KGA214细胞周期试剂盒
凯基细胞凋亡PI染色试剂盒
(Cell Apoptosis PI Detection Kit)
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at 4℃ for one year
Expire date：
一、 试剂盒说明
荧光标记是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化及生化学变化都可以通过荧光标记的的方法而检测出来，从而区别鉴别出正常细胞、凋亡细胞、坏死细胞以及不同凋亡时期或细胞周期。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为536nm和617nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。采用流式细胞仪检测细胞周期时，凋亡细胞因内源性核酸酶被激活，使DNA广泛降解、断裂，DNA结构发生剧变，随着凋亡的进程，DNA断裂产生的小分子量DNA溢出胞外，细胞总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）或称A0细胞群，即凋亡细胞群。用本试剂盒的PI直接对细胞DNA染色后，进行流式细胞仪分析，即可检测到凋亡细胞DNA的变化。
二、试剂盒组份
注: 1×Buffer A配制：用前用双蒸水将10×Buffer A稀释10倍。三、试剂盒仪器和试剂
荧光显微镜、低速离心机、微量移液器、1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片、
流式细胞仪、70%乙醇、RNase A
四、用注意事项
Propidium Iodide （PI）有毒，操作时要戴手套，需避光。
五、操作方法
1． 荧光显微镜观察
（1）收集细胞，1×Buffer A洗涤细胞一次（离心2000rpm，5min），加适量的
1×Buffer A重悬细胞，调整细胞浓度约为10/mL； 6
（2）取95ul细胞悬液，加入5 μL PI染液，轻轻混匀；
（3）室温避光放置5 min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；
（4）荧光显微镜，激发和发射波长分别为536nm和617nm，绿光*BG12滤光镜观察，拍照。
2． 流式细胞仪分析
（1）用1×Buffer A洗涤细胞一次（离心2000rpm，5min），收集并调整细胞浓度为1×10/mL； 6
（2）细胞加9倍体积的70%乙醇,于-20℃固定至少12小时；
（3） 离心收集细胞后，用1×Buffer A洗细胞除去乙醇,细胞重悬于500 μLBuffer A中；
（4）加入RNase A（用户自备）， 使其终浓度为0.25mg/ml, 37℃,反应30min；
（5）加入5μLPI室温避光染色30分钟；
（6）流式细胞仪或荧光光度计激发波长488nm检测。
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