悬浮绵羊红细胞的准备
02-10
悬浮红细胞的准备：
1. 用含抗凝剂的一次性无菌管从供体羊的颈静脉采集血液。（50ML ） 2. 无菌管外表用水冲洗后，用70%酒精消毒（自然风干或用吸水纸擦干）。
3. 血液经1200g 或800*g(湘仪2500rpm) 离心10min, 尽量吸弃血浆和白细胞层。 4. 将红细胞转移至15mL 离心管中，用含两性霉素B 和庆大霉素的细胞培养液补充至血液
原体积，混匀后洗涤红细胞一次。
5. 再经1200*g或800*g离心10min ，吸弃上清及残留的白细胞。 6. 合并相同来源的红细胞，用含两性霉素B 和庆大霉素的细胞培养液补充至离心管最大体
积，混匀后再次同上离心处理。
7. 用２倍体积的含两性霉素B 和庆大霉素的细胞培养液悬浮红细胞，４度保存备用。
10%血清培养基
20%血清培养基
Volume
8 mL( 6 cell) 8000 2 mL(24 cell) 2000 0.25 mL(96 cell) 250
Volume
8 mL( 6 cell) 8000 2 mL(24 cell) 2000 0.25 mL(96 cell) 250
FBS 10% 800 200 25 RPMI-1640
80% 5200 1300 162.5 3倍悬浮RBC
(7.5%) 1800 450 56.25 3倍悬浮RBC
(7.5%) 1800 450(350-1640)
56.25
FBS RPMI-1640 20% 80% 1600 5200 400 1300 50 162.5