2010年版[中国药典]无菌检查法培养及观察的改变
解读2010年版《中国药典》（三） 2010年版《中国药典》无菌检查法培养及观察的改变
发布时间: 2010-09-30 来源：杭州市药品检验所 发布部门：局办公室
2010年版《中国药典》，附录Ⅺ H无菌检查法中，供试品的无菌检查培养及观察：“上述含培养基的容器按规定的温度培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现混浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，细菌培养2天、真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现混浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。”与05版药典相比，新版药典删除了划线接种操作。这是为什么？
回想起检验工作中曾经遇到的一个检品，根据方法须做无菌检查，按规定操作，培养4天后硫乙醇酸盐流体培养基开始混浊并混浊逐日增多，并可排除操作中引入微生物污染。该现象为疑似有菌生长。
按05版药典规定“上述含培养基的容器按规定的温度培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现混浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天、真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现混浊或斜面是否有菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。”按规定操作及结果：1、取该培养液1ml至新鲜的硫乙醇酸盐流体培养基中，培养2天后培养基混浊且混浊逐日增多；2、划线接种于斜面培养基上（由于规定中未说明用何种培养基，故用营养琼脂培养基铺斜面，同时划线于血琼脂培养基上），培养2天后未发现有菌落形成；3、取培养基涂片，革兰氏染色，镜检，发现大量红色球菌。根据上述三种结果，判断为供试品有菌生长，样品无菌项目不合格。
有意思的是，为什么三种操作结果不一致？请教了其他老师和专家后，个人认为，这是因为硫乙醇酸盐流体培养基适合大部分需氧菌、兼性厌氧菌及厌氧菌的生长，且对细菌的灵敏度较高，而划线接种这类方法基本上无法检出兼性厌氧菌和厌氧菌，营养琼脂培养基、血琼脂这两种培养基的检测灵敏度也不如硫乙醇酸盐流体培养基。所以我们在无菌培养中培养出的菌类，转接到同种培养基中可以生长，染色镜检可以发现其存在，划线接种则不一定能生长良好，甚至可能如上所述不生长。这三种操作，其结果并不是完全相同的，同种培养基转接与染色镜检结果一致，而划线接种可能造成假阴性。
所以，2010年新版药典删除划线接种操作，可以保持几种方法的结果一致，是符合实际需要的。