平菇液体种子培养基优化
第30卷第5期2008年10月
江西农业大学学报ActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensis
Vo.l30,No.5Oc.t,2008
文章编号:1000-2286(2008)05-0915-04
平菇液体种子培养基优化
陈今朝,戴 玄,谭永忠,王 庆
(长江师范学院生命科学系,重庆408100)
摘要:对平菇FL10液体种子的培养基进行了优化,结果表明,平菇菌丝在玉米粉培养基中生长最好;酵母膏为适宜氮源;C/N比为50 1时菌丝生长最佳;KH2PO4和维生素B1对菌丝生长有促进作用。最适培养基组成为:玉米粉30g/L,酵母膏3g/L,KH2PO41.5g/L,MgSO4 7H2O1g/L和维生素B10.01g/L。关键词:平菇;液体种子;培养基优化
中图分类号:S646.1+4.041 文献标识码:A
TheOptimiztionofCulturalMediumof
LiquidStrainofPleurotusostreatusFL10
CHENJin-zhao,DAIXuan,TANYong-zhong,WANGQing
(DepartmentofLifeScience,YangtzeNormalUniversity,Chongqing408100,China)
Abstract:TheappropriateliquidstrainculturalmediumofP.ostreatusFL10wasoptimized.TheresultsshowedthatcornmealwassuitableforthegrowthofP.ostreatus.Asatisfactorynitrogensourcewasyeastex trac.tC/Nratioof50 1wassuitableforthegrowth.ItwasalsofoundthatKH2PO4andvitaminB1could
greatlystimulatethegrowth.TheoptimumformulaforthemycelialgrowthofP.ostreatuswasasfollows:30g/Lcornmea,l3g/Lyeastextrac,t1.5g/LKH2PO4,1.0g/LMgSO4 7H2Oand0.01g/LvitaminB1.
Keywords:FlammulinavelutipesFL10;liquidstrain;optimizationofculturalmedium
平菇(Pleurotusostreatus),又名侧耳,属担子菌亚门、伞菌目、口蘑科、侧耳属,是我国广泛栽培的食
[1][2]
用菌之一。平菇富含蛋白质、纤维素、矿质元素和维生素等,肉质细嫩,味道鲜美。虽然平菇栽培一般采用固体菌种,但最新的研究结果表明:液体菌种具有生产周期短、菌种纯度高、萌发点多、发菌快
[3]
和生产成本低等优点,是食用菌菌种生产发展的方向。因此,我们用液体培养法研究了从涪陵金山分离到的平菇FL10菌种的营养生理特性,并对其培养基进行了筛选,旨在为平菇FL10液体菌种的培养和规模化栽培提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌株 平菇FL10菌株,2007年4月分离自武陵山涪陵金山产新鲜野生平菇子实体。1.1.2 培养基 碳源、氮源试验基础培养基(马铃薯200g/L,KH2PO42g/L,MgSO4 7H2O1g/L,维生素B10.01g/L);C/N比、正交试验基础培养基(KH2PO42g/L,MgSO4 7H2O1g/L,维生素B10.01g/L);矿质盐、维生素试验基础培养基(葡萄糖20g/L,蛋白胨2g/L,KH2PO42g/L,MgSO4 7H2O1g/L);母种培养基PDA。
收稿日期:2008-05-12 修回日期:2008-07-11
基金项目:重庆市科委科技攻关项目(2006AC1045)和重庆市教委科研项目(KJ07130)
(),男,副教授,,E-malji126.com
916 1.2 方法
江西农业大学学报
第30
卷
1.2.1 碳源试验 将20g/L的葡萄糖、蔗糖、果糖、可溶性淀粉和玉米粉分别加入碳源基础培养基中,装液量为250mL三角瓶盛75mL培养液,以基础培养基为对照,设3次重复。121.3!灭菌20min,接种0.5cm菌丝块,25!、150r/min振荡培养7d。过滤,用纯净水洗涤3次,80!烘干至恒重,用电子天平称菌丝体的干质量。
1.2.2 氮源试验 将2g/L的酵母膏、蛋白胨、尿素、(NH4)2SO4和麸皮20g/L分别加入氮源基础培养基中,以基础培养基为对照,设3次重复,方法同1.2.1。1.2.3 C/N比试验 固定酵母膏用量,改变葡萄糖用量设计培养液的C/N比(碳元素与氮元素含量比)分别为20 1、30 1、40 1、50 1、60 1和70 1进行试验,设3次重复,方法同1.2.1。
1.2.4 矿质盐试验 将1g/LK2SO4、KH2PO4、CaSO4、Na2SO4和MgSO4 7H2O分别加入矿质盐基础培养基中,设3次重复,方法同1.2.1。1.2.5 维生素试验 将0.01g/L的维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素C5种维生素分别加入基础培养基中,设3次重复,方法同1.2.1。
1.2.6 培养基筛选 根据上述试验结果,选取玉米粉、酵母膏、KH2PO4和维生素B1设计四因子、三水平的L9(3)正交试验,筛选平菇的最适培养基组成,设3次重复,试验因子和水平见表1。试验结果数据用DPS7.05软件处理。
表1 培养基筛选的四因子三水平设计Tab.1 Thedifferentlevelandfactors
因素
水平
玉米粉(A)
123
102030
酵母膏(B)
123
KH2PO4(C)
11.52
维生素B1(D)7
0.010.0150.02
g/L
4
2
2 结果与分析
2.1 碳源试验结果
平菇FL10菌丝在5种碳源中均能正常生长,但在不同碳源中菌丝体生长的情况不同。在玉米粉培养基中菌丝球数量多,菌丝体生长速度快;菌丝体干质量最大为654.47mg/(100mL),比对照增加151.54%。而在果糖培养基中菌丝球数量少,菌丝体生长速度慢;菌丝体干质量最小为275.35mg/(100mL),比对照增加2.69%(图1)。2.2 氮源试验结果
以酵母膏做氮源时,平菇菌丝球数量之多,菌丝体生长速度之快;菌丝体干质量最大为659.71mg/(100mL),比对照增加61.26%。尿素做氮源时,菌丝球数量少,菌丝体生长速度慢;菌丝体干质量最低为293.24mg/(100mL),比对照减少26.40%(图2),这可能是因为尿素水解产生的中间产物影响了菌丝生长。2.3 C/N比试验结果
在不同C/N比培养液中,平菇菌丝体的干质量不同(表2)。当C/N比为50 1时,平菇菌丝球数量多,菌丝体生长速度快;菌丝体的干质量最大为770.41mg/(100mL),
图1 不同碳源菌丝体的产量
Fig.1 Mycelialbiomassofdifferentcarbonsources
注:1.蔗糖;2.可溶性淀粉;3.基础培养基;4.玉米粉;5.果糖;6.葡萄糖。
第5期陈今朝等:
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比对照增加191.53%。而C/N比为20 1时,菌丝球数量少,菌丝体生长速度慢;菌丝体干质量最小为594.59mg/(100mL),比对照增加125.00%。在不同C/N比培养液中菌丝体干质量大小依次为:50 1,60 1,40 1,30 1,70 1,20 1。
2.4 矿质盐试验结果
在KH2PO4培养基中,平菇菌丝球数量多,菌丝体生长速度快;菌丝体干质量最10.51%。在Na2SO4培养基中,菌丝球数量少,菌丝体生长速度慢;菌丝体干质量最小为457.37mg/(100mL),比对照减少28.37%(图3)。
2.5 维生素试验结果
在维生素B1培养液中,菌丝球数量多,菌丝体生长速度快;菌丝体的干质量最大为673.58mg/(100mL),比对照增加40.23%。在维生素C培养液中,菌丝球数
图3 不同无机盐菌丝体的产量量少,菌丝体生长速度慢;菌丝体干质量最小
Fig.3 Mycelialbiomassofdifferentinorganicsources
为489.44mg/(100mL),比对照增加1.90%
注:1.硫酸钾;2.硫酸镁;3.硫酸钙;4.硫酸钠;5.磷酸二氢钠;6.
(图4)。
基础培养基。
2.6 正交试验结果
从表3中极差值R可知,玉米粉对平菇菌丝生长量的影响最大;其次是酵母膏和KH2PO4;维生素B1的影响最小。其最佳配方为A3B3C2D1,即玉米粉30g/L,酵母膏3g/L,KH2PO41.5g/L,维生素B10.01g/L。该配方包含在本正交试验表中,其菌丝体产量为975.92mg/(100mL),也是本正交试验中菌丝体产量最大的配方。图4 不同维生素菌丝体的产量
从表4可知,玉米粉的F值最大;酵Fig.4 Mycelialbiomassofdifferentvitamins
母膏和KH2PO4次之;维生素B1最小。即 注:1.维生素B1;2.维生素B2;3.维生素B6;4.维生素B12;5.维这4种基质对平菇菌丝体产量大小的影响生素C;6.基础培养基。分别为:玉米粉,酵母膏,KH2PO4,维生素
B1,结果与极差分析相同(表3)。从F检验的P值均小于1%可知,4种营养基质的菌丝体产量在1%
表2 不同C/N比菌丝产量
Tab.2 MycelialbiomassofdifferentC/Nratio
C/N20 130 140 150 160 170 1∀589.83620.54670.30750.70689.82613.55#592.27651.93681.19782.47686.35620.12∃601.68642.11708.98778.06698.66618.74Ti1783.781914.582060.472311.232074.831852.41mg/(100mL)
xi594.59638.19686.82770.41691.61617.47
图2 不同氮源菌丝体的产量
Fig.2 Mycelialbiomassofdifferentnitrogensources
大为695.10mg/(100mL),比对照增加 注:1.蛋白胨;2.麦皮;3.酵母膏;4.基础培养基;5.硫酸铵;6.
尿素。
918 江西农业大学学报
表3 正交试验结果
Tab.3 ResultofL9(34)orthogonaltest
试验因素
第30卷
编号
A
123456789x1x2x3R
[1**********]9.70806.31923.05333.35
B[1**********]0.01773.81795.2345.22
C[1**********]6.56789.93752.5637.37
D[1**********]6.76756.19776.1030.57
菌丝体干质量/mg (100mL-1)
∀561.98583.27582.09798.47812.21822.64864.06940.36970.52
#578.74579.57615.34809.97791.09813.60859.85924.70992.11
∃598.37608.91599.01801.45810.72796.61877.22913.50965.14
Ti1739.091771.751796.442409.892414.022432.852601.132778.562927.77
xi579.70590.58598.81803.30804.67810.95867.04926.19975.92
表4 正交试验结果方差分析
Tab.4 TheanalysisofresultwithorthogonaltestofL9(34)
变异来源玉米粉(A)酵母膏(B)KH2PO4(C)维生素B1(D)
误差总变异
离均差平方和(SS)
515019.369209.014935.004334.073281.641.62
自由度(df)
22221624
均方(MS)257509.684604.502467.502167.04205.10
F1255.5222.4512.0310.57
P0.00010.00010.00070.0012
的水平上有显著差异;同一种类营养基质在不同水平上,菌丝体的产量有显著差异;在同一水平上不同种类的营养基质,菌丝体产量亦有显著差异。
3 小结与讨论
(1)平菇FL10菌丝体生长的最适碳源、氮源分别为玉米粉和酵母膏;最适C/N比为50 1;KH2PO4
和维生素B1对平菇菌丝体的生长有促进作用。黄清荣等在研究白平菇的营养基质时,发现适宜的
氮源为麸皮。但在我们的试验中发现,麸皮能促进平菇菌丝体的生长,但它对试验结果的测定有影响。即在试验中如果将麸皮煮沸后全部过滤除去,则菌丝体干质量产量偏小;如果不过滤除去或除去不完全,则在离心分离菌丝球时,麸皮附在菌丝球上,则菌丝体的干质量偏大。但是在液体菌种的生产中则可以使用麸皮作氮源,因为它不会影响液体菌种的质量。
(2)培养基的最适组成为:玉米粉30g/L,酵母膏3g/L,KH2PO41.5g/L,MgSO4 7H2O1g/L,维生素B10.01g/L。用此培养基培养平菇菌丝体,其干质量可达1334.82mg/(100mL)。在这种培养基中菌丝体的生长速度更快,长势更好,在实际生产中可有效地缩短菌种的生产周期。但这个配方还有待于完善,如用麸皮代替酵母膏可以降低生产成本,麸皮的用量及用法尚需进一步试验确定。参考文献:
[1]卜庆梅,王淑芳,王瑜,等.四个平菇菌种液体培养选育研究[J].安徽农业科学,2006,34(3):458-459.[2]张坤贞,薛辉.平菇的营养价值及使用方法[J].食用菌,2004(14):32.
[3]黄清荣,辛晓林,杨立红,等.白平菇液体培养碳、氮源及无机盐的优选[J].吉林农业大学学报,2003,25(4):382-384.
[3]