苯酚硫酸法是测定多糖的常用方法
09-09
苯酚硫酸法是测定多糖的常用方法
该测定方法的基本原理是 多糖在浓硫酸作用下水解成单糖 并迅速脱水生成糠醛衍生物 随后与苯酚结合生成有色化合物 从而可以利用分光光度计测定其吸光度 并利用标准曲线定量测定样品中的多糖含量。
1 . 5 葡萄糖标准曲线的绘制
称取烘至恒重的无水葡萄糖3.324 g, 溶于
1 000 mL 重蒸水中, 配成3.324 g/L 的标准溶液,
然后将标准溶液分别稀释成质量浓度为33.24 、
66.48 、99.72 、132.96 、166.20 和199.44 μg/mL 的溶
液。取该溶液各0.2 mL 置于10 mL 具塞试管中,
加入50 g/L 苯酚溶液0.4 mL, 旋涡混合均匀后迅
速加入2.0 mL 浓硫酸, 再旋涡混合均匀后室温放
置30 min , 在波长490 nm 处测定其吸光度, 用蒸
馏水代替葡萄糖溶液作空白对照。以吸光度为纵
坐标, 糖的浓度为横坐标作标准曲线。线性回归方
程为: Y = 0.0039C + 0.0033 ( Y: 吸光度; C: 浓度; r =
0.9997 ) 。