粗蛋白注意事项
序号实验项目操作内容注意事项
1 样品制备选取有代表性的样品用四分法缩减至200g ，粉碎后全部通过40目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。
2 样品称量称取0.2～0.4g 试样（含氮量5～80mg ）准确至0.0002g ，无损失地放入凯氏烧瓶中，并记录对应编号消化管内样品的名称及质量无损失操作要点：
1．可将称量纸一同消化，但要增加一个称量纸的空白
2．称量完之后将称量纸放回天平，看是否归零，如不归零，减去相应的质量。
3 消化准备往消化管中加入6.4g 混合催化剂，摇匀，再加入10-12ml 浓硫酸。混合催化剂一定要均匀
浓硫酸具有强腐蚀性，注意操作安全
4 消化控制消化炉温度420℃，消化2-3h 1．消化开始阶段可控温300度左右消化半小时，以防泡沫产生。
2．消化时一定要加盖抽汽装置，以防酸雾溢出。
3．样品消化完全时一定是蓝色透明液体，如有黑色残留，说明没有消化完全。
4．消化完毕之后，先关闭消化炉，为避免酸雾溢出，待稍冷却之后再关闭水龙头。
5．消化后的液体冷却时会析出晶体，属正常现象。
5 洗涤机器用约50ml 蒸馏水，在不加碱和硼酸、指示剂的情况下蒸馏，洗涤2-3次
6 空白测定称取约0.5g 蔗糖，按照消化步骤进行消化, 待冷却后, 加入80ml 蒸馏水，摇匀，将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25ml 硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶中，打开蒸汽开关，加入一定量的碱液，蒸馏至体积150ml 左右，降下锥形瓶，使吸收管末端离开液面，继续蒸馏1min 后停止蒸馏，用蒸馏水冲洗吸收管末端，洗液冲入锥形瓶。
7 氨的蒸馏将消化后的试样消煮液冷却，加约80ml 蒸馏水，按照空白的蒸馏方式蒸馏。控制合适加碱量。当加碱后出现黑色继续加5-10ml 即可
8 滴定将蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L标准盐酸滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 9 计算
v2—试样滴定时所需酸标准溶液的体积（m1）；
v1—空白滴定时所需酸标准溶液的体积(m1)；
c —盐酸标准溶液的浓度(mol/L)；
m 一试样的质量（g ）；
F —氮与粗蛋白换算系数
0.0140—每ml HCl标准溶液相当于N 的克数；
10 测定步骤检验精确称取0.2g 硫酸铵，代替试样，按测定步骤文字中的各步骤操作，并按公式计算（但不乘系数6.25）。测得硫酸铵含氮量应为21.19±0.2％，否则应检查加碱，蒸馏和滴定各步骤是否正确。
误差来源控制方案
样品抽样取样要有代表性、真实性
制备样品要有一定数量
充分混匀，用四分法缩分
粉碎至能全部通过40目
试剂试剂规格按照标准要求选购一定规格的试剂，控制杂质量
配制方法区分精确配制和粗配制，按照GB/T601，GB/T602，GB/T603的要求配制和标定，不能想当然
保存按照试剂的保存要求（避光、塑料瓶、阴凉等条件限制）存放
注意试剂的保存期限
称样称样量称样量要适宜，一般根据该样品的含氮量和所适用的滴定管最大体积估算，保证滴定体积不低于滴定管量程的1/3，不超过其量程
消化催化剂混合催化剂的比例不能偏差太大
用量要控制，不宜太多，一般按照要求添加即可
硫酸用量一般控制在10-12ml ，如蛋白含量高可适当增加用量，用量少可导致消化不完全 消化温度控温420摄氏度，温度太低消化不完全，时间长；温度太高，硫酸损失太大
消化时间消化时间以2h 左右为宜，可根据消化后的液体的颜色判断其消化程度，消化完全的样品液体呈透明蓝色，如有黑点则消化不完全
排气量当消化温度升到420以后，应适当控制水流速度不宜太大，否则硫酸损失太大，一般以不溢出酸雾为标准
蒸馏加碱量加碱量以控制管内液体颜色变黑为标准，太少则反应不完全
硼酸冷凝管末端要插入吸收液液面以下保证吸收完全
蒸汽量蒸汽量要控制合适，太小容易在开始的时候造成倒吸，量大容易造成吸收液体积太大 滴定操作严格按照标准滴定操作进行
系统气密性用AR 硫酸铵蒸馏，根据测得的含氮量评估系统气密性