hang ￣zhou 310021, China

Ｒｅｃｅｉｖｅｄ18November 2014㊀ ㊀ ａｃｃｅｐｔｅｄ30December 2014

Ａｂｓｔｒａｃｔ:To explore the toxic effects of triadimefon on fish at different life stages, the differences in acute toxicity of triadimefon to zebrafish (Danio rerio ) and Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus ) at different life stages were evaluated. The results showed that triadimefon was low toxic to the embryos of both zebrafish and rare minnow, and the 96h ￣LC 50value was 21.1(14.4~31.0) and 14.2(9.65~20.9) mg L ￣1, respectively. An obvious inhibition of

㊀ ㊀ 基金项目:浙江省农业科学院科技创新能力提升工程项目

㊀ ㊀ 作者简介:蒋金花(1985￣) ꎬ女ꎬ博士ꎬ研究方向为农药毒理学ꎬE ￣mail:[email protected]ꎻ㊀ ㊀ *通讯作者(Corresponding author )ꎬE ￣mail:[email protected]

embryos hatching for both fish was observed after the exposure to high concentration of triadimefon for 96h, and the hatching rate was 4.17%and 33.3%when the embryos of zebrafish and rare minnow were exposed to 23.7and 22.5mg L ￣1triadimefon, respectively. Triadimefon exhibits low toxic to the larvae, juvenile, and adult of zebrafish with the 96h ￣LC 50values of 24.8, 21.3, and 13.1mg L ￣1respectively. Triadimefon shows moderately toxic to the larvae, juvenile, and adult of rare minnow with the 96h ￣LC 50values of 9.96, 7.89, and 6.89mg L ￣1. The trend of triadimefon acute toxicity to zebrafish and rare minnow at different life stages was the same:adult>juvenile>larva,and rare minnow was more sensitive to triadimefon during different life stages compared with zebrafish. Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:triadimefon; zebrafish (Danio rerio ); Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus ); acute toxicity ㊀ 至今已有㊀ 三唑酮是我国第一个商品化的三唑类杀菌剂20多年的应用历史ꎮ由于其对作物多种ꎬ病原菌具有高效㊁ 内吸㊁ 广谱的作用ꎬ而成为目前应用范围广㊁ 防治效果好㊁ 最具开发应用潜力的一类杀菌剂ꎮ三唑酮在农田施用后能够向土壤深处迁移和扩散ꎬ通过雨水的淋溶作用进入水体造成水体污染ꎬ进而影响水生生物ꎮ研究发现ꎬ三唑酮对斑马鱼成鱼96h 急性毒性为低毒ꎬ96h ￣LC 50值为13.8(11.3~

14.8) mg L ￣1[1]眼睛发育不全[ꎬ2三唑酮可以造成斑马鱼胚胎畸形和]增加ꎬ其造成的环境风险也越来越受到重视ꎮ随着三唑类杀菌剂的使用量逐年ꎬ目前ꎬ已有大量三唑类杀菌剂包括三唑酮对哺乳动物毒理研究的文献报道ꎬ但三唑酮对水生生物不同生长阶段的毒性效应的研究较少ꎬ因此研究三唑酮对不同水生生物的毒性效应对评价三唑酮的环境风险和安全使用具有重要意义ꎮ

农药多数通过飘移或地下水渗漏进入水体造成水污染ꎬ鱼类是水环境中的主要生物之一ꎬ鱼类的生态毒理反应和变化可作为水环境评价的良好指标ꎬ因此以鱼类为受试对象的毒性试验在评价化学品环境效应方面起着重要作用ꎮ目前OECD ㊁ EPA ㊁ ISO 等各国组织机构常用的生态毒性检测鱼种是斑马鱼(Danio rerio ) ꎬ因其价格低廉㊁ 容易获得㊁ 管理饲养易行等诸多因素受到许多环保组织或国家的重视ꎬ他们已经将化学品对其急/慢性毒性效应作为评价污染物对水生环境危害程度的指标ꎮ我国尚没有建立起标准的实验鱼类ꎬ目前国内有能力提供生态毒性数据的实验室采用的试验用鱼还局限于国际通用种ꎬ缺乏本土生物的生态毒性数据不但影响了对化学品安全性的全面评价ꎬ也难以满足我国化学品管理的需要ꎮ2003年ꎬ我国颁布的«新化学物质环境管理办法»[3]中明确规定: 新化学物质的生态毒理学数据必须包括在中国境内用中国的供试生物完成的测试数据 ꎬ 稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus ) 被推荐为我国化学品毒性测试生物之一ꎮ稀有鮈鲫具有性成熟快㊁ 易于饲养ꎬ在实验室内可周年产卵㊁ 连续产卵等优点ꎬ20世纪90年代ꎬ中国科学院水生生物研究所就开始对其进行了基本生物学研究[4]中国科学院水生生物研究所㊁ 中国科学院生态环境ꎮ目前ꎬ

研究中心等正利用稀有鮈鲫为试验材料在 评价内分泌干扰物长期低剂量暴露影响的鱼类实验模型 ㊁ 环境内分泌干扰物的生物筛选 等方面开展工作ꎮ但作为一种新兴实验鱼种来说ꎬ生态毒性数据还不全面ꎬ也没有形成完善的检测评价体系ꎬ目前关于化学品对稀有鮈鲫某一生长阶段的急性毒性或者慢性毒性效应研究较多[5￣9]斑马鱼不同生长阶段的毒性差异研究还十分有限ꎬ但对于稀有鮈鲫和ꎬ为了更好的证实稀有鮈鲫是进行化学品毒性测试和

环境水样毒性实验的模式生物ꎬ本研究以斑马鱼和稀有鮈鲫为供试生物模型ꎬ研究了三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的毒性效应ꎬ通过比较三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫的毒性差异ꎬ丰富稀有鮈鲫的毒性实验数据库ꎬ为稀有鮈鲫发展成为国际通用种提供理论数据支撑ꎮ试验结果对进一步研究三唑酮的致毒机制具有一定的现实意义ꎬ也为评价三唑酮的安全使用提供科学依据ꎮ１㊀１.１㊀材料与方法(Ｍａｔｅｒｉａｌｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓ) 仪器仪器与试剂

:24孔细胞培养板和6孔细胞培养板均购自浙江拱东医疗科技有限公司ꎬ分别作为胚胎和仔鱼染毒器具ꎮ

试剂:三唑酮原药(97.1%)ꎬ江苏盐城利民农化有限公司ꎻ分析纯吐温￣80ꎬ国药集团化学试剂有限公司ꎻN,N ￣二甲基甲酰胺(DMF)ꎬ天津市福晨化学试剂厂１.２㊀ꎮ

稀有鮈鲫种鱼购自江苏无锡中科水质环境技术实验材料

有限公司ꎬ斑马鱼种鱼购自武汉中科院水生生物研

１５２生态毒理学报第10卷

究所的国家斑马鱼资源中心ꎬAB 型品系ꎬ本试验所用斑马鱼和稀有鮈鲫的胚胎㊁ 仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼均系其繁殖所得ꎮ斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎分别为同一天收集的健康胚胎ꎻ仔鱼为孵化后8日龄ꎻ幼鱼为孵化后55日龄ꎻ成鱼为3月龄ꎮ仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼均于正式试验前24h 停止投饵ꎮ

试验用水为曝气除氯并经活性炭过滤的自来14h/10h ꎬ溶解氧ȡ 5.8mg L ꎮ

￣1

表１㊀三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段

的急性毒性试验浓度

Table 1㊀ The acute toxicity concentration of triadimefon to different life stages of zebrafish and rare minnow

试验动物Animals

生命阶段Life stages 胚胎Embryo

斑马鱼Zebrafish

仔鱼Larvae 幼鱼Juvenile 成鱼Adult 试验浓度/(mg L ￣1)

Concentration/(mg L ￣1)

7.02㊁ 10.5㊁ 15.8㊁ 23.7㊁ 35.6㊁ 53.3㊁ 80.0

12.1㊁ 14.5㊁ 17.4㊁ 20.8㊁ 25.0㊁ 30.015.5㊁ 17.1㊁ 18.8㊁ 20.7㊁ 22.7㊁ 25.0水ꎬ水温为(25ʃ 1) ħ ꎬpH 控制在6.5~7.5ꎬ光/暗比为

１.３㊀１.３.１㊀试验方法

三唑酮原药用吐温试验药液配制

￣80和DMF 溶解ꎬ经超声混

匀定容后配制成一定浓度的标准储备液ꎬ冷藏备用ꎮ试验时ꎬ用移液器吸取适量储备液加入定量的标准稀释水ꎬ超声混匀ꎬ按相应倍数逐级稀释至设计浓度ꎮ试验期间各试验容器内助溶剂DMF 在水中最

终浓度均未超过«化学品鱼类急性毒性试验0.100mg »

L ￣1

[10]

ꎮ方法配制标准稀释水按照１.３.２㊀胚胎染毒试验ꎮ

参考ꎬ通过立体显微镜观察世界经济合作与发展组织(OECD ) 方

法

[11]

精卵供试ꎮ采用24孔细胞培养板ꎬ挑选发育正常的健康受

ꎬ每孔加入2mL

供试药液并放入1枚受精卵ꎮ根据预备试验结果ꎬ设定三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎毒性试验浓度(以稀释水为空白对照组表1)ꎬ按最高浓度组的助剂浓度设置助剂对照组ꎮ每浓度设2次重复ꎬ每重ꎬ复为1个24孔板ꎮ

染毒期间环境温度为(25ʃ 1) ħ ꎬ光/暗比为14h/10h ꎮ每24h 更换1次溶液ꎮ试验期间分别于6㊁ 24㊁ 48㊁ 72㊁ 96h 时间点观察并记录死亡数㊁ 孵化数及１.３.３㊀相关中毒症状根据仔鱼OECD ㊁ 幼鱼和成鱼试验ꎬ并及时取出死亡个体ꎮ

TG 203[12]方法ꎬ设计不同生长阶段

的斑马鱼和稀有鮈鲫急性毒性试验ꎮ根据预备试验结果ꎬ设定斑马鱼和稀有鮈鲫仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼的试验浓度(表1)ꎬ按最高浓度组的助剂浓度设助剂对照组ꎬ以稀释水为空白对照组ꎮ

试验用水为曝气除氯并经活性炭过滤的自来水ꎮ仔鱼急性毒性试验采用6孔板ꎬ每孔放入3条仔鱼ꎬ设2次重复ꎬ每重复为1个6孔板ꎻ幼鱼和成鱼采用6L 鱼缸ꎬ每缸15条鱼ꎬ均设2次重复ꎮ仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼的试验过程均采用 半静态法 ꎬ每24h 更换1次药液ꎮ

8.04㊁ 9.65㊁ 11.6㊁ 13.9㊁ 16.7㊁ 20.0胚胎Embryo

4.44㊁ 6.67㊁ 10.0㊁ 15.0㊁ 22.5稀有鮈鲫仔鱼Larvae 6.70㊁ 8.04㊁ 9.65㊁ 11.6㊁ 13.9㊁ 16.7㊁ Rare minnow

幼鱼Juvenile 20.0

成鱼Adult

4.02㊁ 4.82㊁ 5.79㊁ 6.94㊁ 8.33㊁ 10.05.63㊁ 6.75㊁ 8.10㊁ 9.72㊁ 11.7㊁ 14.0

试验期间分别于6㊁ 24㊁ 48㊁ 72和96h 时间点观察并记录各组斑马鱼和稀有鮈鲫中毒症状及死亡情况ꎬ每隔24h 检查1次各组的pH 值及溶解氧含量ꎬ并１.４㊀及时清除死鱼数据处理ꎮ

用DPS 数据处理系统(9.50标准版ꎬ浙江大学)

计算斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎㊁ 仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼的LC 50值及其95%置信区间ꎬ分析三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫各生长阶段的毒性差异ꎮ２㊀结果三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎的毒性效应

(Ｒｅｓｕｌｔｓ) ２.１.１㊀２.１㊀图致死效应

1为斑马鱼胚胎经不同浓度三唑酮处理不同时间后的死亡率ꎮ最高试验浓度80.0mg L ￣1三唑酮处理组24h 时胚胎的死亡率为29.2%ꎬ在48h 时死亡率已达100%ꎻ在24~96h 内ꎬ53.3㊁ 35.6㊁ 23.7㊁ 15.8㊁ 10.5㊁ 7.02mg L ￣1

三唑酮处理组的胚胎死亡率

图１㊀三唑酮对斑马鱼胚胎死亡率的影响

Fig. 1㊀ Effect of triadimefon on mortality rate of zebrafish embryos

逐渐增加ꎬ96h 时死亡率分别为87.5%㊁ 58.3%㊁ 29.2%㊁ 20.8%㊁ 8.30%㊁ 4.17%ꎮ相对于药剂处理组ꎬ空白对照组和助剂对照组对斑马鱼胚胎的死亡率没有影响ꎮ

图2为稀有鮈鲫胚胎经不同浓度三唑酮处理不同时间后的死亡率ꎮ在24~96h 内ꎬ随着暴露时间的延长ꎬ三唑酮各浓度处理组的胚胎死亡率逐渐增加ꎬ72h 后各处理组的死亡率显著增加ꎻ在96h 时ꎬ4.44㊁ 6.67㊁ 10.0㊁ 15.0和22.5mg L ￣1试验组的死亡率分别为0%㊁ 16.7%㊁ 27.8%㊁ 50.0%和83.3%ꎮ稀有鮈鲫孵化时间约为卵产出后72h ꎬ因此72h 为其孵化出卵壳的关键时间ꎬ从图2可见ꎬ72~96h 为三唑酮对稀有鮈鲫胚胎毒性作用最明显的时间段ꎮ相对于药剂处理组ꎬ空白对照组和助剂对照组对稀有鮈鲫胚胎的死亡率没有影响ꎮ

结果表明ꎬ三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎的毒性随处理浓度的增大而增加ꎬ同时随暴露时间的延长而增加ꎬ显示一定的剂量￣效应和时间￣效应关系

ꎮ

２.１.２㊀亚致死效应

图3为不同浓度三唑酮处理后斑马鱼胚胎孵化

率的变化趋势ꎮ在三唑酮作用下ꎬ斑马鱼胚胎孵化率随着三唑酮浓度的增大而降低ꎬ高浓度的三唑酮对斑马鱼胚胎的孵化有明显的抑制作用ꎬ35.6mg L ￣1的三唑酮可以完全抑制胚胎的孵化ꎮ染毒96h 后ꎬ23.7㊁ 15.8㊁ 10.5㊁ 7.02mg L ￣1的三唑酮对斑马鱼胚胎的孵化率分别为4.17%㊁ 50.0%㊁ 91.7%㊁ 91.7%ꎮ空白对照组和助剂对照组对斑马鱼胚胎的孵化率没有影响ꎮ

图4为不同浓度三唑酮处理后对稀有鮈鲫胚胎孵化的影响ꎮ稀有鮈鲫胚胎孵化的最早时间为染毒48h 后ꎬ22.5mg L ￣1的三唑酮对稀有鮈鲫胚胎的孵化有明显的抑制作用ꎬ染毒72和96h 时ꎬ22.5mg L ￣1的三唑酮对稀有鮈鲫胚胎的孵化率分别为27.8%和33.3%ꎮ其余浓度(4.44~15.0mg L ￣1) 对稀有鮈鲫胚胎孵化的影响与空白对照和助剂对照组相近ꎮ

试验表明ꎬ高浓度的三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎的孵化都有一定程度的抑制作用ꎮ在相同培养条件下ꎬ三唑酮对斑马鱼胚胎孵化的影响高于对２.２㊀三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼的急性毒性

㊀ ㊀ 研究发现ꎬ随着三唑酮浓度的增加ꎬ斑马鱼和稀稀有鮈鲫胚胎孵化的影响ꎮ

图２㊀三唑酮对稀有鮈鲫胚胎死亡率的影响Fig. 2㊀ Effect of triadimefon on mortality

rate of rare minnow embryos

㊀ ㊀ 表2为96h 时三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎的半致死浓度(LC50) 及95%置信区间ꎮ从中可看出ꎬ三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎96h ￣LC 50值分别为21.1(14.4~31.0) 和14.2(9.65~20.9) mg L , 因此稀有鮈鲫胚胎对三唑酮比较敏感ꎬ三唑酮对稀有鮈鲫胚胎的毒性高于斑马鱼胚胎ꎮ

表２㊀三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎的急性毒性(９６ｈ)

￣1

图３㊀三唑酮对斑马鱼胚胎孵化率的影响Fig. 3㊀ Effect of triadimefon on hatching

rate of zebrafish embryos

Table 2㊀ The acute toxicity of triadimefon to the embryo of zebrafish and rare minnow (96h)

试验动物Animals 斑马鱼Zebrafish 稀有鮈鲫Rare minnow

毒力回归方程Toxic regression equation

相关系数Relative coefficient

0.88170.8913

LC 50(95%置信区间)/(mg L ￣1)

LC 50(95%CI)/(mg L ￣1) 21.1(14.4~31.0) 14.2(9.65~20.9)

y =2.0535+5.3269x y =3.4447+7.3271x

１５４生态毒理学报第10

卷

性ꎬ与三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫胚胎的毒性结果一致ꎮ

３㊀讨论(Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ)

毒性研究是热点问题ꎬ一般情况下ꎬ以一种鱼类模式生物的急性毒性结果作为化学品的生态毒理学数据ꎬ可能会造成对本土生物的欠保护或过保护ꎬ也无法对化学品安全性作出全面的评价ꎮ本试验分别以胚胎㊁ 8日龄仔鱼㊁ 55日龄幼鱼和3月龄成鱼为研

图４㊀三唑酮对稀有鮈鲫胚胎孵化率的影响

Fig. 4㊀ Effect of triadimefon on hatching rate of rare minnow embryos

究样本ꎬ以国际通用种斑马鱼和我国特有种稀有鮈鲫为测试生物ꎬ研究了三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的急性毒性影响ꎮ三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫的毒性影响涵盖了鱼类生长的整个生命周期ꎬ所得结果可以为三唑酮的毒性效应以及生态风险评价提供基础数据ꎮ通过比较三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的毒性效应ꎬ丰富本土生物稀有鮈鲫的毒性实验数据库ꎬ以完善相关毒性效应研究的基础数据ꎬ满足我国化学品管理的需要ꎬ并为制定合理的测试导则提供参考ꎬ也为选择更为合适的本土模式生物来评价不同化合物的毒性效应提供数据支撑ꎮ

在相同培养条件下ꎬ高浓度的三唑酮对斑马鱼胚胎的孵化有明显的抑制作用ꎬ35.6mg L ￣1的三唑酮可以完全抑制胚胎的孵化ꎬ染毒96h 后ꎬ23.7mg L ￣1三唑酮组中稀有鮈鲫胚胎的孵化率为33.3%ꎮ由此可见ꎬ三唑酮对斑马鱼胚胎的孵化影响高于对鮈鲫不同生长阶段的急性毒性测定结果显示ꎬ三唑酮对斑马鱼仔鱼㊁ 幼鱼和胚胎的毒性相当ꎬ96h ￣LC 50值分别为24.8㊁ 21.3和13.1mg L ￣1ꎬ斑马鱼成鱼对三唑酮最为敏感ꎬ稀有鮈鲫不同生命阶段对三唑酮毒性的敏感性从高到低顺序依次为:胚胎>成鱼>稀有鮈鲫胚胎孵化的影响ꎮ三唑酮对斑马鱼和稀有L ￣1三唑酮组中斑马鱼胚胎孵化率为4.17%ꎬ22.5mg

有鮈鲫仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼的死亡率都出现逐渐上升的趋势ꎬ说明三唑酮和毒性之间存在剂量￣效应关系ꎮ试验期间ꎬ经三唑酮染毒处理后ꎬ中毒症状随浓度的提高而越发明显ꎮ高浓度的三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫成鱼的毒性作用比较明显ꎬ染毒初期主要表现为快速游动ꎬ焦躁不安ꎬ随着染毒时间的延长ꎬ鱼游动变得迟缓ꎬ对外界刺激变得迟钝ꎬ个别鱼出现侧翻失衡及沉底现象ꎬ最终死亡ꎮ三唑酮处理后ꎬ斑马鱼和稀有鮈鲫仔鱼和幼鱼的早期中毒症状不明显ꎬ随着染毒时间延长ꎬ个别鱼体出现侧翻ꎬ脊柱弯曲或者鱼体变白腐烂等中毒症状ꎮ低浓度三唑酮处理组的斑马鱼和稀有鮈鲫无异常症状ꎬ与空白对照和助剂对照组基本相似ꎮ

三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫3个不同生长阶段的急性毒性见表3ꎬ三唑酮对斑马鱼仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼的96h ￣LC 50值分别为24.8㊁ 21.3㊁ 13.1mg L ￣1ꎬ三唑酮对稀有鮈鲫仔鱼㊁ 幼鱼和成鱼的96h ￣LC 50值分别为9.96㊁ 7.89㊁ 6.89mg L ￣1ꎬ因此ꎬ三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生命阶段的毒性从高到低顺序依次为:成鱼>幼鱼>仔鱼ꎮ研究表明ꎬ稀有鮈鲫对三唑酮比较敏感ꎬ三唑酮对稀有鮈鲫不同生命阶段的毒性均高于斑马鱼相应生长阶段的毒

表３㊀三唑酮对斑马鱼和稀有鮈鲫不同生长阶段的急性毒性(９６ｈ)

Table 3㊀ The acute toxicity of triadimefon to different life stages of zebrafish and rare minnow (96h)

试验动物Animal 斑马鱼Zebrafish

生命阶段Life stages 仔鱼Larvae 幼鱼Juvenile 成鱼Adult 仔鱼Larvae 幼鱼Juvenile 成鱼Adult

毒力回归方程Toxic regression equation

相关系数(r ) Relative coefficient

0.91590.92610.92680.94440.94210.9146

LC 50(95%置信区间)/(mg L ￣1)

LC 50(95%CI)/(mg L ￣1) 24.8(20.8~29.5) 21.3(19.8~22.9) 13.1(11.6~14.9) 9.96(8.83~11.2) 7.89(6.91~9.01) 6.89(5.79~8.20)

毒性等级Toxicity grade 低毒Low 低毒Low 低毒Low 中毒Moderate 中毒Moderate 中毒Moderate

y =4.4198+6.7570x y =60.0696+48.9761x y =17.5925+20.1938x y =16.0638+21.1042x y =10.5405+17.3248x y =11.2995+19.4496x

稀有鮈鲫Rare minnow

幼鱼>仔鱼(96h ￣LC 50值分别为14.2㊁ 9.96㊁ 7.89㊁ 6.89

zebrafish (Danio rerio ) exposure to triazole fungicides [J].Journal of Southeast University :Medical Edition, 2010, 29(4):402－406(inChinese)

[2]㊀ Sanne A B H, Evert ￣Jan van den B, Leo T M, et al. Rela ￣

tive embryo toxicity of two classes of chemicals in a modified zebrafish embryo toxicity test and comparison with their in vivo potencies [J].Toxicology in Vitro, 2011, 25:745－753

[3]㊀ 国家环境保护总局. 新化学物质环境管理办法[EB/

OL].[2014￣11￣14].http://www.zhb. gov. cn/gkml/hbb/bl/mg L ￣1)ꎮ根据国家环境保护局制定的«化学农药环境安全评价试验准则»[13]中将农药对鱼类的毒性等级划分为4个等级:剧毒ꎬLC 50ɤ 0.1mg L ￣1ꎻ高L ꎻ低毒ꎬLC 50>10mg L ꎬ因此97.1%三唑酮原药

￣1

￣1

毒ꎬ0.1

欧盟(EU)和世界自然基金(WWF)把三唑酮列为具有生殖和内分泌干扰毒性的杀菌剂之一ꎮ三唑酮主要通过影响甾醇14￣α脱甲基酶(CYP51)和芳香酶(CYP19)ꎬ从而影响类固醇生成ꎬ具有一定的拟雌激素活性

[14]

发育过程中的类固醇合成途径中关键元件的基因表ꎮ研究发现ꎬ三唑酮对小鼠和斑马鱼胚胎

达具有一定的调控作用[15￣16]和人类肝脏细胞具有相同的毒性效应ꎮ同时ꎬ三唑酮对大鼠ꎬ可以调控雌雄激素代谢ꎬ脂肪酸以及固醇和类固醇代谢途径相关基因的表达[17]生物具有类似的毒性效应ꎮ现有研究表明ꎬ但其具体的毒性机制还ꎬ三唑酮对不同的有待进一步研究ꎮ已有报道显示ꎬ三唑酮对日本青鳉不同生命阶段的毒性为仔鱼>幼鱼>)ꎬ成鱼说明三唑

(96h ￣LC 50值分别为12.5㊁ 11.0㊁ 0.354mg L

￣1[18]

酮对斑马鱼㊁ 稀有鮈鲫和日本青鳉不同生长阶段的毒性差异大ꎬ三唑酮对日本青鳉不同生长阶段的毒性均高于斑马鱼ꎬ日本青鳉成鱼对三唑酮最为敏感ꎮ斑马鱼㊁ 日本青鳉和稀有鮈鲫不同生长阶段对三唑酮敏感性差异的具体原因ꎬ应该从这3种生物的基因组差异来进一步研究ꎬ从分子和蛋白水平来研究三唑酮对斑马鱼㊁ 日本青鳉和稀有鮈鲫的胚胎毒性㊁ 致畸性㊁ 神经毒性以及内分泌干扰效应ꎬ进一步讨论三唑酮的致毒机制ꎮ

通讯作者简介:赵学平(1969￣) ꎬ男ꎬ本科ꎬ研究员ꎬ主要研究方向为农药应用与毒理学ꎬ发表学术论文60余篇ꎮ参考文献(Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ):

[1]㊀ 郭晶, 宋文华, 丁峰, 等. 三唑类杀菌剂对斑马鱼急性

毒性研究[J].东南大学学报:医学版, 2010, 29(4):402－406

Guo J, Song W H, Ding F, et al. Acute toxicity study on

201002/t20100201_185231.htm

[4]㊀ 王剑伟. 稀有鮈鲫的繁殖生物学[J].水生生物学报,

1992, 16(2):165－175

Wang J W. Reproductive biology of Gobiocypris rarus [J].Acta Hydrobiologica Scinica, 1992,16(2):165－175(inChinese)

[5]㊀ 李莉, 马陶武, 吴振斌. 生活污水对稀有鮈鲫的毒性效

应研究[J].水生生物学报, 2004, 28(1):40－44

Li L, Ma T Y, Wu Z B. Toxic effect of domestic sew age on rare minnow (Gobiocypris rarus ) [J].Acta Hydrobio ￣logica Sinica, 2004, 28(1):40－44(inChinese)

[6]㊀ 熊力, 马永鹏, 毛思予, 等. 五氯酚对稀有鮈鲫胚胎毒

性效应研究[J].中国环境科学, 2012, 32(2):337－344Xiong L, Ma Y P, Mao S Y, et al.Toxic effects of penta ￣chlorophenol on the Chinese rare minnow embryos [J].China Evironmental Science, 2012, 32(2):337－344(inChinese)

[7]㊀ 廖朝选, 杨鸿波, 杨昌彪, 等. 邻香草醛对稀有鮈鲫的

急性毒性研究[J].贵州科学, 2013, 31(6):69－71Liao C X, Yang H B, Yang C X, et al. Research of acute toxicity of O ￣vanillin on Gobiocypris rarus [J].GuizhouScience, 2013, 31(6):69－71(inChinese)

[8]㊀ 塔娜, 房彦军, 林本成, 等. 磷酸三(2,3￣二氯丙基) 酯阻

燃剂对稀有鮈鲫的毒性效应[J].生态毒理学报, 2013, 8(5):757－762

Ta N, Fang Y J, Lin B C, et al. Toxic effect of tri (2,3￣di ￣chloroprophyl) phosphate flame retardant on rare minnow ㊀ gy, (Gobiocypris 2013, 8(5):757rarus －762) [J].(inAsian Chinese)

Journal of Ecotoxicolo ￣[9]㊀ 辛苗苗, 危起伟, 王志坚, 等. 对硝基酚对稀有鮈鲫胚

胎的急性毒性[J].淡水渔业, 2014, 44(5):43－48Xin M M, Wei Q W, Wang Z J, et al. Acute toxicity of p ￣nitrophenol to Gobiocypris rarus [J].Freshwater Fisheries, 2014, 44(5):43－48(inChinese)

[10]㊀ 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局ꎬ中国国

家标准化管理委员会.GB/T27861￣2011, 化学品鱼类急性毒性试验[S].北京:中国标准出版社ꎬ2011[11]㊀ Organization for Economic Co ￣operation and Develop ￣

１５６生态毒理学报第10卷

ment (OECD).Test No. 236:Fish Embryo Acute Toxicity (FET)Test [S].OECD ꎬ2013

[12]㊀ Organization for Economic Co ￣operation and Develop ￣

ment (OECD).Test No. 203:Fish, Acute Toxicity Test [S].OECD ꎬ1992

[13]㊀ 国家环境保护总局. 化学农药环境安全评价试验准则

[R].国家环境保护总局, 2003

[14]㊀ Zarm J A, Bruschweiler B J, Schlatter J R. Azole fungi ￣

cides affect mammalian steroidogenesis by inhibiting ste ￣[16]㊀ Sanne A B H, Tessa E P, Evert ￣Jan van den B, et al. Tria ￣

zole ￣induced gene expression changes in the zebrafish embryo [J].Reproductive Toxicology, 2012, 34:216－224[17]㊀ Goetz A K, Dix D J. Toxicogenomic effects common to

triazole antifungals and conserved between rats and hu ￣mans [J].Toxicology and Applied Pharmacology, 2009, 238(1):80－89

[18]㊀ 张陆伟, 蔡磊明, 赵学平, 等. 3种杀菌剂对日本青鳉的

急性毒性研究[J].安徽农业科学, 2012, 40(36):17562－rol l4alpha ￣demethylase and aromatase [J].Environmen ￣tal Health Perspectives, 2003, 111(3):255－261

[15]㊀ Robinson J F, Tonk E C, Verhoef A, et al. Triazole in ￣

duced concentration ￣related gene signatures in rat whole embryo culture [J].Reproductive Toxicology, 2012(34):275－283

17563, 17566

Zhang L W, Cai L M, Zhao X P,et al. The acute toxicity study of three fungicides to Japanese medaka (Oryzias

latipes ) [J].Journal of Anhui Agriculture Science, 2012, 40(36):17562－17563, 17566(inChinese)

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