微生物常用培养基配制方法

常用基础培养基

★营养琼脂

【用途】供作一般细菌培养和菌株的纯化及传种用

【原理】培养基含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖

【成分】蛋白胨１０牛肉膏５.０氯化钠５.０琼脂粉２０蒸馏水１ＬpＨ７.2～7.4

【制备】将上述成分(除琼脂外)溶于水中校正pH后假如琼脂,煮沸溶解,根据用途不同进行分装,经121℃灭菌15min,倾注平板或制成斜面,置冰箱保存,两周内保持用完

【接种】根据用途不同按常规操作,35℃18～24h观察结果

【观察结果】在平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为ß溶血，菌落周围呈绿色为a溶血。溶血的情况可以显微镜下用低

【质量控制】金黄色葡萄球菌,菌落浅黄色,直径＞1.5mm志贺痢疾菌,菌落无色,直径＞1.5mm铜绿假单胞菌,菌落无色或浅绿色,直径＞2.5mm

★血琼脂培养基

【用途】适用于各类需氧及兼性厌氧细菌生长，一般细菌学检验标本的分离培养、溶血鉴别及菌种保存

【原理】羊血或兔血时细菌生长繁殖的良好营养物质。在45℃～50℃的基础培养基中加加入血液（5～10%）可以保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl的浓度提高到0.85%,则可使血平皿经35℃18～24h后色泽仍然鲜艳。在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为ß溶血。菌落周围呈绿色为ɑ溶血。溶血的情况可以显微镜下用低倍镜观察

【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维羊血60ml pＨ７.2～7.4

【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，置三角瓶内，高压灭菌（121℃15min）后冷至约50℃ ，加入无菌纤维羊血，旋转式充分摇匀后倾平板。血琼脂层厚4mm。凝固后，抽样置于35℃培养18～24h，如无菌生长，冷藏备用。

【接种】取标本增菌培养物或纯培养物划线接种到平板上，置35℃培养1～2d，观察结果

【观察结果】在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全被破坏为ß溶血，菌落周围呈绿色为ɑ

【质量控制】化脓性链球菌，ATCC19615，生长良好，ß-溶血。肺炎链球菌，ATCC6303，为ɑ溶血。表皮葡萄球菌，ATCC12228，生长良好，不溶血。

★巧克力培养基

【用途】主要用于嗜血杆菌的分离，亦可用于奈瑟菌的增菌培养。

【原理】流感嗜血杆菌培养时，需要依赖血液中的X及V因子方能生长繁殖，当培养基加热至80～90℃时，可使血液中的红细胞破裂，以利于嗜血杆菌，奈瑟菌等的生长培养。凡疑有这些菌种存在的标本，均应接种巧克力平板。血液标本培养，增菌后又细菌生长，若移种巧克力平板上，有利于分离更多的细菌。

【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维马血、羊血或兔血100mlpH７.2～

7.4

【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，高压灭菌（121℃15min）后在80～90℃以无菌方法加入血液，摇匀后置90℃水浴中。维持该温度15min，使之呈巧克力色取出，至室温冷至约50℃，倾制平板 。凝固后，抽样置于35℃培养18～24h，如无细菌生长，冷藏备用。

【接种】将可疑标本直接划线接种于该培养基上，置35℃普通培养或置含5%～10%二氧化碳环境培养18～24h，取出观察细菌生长状况。

【观察结果】流感嗜血杆菌菌落微小(0.8mm),无色透明、光滑整齐、似露滴状，48h后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心呈凹陷。

【质量控制】流感嗜血杆菌ATCC10211，生长良好，菌落典型。肺炎链球菌，ATCC6305，生长良好，菌落典型。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★营养肉汤

【用途】用于一般细菌的增加培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。

【原理】该培养基含有氮及微量无机盐，适宜一般细菌的生长繁殖，因此是最基础的培养基。

【成分】牛肉浸液1L蛋白胨10氯化钠5pH7.2～7.4（牛肉浸液可用3.0g牛肉膏和1L蒸馏水代替）

【制备】上述各成分混合溶解，校正pH。分装试管，每管3～5ml。高压灭菌（121℃15min），做无菌试验后冷藏备用。

【质量控制】金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌均生长良好。

★肉浸液培养基

【用途】供作基础培养用。营养比肉膏汤好，一般营养要求不高的细菌均可生长。

【原理】牛肉含有丰富的营养物质，如蛋白质、碳水化合物及无机盐类等，通过水解并用Nacl

【成分】新鲜牛肉500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.4～7.6

【制备】1.将新鲜牛肉去除脂肪、肌膜及肌腱，切成小块后用绞肉机绞碎(或用刀剁碎)。取500g碎肉，加蒸馏水1L，混合后置冰箱中冷浸过夜。

2.将肉浸液取出，煮沸20～30min（并不断搅拌，以免沉底、烧焦）。冷后，用绒布或麻布挤压过滤，使所有的肉浸汁尽量挤出。

3.加入蛋白胨、氯化钠，加热溶解，补足蒸发的水分。矫正Ph至7.4～7.6。

4.用滤纸过滤，装瓶。高压灭菌（121℃15min）即成肉浸液。

5.与1L肉浸液中加入2～3g琼脂，即成肉浸液琼脂。

【使用】根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其他培养基。如制作固体培养基，加入琼脂1.5～2%即成。

【质量控制】金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。

【保存】置冰箱可使用较长时间。

★牛脑心浸液培养基

【用途】用于培养要求较高的细菌。

【原理】牛心脑浸液是细菌生长的营养物质，磷酸盐为缓冲剂，加上适宜的无机盐，有利于细菌的生长繁殖。

【成分】牛脑（小牛脑制成浸液）200牛心（制成浸液）250眎胨或多胨10葡萄糖2Na2HPO4蒸馏水1L。

【制备】1.将牛脑、牛心制成浸液，并加水至1L，加入固体成分，加温溶解。

2.调整pH为7.6，分装，高压灭菌（121℃15min）。

3.牛脑心浸液中加放1.5～2%琼脂，即为牛脑心浸液琼脂。

【临床经验】1.培养厌氧菌时再加入半胱氨酸0.5g。

2.若在此培养基中再加入酵母浸出物5g/1L，则效果更佳。

★肝浸液及肝浸液琼脂

【用途】使用于对营养要求较高的细菌培养。

【原理】肝组织除了含有丰富的营养成分，如蛋白质、碳水化合物以及无机盐外，还含有胆固醇、铁化合物、血红蛋白等细菌生长因子，有利于各种细菌的生长繁殖。

【成分】牛肝或猪肝500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.0

【制备】将新鲜的牛或猪肝洗净，除去脂肪、浆膜、大血管、肝胆总管，绞碎，置铝制容器内，加蒸馏水500ml，经流动蒸汽加热30min，取出调匀后，再蒸90min。然后，用数层纱布或绒布过滤。滤液中加入蛋白胨、氯化钠，并加蒸馏水至1L。加热溶解，矫正pH至7.0，再置于流动蒸汽蒸30min。用滤纸过滤，分装经高压灭菌（121℃15min），即成肝浸液。于每100ml肝浸液中加入2～3g琼脂，即成肝浸液琼脂。

【保存】置冰箱内有效期较长。

★蛋白胨水

【用途】1.供细菌靛基质（吲哚）试验用2.一般细菌培养和传代

【原理】培养基中的蛋白胨含有色氨酸，能被有些细菌利用而成靛基质，与试剂对二甲氨基苯醛缩二吲哚。而不利用色氨酸的细菌则无此反应，故可鉴别细菌。因含有胨和氯化钠，故可供一般培养和传代。

【成分】蛋白胨（或胰蛋白胨）10氯化钠5蒸馏水1LpH7.2

【制备】将上述成分溶于水中，校正pH，分装试管，每管2～3ml，至121℃灭菌15min备用

【接种】将待检菌接种培养基内，经35℃培养18～24h。

【质量控制】大肠埃希菌，生长极好，靛基质（+）伤寒沙门菌，生长良好，靛基质（-）金黄色葡萄球菌，生长良好，靛基质（-）

★血液增菌培养基

【用途】用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。

【成分】牛肉浸液1L眎胨或多价蛋白胨10氯化钠5葡萄糖3～枸橼酸钠3酵母浸膏3琼脂0.75 0.75%对氨基苯甲酸5mlpH7.4

【制备】将上述各成分混合校正pH。分装于螺旋盖有橡皮塞可穿刺的瓶，每瓶50ml。高压灭菌（121℃15min）后，无菌手续加入灭菌硫酸镁(24.65%)溶液1ml。也可选用各种商品血液培养系统。

★葡萄糖肉汤

【用途】用于血液增菌。

【成分】蛋白胨10氯化钠5肉浸液（或心浸液）1L葡萄糖3枸橼酸钠3 0.5%对氨基苯甲酸水溶液10ml 24.65%MgSO4?7H2O水溶液20ml青霉素酶1000U

【制备】将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨基苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸5min，并补足失水，调整pH至7.8。过滤分装于带有反口橡皮塞的玻璃瓶内，每瓶装50ml，高压灭菌115℃20min，每瓶加入青霉素酶50U，经无菌试验合格后，冷却备用。

【接种】将采取的血液标本，以无菌手续注入培养液瓶中（血液1ml，培养液10ml），置35℃培养箱内，每日取出观察一次结果。

【观察结果】经35℃培养，如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时做分离培养，可选用血琼脂、EMB及巧克力平板等。无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中，至于应做2次分离培养。

【临床经验】1.枸橼酸钠为抗凝剂，使血液加入培养基中不凝固。

2.对氨基苯甲酸能中和血液中磺胺类药物的抑制作用。

3.硫酸镁能破坏血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑制作用。

4.本培养基近年来有许多改良配方，如加入0.3～0.5%酵母浸膏以增菌培养；加0.2%核酸刺激细菌生长；加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面，使细菌免受抗体破坏；加入SPS可提高检出率。

常用阳性及阴性球菌分离培养基

★甘露醇琼脂

【用途】供致病性葡萄球菌分离培养用。

【原理】根据致病葡萄球菌耐盐性强和发酵甘露醇的两大特性，在25g/L含盐量的甘露醇琼脂平板上能生长，并形成橙黄色均落，酚红指示剂起显色作用。而凝固酶阴性葡萄球菌不发酵甘露醇呈现红色菌落。微球菌及大部分革兰阴性杆菌基本不生长。因此该平板起选择性分离和鉴别作用。

【成分】眎蛋白胨10牛肉膏10氯化钠25琼脂20甘露醇10 0.2%酚红水溶液12.5ml蒸馏水1LpH7.4

【制备】将上述成分（除甘露醇、酚红外）溶于水中，加热后溶解，校正pH后加入甘露醇和酚红水溶液，摇匀分装，经115℃15min灭菌，待冷却到50℃时倾注平皿，凝固后冷藏备用。

【接种】取待检标本或增菌培养物划平板，置35℃培养18～24h。

【观察结果】挑取橙黄色菌落，接种营养琼脂斜面，经培养后做涂片和其他生化鉴定。

【质量控制】金黄色葡萄球菌，生长，菌落呈黄色，直径>1.0mm.表皮葡萄球菌，生长，菌落呈红色，直径〉1.0mm.普通变形杆菌、大肠埃细菌，基本不生长。

【保存】置冰箱内，使用期限2～3d，如用无菌塑料袋包装可延长使用时间。

★哥伦比亚血琼脂

【用途】供革兰阳性球菌分离用。

【原理】培养基内含有萘啶酸和黏菌素，对革兰阴性菌有很强的抑制作用。

【成分】胰酪蛋白胨12牛肉蛋白胨15玉米淀粉1氯化钠5黏菌素10mg萘啶酸15mg 琼脂粉12蒸馏水1L脱纤维羊血50mlpH7.2～7.4

【制备】将上述各成分（羊血和抗菌药物除外）充分混合，加热溶解，调pH7.2～7.5，115℃15min灭菌。待冷至50℃时加入脱纤维羊血50ml及黏菌素和萘啶酸（预先溶于5ml水中）。混匀，勿使产生气泡。倾入无菌平皿，凝固后备用。

【接种】取经过增菌的标本或其他标本，直接划种于平板上，置35℃24～48h观察结果。

【质量控制】配成的培养基应呈鲜红色，冰箱放置后可变为暗红色。大肠埃希菌，ATCC25923，抑制性生长。肺炎链球菌，ATCC6303，生长良好。化脓性链球菌，ATCC19615，生长良好。

★卵黄双抗琼脂

【用途】供分离培养脑膜炎奈瑟菌用。

【成分】蛋白胨10氯化钠5牛肉膏3玉米淀粉1.6750%卵黄盐水悬液100ml多黏菌素B4.2mg万古霉素3.3mg琼脂15～20g蒸馏水1L

【制备】将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏溶解后，矫正pH至7.6，加入玉米淀粉（先以水调成糊状）及琼脂，混合后115℃20min灭菌。待冷至50℃左右，加入卵黄和抗菌药物（抗菌药物先以少量无菌蒸馏水溶解），轻轻摇匀后，倾注平板备用。

【接种】将标本立即分离接种于上述平板至35℃，含5～10%二氧化碳环境培养20～24h，取出观察结果。

【观察结果】脑膜炎奈瑟菌在此平板上（20～24h），菌落呈无色或米灰色，光滑湿润，边缘整齐，半透明，不产生色素。

【质量控制】脑膜炎奈瑟菌生长良好。

【保存】新鲜配置的平板置4℃冰箱可保存2～3d，如用无菌塑料袋包装可延长使用时间。

【临床经验】1.50%卵黄盐水的制备：取新鲜鸡蛋，用肥皂水洗净蛋壳，浸于75%乙醇中30min，取出用无菌纱布擦干，以无菌手续弃去蛋清，将蛋黄收集于置有玻璃珠的无菌三角烧瓶中摇匀，在加等量盐水，用力振荡，将卵黄搅碎，使之呈均匀混悬液。

2.如无玉米淀粉，用可溶性淀粉代替，多黏菌素B亦可用硫酸多黏菌素E代替。

3.卵黄盐水用10%脱纤维羊血代替，做成巧克力双抗琼脂，亦可作脑膜炎奈瑟菌培养用。

★淋病奈瑟菌分离琼脂(GC Agar)

【用途】用于分离培养淋病奈瑟菌（亦可分离培养脑膜炎奈瑟菌）)

【原理】因淋病奈瑟菌的繁殖对营养要求较高，标本含杂菌又多，难以分离，所有培养基内必须含有马血、血清及卵黄，以及多种氨基酸、维生素和辅酶等增补剂，如lsovitaleX(BBL)\Vitox(Oxoid)等。另外，T-M（Thayer-Martin）培养基是在GC琼脂的基础上，添加抗菌药物抑制剂以抑制革兰阳性细菌和真菌的生长，增强其选择性，提高检出率。

【成分】基础琼脂（双倍浓缩）多价胨（Oxiod）15麦淀粉1.0氯化钠5K2HPO44.0KH2PO41.0琼脂粉10蒸馏水500mlpH7.2增补剂2ml/100ml培养基马血（水溶解物）100ml/100ml培养基

【制备】将基础琼脂成分混合溶于水中，煮沸溶解，矫正pH，分装每瓶100ml，经121

℃灭菌15min备用。临用时将琼脂基础100ml加热熔化，冷却至50℃时加入无菌的5%马血水溶液（先欲温50℃）100ml，再加入增补剂2ml，倾注平板。

注：T-M培养基：取GC琼脂9、（双倍浓度）100ml，加入血红蛋白2%水溶液100ml，增补剂2ml，在倾注平板前加入抗菌药物混合液1ml。

抗菌药物培养基内最终浓度含有发：TMP5ug/ml，万古霉素3ug/ml，多黏菌素7.5ug/ml，制霉菌素12.5ug/ml。

【接种】取病灶部位分泌物（棉拭子），在取样现场迅速直接涂布在平板上，保温到实验室再做4区划线，立即置含10%二氧化碳温箱内，亦可用二氧化碳（或蜡烛缸），注意培养环境的适度，培养1～d。

【观察结果】菌落较小（0.5～1.0mm），湿润，光滑，凸起，透明无色成水珠状。然后做涂片染色镜检和氧化酶等实验等进行鉴定。

【质量控制】使用前必须进行目的菌的生长试验，质量合格者，方可使用。

【保存】置冰箱内，一周内用完。

★卵黄糖发酵平板

【用途】检测脑膜炎奈瑟菌生长反应，适用于现场大量标本的筛选。

【成分】牛肉浸膏3氯化钠5蛋白胨10玉米淀粉1.67 50%卵黄盐酸悬液10ml琼脂200.%酚红溶液5ml蒸馏水900ml糖（醇）按需加入pH7.4

【制备】1.将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠加水加热溶解，调pH至7.

2.将玉米淀粉加于20ml蒸馏水中搅拌均匀，再加入90ml沸水，边加边搅，使成糊状，倒入上述溶液中，加入琼脂、糖类及指示剂，高压灭菌121℃20min备用。

3.待琼脂基本冷却至50℃左右，加卵黄盐水100ml，轻轻摇匀后倾注平板。凝固后置35℃做无菌试验，合格后方可使用。

【接种】采用点种法，将脑膜炎奈瑟菌点种于上述平板上（接种量要大），置35℃培养18～24h培养，生长菌落为淡红色，培养基背景转黄色者为阳性。

【临床经验】1.脑膜炎奈瑟菌对糖发酵能力较弱，虽在发酵过程中曾一度使培养基变酸（变色），但时间一长，就会被细菌在代谢过程中不断形成的碱性物质所中和，使培养基又逐渐转为原来的中性或碱性颜色。如不及时观察，容易误作阴性反应，故进行生化反应时应随时观察随时记录。

2.培养基内加入适量的玉米粉，可吸附培养环境中对该菌的毒性物质，以利于生长，培养温度低于30℃或超过40℃均不能生长。

常用革兰阴性杆菌分离培养基

★中国蓝琼脂

【用途】可抑制革兰阳性细菌，使较好的弱选择性培养基。

【原理】以中国蓝为指示剂，无抑制作用，玫瑰红酸仅能抑制革兰阳性细菌生长，而对大肠杆菌没有抑制作用。发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此种平板上的菌落颜色不同，便于鉴别菌种。

该培养基中不含胆盐，与SS琼脂配对用于粪便中志贺菌和沙门菌的分离是比较合理的。

【成分】牛肉膏5氯化钠5蛋白胨10琼脂15乳糖10蒸馏水1L无菌1%中国蓝水溶液3ml1%玫瑰红酸乙醇溶液3mlpH7.2～7.4

【制备】将前6项成分混合，加热熔化，校正pH（7.4）后，高温灭菌（115℃15min）。冷却至60℃，无菌手续加入中国蓝溶液和玫瑰红酸乙醇溶液，充分摇匀后，倾制平板。

【接种】将检材直接划线分离于该平板上，至35℃18～24h观察结果。

【观察结果】在中国蓝平板上，分解乳糖产酸的细菌，其菌落呈蓝色；不分解乳糖的细菌，菌落为淡红色的透明菌落。

【质量控制】大肠埃希菌ATCC25922，菌落呈蓝色。痢疾志贺菌Ⅰ型，ATCC，13311，菌落呈淡红色。鼠伤寒沙门菌，ATCC，13311，菌落程淡红色。

【保存】平板置4℃冰箱保存，1周内用完。

【临床经验】1.中国蓝水溶液徐徐煮沸或高压115℃15min灭菌后腰应用。玫瑰红酸乙醇溶液，无需灭菌，但加热时应避开火焰。

2 玫瑰红酸能抑制革兰阳性细菌生长，但对大肠埃希菌没有抑制的作用，故各种标本接种量不宜太多。

3.次培养基pH约为7.4，制好后应呈淡紫红色，若过碱则呈鲜红色，过酸则呈蓝色，均不适用。 ★伊红亚甲蓝琼脂（eosin methylene blue agar）

【用途】供肠道致病菌及大肠菌群的分离。

【原理】伊红和亚甲蓝两种燃料一酸一碱。两者在培养基中为指示剂，对革兰阳性菌有抑制生长作用。当大肠埃希菌分解乳糖时，菌落中的伊红和美蓝相结合形成紫红色的复合物，有时呈金属光泽；而不分解乳糖的细菌其菌落为无色或灰白色；有的细菌因产生碱性物质较多，而出现蓝色菌落。

【成分】蛋白胨10K2HPO42琼脂15乳糖10蒸馏水1L无菌2%伊红-Y和亚甲蓝溶液，充分摇匀，倾制平板。

【制备】将前5项成分混合，加热溶化，校正pH后高压灭菌。冷却至60℃，无菌手续加入伊红-Y和亚甲蓝溶液，充分摇匀，倾制平板。

【接种】取粪便标本或增菌物，划线接种在平板上，置35℃培养18～24h观察结果。

【观察结果】根据检验目的不同，挑取无色菌落或挑选紫红色及有金属光泽的菌落转种到克氏双糖或三糖铁琼脂进行鉴定。

★麦康凯平板

【用途】供肠道致病菌的分离培养和非发酵细菌鉴别用。

【原理】该培养基利用胆盐来抑制革兰阳性细菌生长，为中等程度选择性培养基，抗菌力略强，有少数革兰阴性菌不生长；而对伤寒等沙门菌促进生长的作用。利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开。沙门菌及志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落。

在麦康凯平板上能够生长，是非发酵菌鉴定的一个根据。如果用麦康凯平板作为原始标本分离的培养基时，应注意该标本在血平板上的细菌分离生长情况，以免遗漏部分被抑制生长细菌。

【成分】蛋白胨20氯化钠5胆盐5乳糖10琼脂15～201%中性红溶液5ml蒸馏水1LpH7.2

【制备】将各成分（除中性红外）混合，加热溶解，校正pH，加入中性红溶液，高压灭菌115℃15min，冷却至约50℃，倾制平板，4℃冰箱（避光）保存，1周内用完。

【接种】取粪便标本或增菌物划线接种到平板上，置35℃18～24h培养18～24h观察结果。

【观察结果】不发酵乳糖的肠道细菌呈无色菌落，直径约为2.0mm，光滑半透明。大肠埃希菌呈红色菌落。

【临床经验】非发酵细菌在该平板上是否生长，使临床鉴定某些非发酵细菌的指标之一。

★SS琼脂

【用途】用于志贺菌和沙门菌分离

【原理】SS琼脂为强选择性培养基。其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。如枸橼酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用与煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠埃希菌的生长；对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，枸橼酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。中性红可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落，故此具有选择性鉴别作用。

【成分】牛肉浸粉5眎胨或多价蛋白胨5乳糖10胆盐8.5枸橼酸钠8.5硫代硫酸钠8.5枸橼酸铁1琼脂15～201%中性红水溶液2.5ml0.1%煌绿水溶液0.33ml蒸馏水1LpH7.0～7.1

【制备】将上述成分（除中性红、煌绿）混合于水中，加热煮沸溶解（部高压），校正pH，然后加入中性红和煌绿水溶液，充分混匀冷至50℃时倾注平板。

【接种】将病人或带菌者的各种标本直接划线接种在该平板上，置35℃培养18～24h观察结果。

【质量控制】大肠埃希菌，抑制性生长，菌落程红色。志贺痢疾Ⅰ型，生长良好，菌落无色。福氏志贺菌，生长良好，菌落无色

【观察结果】沙门菌其菌落呈无色半透明，产生H2S者菌落中心呈黑色，部分菌株如亚利桑那亚属Ⅲ有分解乳糖的菌落呈红色、中心黑色，志贺菌属的菌落呈无色透明。大肠埃希菌呈红色混浊。宋内志贺菌能延缓发酵乳糖，培养24h厚可以出现红色菌落。肠道致病菌的菌落均可达1.5mm以上。

【保存】避光，3d内用完，或保存于冰箱内备用。

【临床经验】煌绿要新配，中性红要优质；此培养基因含胆盐量较高，对肠道非病原性细菌有较强的抑菌力。在目前商品培养基中，不同厂家的产品抑菌力不同，使用时应注意。选择性过强，可能影响检出率，所以，最好的办法是选择一种若选择平板，以配对互补使用。

★山梨醇麦康凯琼脂

【用途】用于致病性、侵袭性和产毒性大肠埃希菌分离培养。

【原理】用山梨醇替代乳糖制成的麦康凯琼脂有利于对部分大肠菌的鉴别。如致病性、侵袭性和产毒性大肠菌有部分菌株不发酵山梨醇，在此培养基上生长的菌落呈无色，以识别。

【成分】蛋白胨5眎胨3氯化钠5胆盐5山梨醇10琼脂粉120.01%结晶紫水溶液1ml0.5%中性红水溶液5ml蒸馏水1LpH7.2

【制备】将上述成分（除中性红、琼脂粉、结晶紫、山梨醇）混合于水中，加入溶解，校正pH，再加入琼脂粉加热煮沸溶解。分装三角烧瓶100ml，经121℃15min灭菌备用。临用时，加热溶解，再加入山梨醇、结晶紫及中性红水溶液，摇匀倾注平板。

【接种】将标本活增菌液直接分离到平板上，置35℃培养18～24h。

【观察结果】与麦康凯琼脂不同之处事挑取致病性大肠的菌落时，以无色菌落为主，同时也不能放弃红色菌落，如EPEC迟缓分解山梨醇，菌落呈红色。EHECO55H6菌落无色。

【质量控制】参照麦康凯琼脂。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★碱性琼脂

【用途】供霍乱弧菌分离培养用。

【原理】利用霍乱弧菌怕酸不怕碱的特点，提高培养基的pH来抑制其他菌的生长，以利于目的菌的分离。

【成分】蛋白胨10牛肉膏3氯化钠5琼脂20蒸馏水1LpH8.4

【制备】将上述成分混合于水中，加热溶解，校正pH，分装后高压灭菌121℃15min倾注平板。

【接种】凡急性病人水样便做增菌培养的同时，应直接将粪便标本分离到碱性琼脂平板或亚碲酸钾琼脂平板上。置37℃培养12～16h，观察结果。

【观察结果】霍乱弧菌生长较快，菌落大而扁平，呈青灰色，半透明，光滑湿润。在亚碲酸钾琼脂上菌落较小，呈灰黑色。

【质量控制】各实验室凡自配或商品培养基，在使用前必须用标准菌株或送上一级检验机构进行目的菌检测，质量可靠者方可使用。

El-Tor弧菌，生长良好；大肠埃希菌25922，抑制性生长。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★TCBS琼脂

【用途】供霍乱弧菌及副溶血性弧菌分离培养用。

【原理】在碱性琼脂的基础上，利用枸橼酸钠、硫代硫酸钠和牛胆汁，加强了对革兰阳性菌及大肠菌群等杂菌的抑制。牛胆汁对霍乱弧菌生长又有促进作用。其中T.B和BTB作指示系统，把分解蔗糖的霍乱弧菌与不分解蔗糖的细菌鉴别开。

【成分】酵母膏粉5蛋白胨10枸橼酸钠10硫代硫酸钠10牛胆汁粉8蔗糖20氯化钠10枸橼酸铁1麝香草酚蓝（T.B）0.04溴麝香草酚蓝（BTB）0.04琼脂粉12蒸馏水1LpH8.4

【制备】将上述成分（除T.B和BTB）称量混合于水中，加热煮沸溶解，校正pH，再加入T.B和BTB指示剂，混匀倾注无菌平板。

【接种】取病人粪便或增菌培养物，划线分离于琼脂平板上，置35℃培养16～18h，观察结果。

【质量控制】霍乱弧菌（小川、稻叶），生长良好，菌落2～3mm，黄色。副溶血性弧菌，生长良好，菌落2～3.5mm，蓝绿色。大肠埃希菌，基本生长良好。金黄色葡萄球菌，不生长。变形杆菌，受抑制。

【保存】置冰箱，1周内用完。

【临床经验】霍乱弧菌在此培养基上，血清凝集试验有时不易乳化，应引起注意。

★庆大霉素琼脂

【用途】供霍乱弧菌分离培养用。

【原理】该培养基以碱性琼脂作基础，加入枸橼酸钠、亚硫酸钠、庆大霉素以及多黏菌素B来抑制革兰阳性和阴性杆菌的生长，而对霍乱弧菌无抑制性。在标本中杂菌较多时加入亚碲酸钾1/20万，对杂菌抑制效果更好，分离率更高。

【成分】蛋白胨10牛肉膏3氯化钠5枸橼酸钠10无水亚硫酸钠3蔗糖10琼脂15～20庆大霉素、多黏菌素B“双抗液”2ml蒸馏水1LpH8.4

【制备】将上述成分（除双抗液）称量混合于水中，加热溶解，校正pH，分装灭菌121℃15min，冷至50℃时，每100ml内加“双抗液”1.2ml，倾注平板。如果标本中杂菌较多时，可另加0.5%亚碲酸钾水溶液0.1ml，再倾注平板。最后每毫升培养基内含有庆大霉素0.5U，多黏菌素B0.6U，亚碲酸钾1/20U。

【接种】将粪便标本活增菌培养物划线接种到该平板上，置35℃培养16～18h。

【观察结果】由于该培养基抑制性强，而霍乱弧菌生长迅速，16h菌落达2mm，菌落青灰色，半透明，扁平，光滑湿润。培养时间长，菌落略黄色、隆起，中心厚而不透明。

【质量控制】霍乱弧菌（小川、稻叶）生长良好，培养18～24h菌落直径2.5～3.0mm，大肠杆菌和变形杆菌受抑制。

【保存】置冰箱内，1周内用完。

【临床经验】“双抗液”配置：98ml灭菌蒸馏水中加入庆大霉素（25000U/ml）1ml，多黏菌素B或多黏菌素E（3000000U/ml）1ml。冰箱保存1个月用完。

★4号琼脂

【用途】供分离霍乱弧菌用。

【原理】培养基中所有庆大霉素主要抑制革兰阴性细菌生长，十二烷基硫酸钠和利凡诺（雷佛奴尔）主要抑制阳性细菌生长，这3种药品还有协同作用，故此培养基抑制杂菌的能力很强，为选择性培养基。另一方面，由于亚硫酸钠和枸橼酸钠有促进霍乱弧菌生长的作用，胆汁有保护霍乱弧菌和促进生长的双重作用，在该培养基上霍乱弧菌能使亚碲酸钾还原成碲，菌落中心呈黑色，边缘淡黄色的大菌落与其他杂菌的小菌落很容易区别。

【成分】蛋白胨10氯化钠5牛肉膏3亚硫酸钠（无水）3枸橼酸钠10猪胆汁粉5十二烷基硫酸钠20利凡诺（雷佛奴尔）3琼脂粉12庆大霉素亚碲酸钾混合液1ml蒸馏水1LpH8.0

【制备】将1～8成分放于玻璃或搪瓷容器内（严禁用铝制等金属容器），加入蒸馏水，加热混合后，调整pH至8.0，然后按1.2%加入琼脂，煮沸至琼脂溶化后，冷却至60℃

【接种】取待检标本划线接种于平板上，置35℃培养过夜。

【观察结果】8h即可初步观察结果，24h霍乱弧菌呈中心黑色较大而扁平的菌落，较易区别。

【质量控制】1.配成的培养基呈亮黄色透明。

2.El-Tor弧菌稻叶型和小川型均生长良好，大肠埃希菌ATCC25922不生长。

【临床经验】1.庆大霉素和亚碲酸钾混合液应新鲜配制并置冰箱保存。

2.利凡诺应避光保存，而且每批均应预试后方可使用。成品培养基应避光保存。

★HE琼脂

【用途】供沙门菌属及志贺菌属分离培养使用

【原理】该培养基既有较强的选择性，又有一定的鉴别性，因为培养基内含有高浓度的胆盐，能抑制革兰阳性及大肠杆菌的生长，而有利于沙门菌的生长，因此具有选择性。

培养基内含有乳糖、蔗糖和水杨素等3种糖作为鉴别系统，溴麝香草酚蓝和酸性品红指示剂作用，能把发酵糖类的细菌区别开。前者为橘黄色，后者为淡蓝色菌落。能产生H2S的沙门菌其菌落无色半透明，中心显黑色，志贺菌在此培养基上呈淡蓝色半透明，因此易于鉴别。

【成分】蛋白胨12酵母浸膏3乳糖12蔗糖12水杨素2混合胆盐9氯化钠5硫代硫酸钠5枸橼酸铁铵1.50.4%溴麝香草酚蓝16ml0.5%酸性品红12琼脂粉12蒸馏水1LpH7.5

【制备】将上述成分（除指示剂）称量混合于水中，加热溶解，校正pH，最后加入指示剂，冷却至50～55℃倾注灭菌平皿。

【接种】取粪便标本或增菌培养物，划线接种于该平板上，置35℃培养18～24h观察结果。沙门菌落呈淡蓝色，产生H2S者菌落中心呈黑色；志贺菌的菌落呈淡蓝色半透明；大肠埃希菌落呈橘黄色，3种菌落大小基本相近。经18～24h培养后，菌落直径约2.0mm。

【质量控制】大肠埃希菌，菌落呈橘黄色。鼠伤寒沙门菌，菌落呈黑色。志贺菌，菌落淡蓝色。金黄色葡萄球菌，不生长。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★GN增菌液

【用途】供志贺菌增菌培养用。

【原理】该培养基中含有枸橼酸钠和去氧胆酸钠，对革兰阳性菌有抑制作用，而对革兰阴性杆菌抑制性较弱。

【成分】蛋白胨20葡萄糖1甘露醇2枸橼酸钠5磷酸氢二钾4磷酸二氢钾1.5氯化钠5蒸馏水1LpH7.0

【制备】将上述成分称量混合，加热溶解，校正pH，分装于试管5～10ml，经121℃15min灭菌备用。

【接种】取粪便标本或棉拭子取样直接接种到增菌管内，置35～37℃培养6～8h。

【观察结果】培养物有细菌生长者，即分离到SS和麦康凯琼脂平板上进行培养。

【质量控制】接种大肠埃希菌（ATCC25922）和痢疾志贺菌，10个活菌即可检出。

【保存】置冰箱保存，2周内用完。

★四硫磺酸盐（TT）增菌液

【用途】沙门菌增菌培养用。

【原理】TT增菌液中的碘氧化硫代硫酸钠而形成四硫磺酸钠（2Na2S2O3+I2→Na2S4O6）。四硫磺酸钠对大肠埃希菌有抑制作用，而有利于沙门菌的生长，但对志贺菌也有一定的抑制作用。碳酸钙具有缓冲作用，使沙门菌不至于因增菌液酸碱度的改变而死亡。

【成分】眎胨或多胨5硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）30碳酸钙10胆盐1蒸馏水1L碘液（碘6g，碘化钾5g，溶于20ml水中，储存于棕色玻璃瓶内备用）

【制备】将上述成分（除碘液），混合后，加热溶解，不必校正pH，每管分装10ml，分装时应充分振摇，使碳酸钙能均匀地分装到各试管内。经高压蒸汽115～121℃10min灭菌。

临用时，于每只试管内加碘液0.2ml，混匀即可。

★亚硒酸盐（SF）增菌液

【用途】沙门菌增菌培养用。

【原理】强选择性增菌培养基，亚硒酸盐对革兰阳性菌有较强的抑制作用，又选择性的抑制生长作用，对革兰阴性杆菌，有选择性的抑制生长作用，尤其对大肠埃希菌属和志贺菌属的细菌抑制性较为明显，而对沙门菌属则无明显的抑制性。在磷酸缓冲剂的作用下，这种差异就更明显，从而起到选择作用。

【成分】亚硒酸氢钠4蛋白胨5乳糖4磷酸氢二钠9.5磷酸二氢钠0.5蒸馏水1LpH7.1

【制备】将上述各成分溶于水中，校正pH，分装每管10ml，用流动蒸汽100℃15～30min灭菌后，冷藏备用。

【临床经验】1.SF增菌液不宜用高压蒸汽灭菌。温度过高，会有大量红色沉淀形成，影响增菌效果。

2.pH必须为7.1，否则会产生棕黄色沉淀。若pH不符，可改变磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的比例，进行调整。

3.亚硒酸钠或亚硒酸氢钠都可用。硒盐是剧毒品，必须妥善使用、保管。硒的有机物和硒氢化合物时挥发性的，有毒，勿吸入。

★碱性蛋白胨水

【用途】供霍乱弧菌增菌培养用。

【成分】蛋白胨20氯化钠5蒸馏水1LpH8.6

【制备】将上述成分溶解于水中，校正pH，分装于试管8～10ml，经121℃15min备用。

【接种】将待检标本接种到碱性蛋白胨水中，置37℃培养6～8h，即分离到碱性琼脂，庆大琼脂或TCBS琼脂平板上。必要时做第二次增菌6～8h。

水样增菌取50ml，10倍浓缩碱性胨水加水样450ml，再加入1%无菌亚硒酸钾溶液1ml和青霉素100U，置37℃培养过夜，再做第二次增菌6～8h，做分离培养。

【观察结果】经6～8h培养，霍乱弧菌呈均匀混浊生长，表面有菌膜出现。

【质量控制】各实验室自配或采用商品培养基，用前均需用标准菌株进行检测，生长良好者方可使用。

霍乱弧菌El-Tor生物菌，生长良好（6h）。大肠埃希菌ATCC25922，抑制生长(6h).副溶血性弧菌，生长良好。

【保存】置冰箱，2周内用完。

【临床经验】若在碱性胨水中加入1%亚碲酸钾0.5～1ml/L，则成为亚碲酸钾碱性胨水，其增菌效果更为理想。

★耶尔森菌分离培养基CIN琼脂

【用途】供小肠结肠炎耶尔森菌分离培养用。

【成分】甘露醇20明胶胰酶消化液10牛肉浸膏5眎胨5丙酮酸钠2酵母膏粉2氯化钠1去氧胆酸钠0.5中性红0.03新生霉素0.0025结晶紫0.001头孢磺啶钠（达克舒林）0.015氧苯酚（Irgasan DP 300）0.004琼脂粉12蒸馏水1LpH7.2～7.6

【制备】将上述成分（除新生霉素和达克舒林）加入水中，煮沸溶化，冷至50℃，以无菌手续加入新生霉素和头孢磺啶钠，婚姻内，倾入无菌平皿，备用。

【接种】取标本划线接种于上述平板上，置22℃培养48h。

【观察结果】小肠耶尔森菌可利用甘露醇，其菌落可形成中心深红，有透明周边的牛眼装菌落。

【质量控制】配成之培养基应呈粉红色或橘红色透明。

小肠耶尔森菌接种后置22℃培养48h，生长良好，菌落典型。

【临床经验】1.本培养基不需高压灭菌。

2.该培养基稳定，置室温可存放3～5d，冷置可保存1周。

其他细菌分离培养基

★CDC厌氧血琼脂

【用途】本培养基营养较好，适用于多种厌氧菌的生长，也可作为选择性培养基的基础，产黑色素的厌氧菌在标本培养基上能形成典型菌落和色素，产气荚膜梭菌有明显的双层溶血环。

【成分】胰酶解酪蛋白15木瓜酶消化豆粉5（或植物胨）5氯化钠51%氯化血红素就.5ml酵母浸出粉5半胱氨酸0.4琼脂20蒸馏水1L脱纤维羊血50ml

【制备】将上述成分（除血液）混合溶解，调pH至7.4±0.1，121℃15min高压蒸汽灭菌，冷却至50℃加入脱纤维羊血或兔血，摇匀后倾注平板。

★罗琴改良培养基（Lowenstein-Jenden medium）

【用途】供结核分枝杆菌培养用。

【原理】结核分枝杆菌在人工培养时，必须含有足够的特殊营养成分。天门冬素为细菌生长提供氮源。鸡卵液与马铃薯不仅是良好的营养物质，而且还能降低脂肪酸的毒性。甘油和枸橼酸盐可补充碳源。钾、镁、磷、硫等无机盐也是细菌生长不可缺乏的生长元素，磷酸盐有缓冲作用，孔雀绿可抑制标本中的杂菌。

【成分】磷酸二氢钾2.4MgSO4·7H2O0.24枸橼酸钠（或枸橼酸镁）0.6天门冬素3.6甘油12ml蒸馏水1L马铃薯淀粉30新鲜鸡蛋液1L2%孔雀绿水溶液20ml

【制备】先将磷酸盐、硫酸镁、枸橼酸镁、天门冬素及甘油加热溶解于600ml蒸馏水中，再填放马铃薯粉，边放边搅拌，并继续置沸水中加热30min，待冷却至60℃左右时，加入鸡蛋液1L及孔雀绿溶液200ml，充分混匀后，用无菌操作分装于灭菌试管，每只5～6ml，塞紧橡皮塞（最好是翻口塞），置于血清凝固器内制成斜面，经85℃1h间歇灭菌2次（或高压灭菌103.43kPa20min），待凝固后经无菌试验，冷藏备用。

【接种】取晨咳痰或其他液体标本，经消化处理和离心沉淀的浓缩液0.1ml（约2滴）滴种于培养基的斜面上，尽量摇晃，置35℃5%～10%二氧化碳温箱内培养1～4周，观察结果。

【观察结果】凡在1周内发现生长的菌落，一般不可能是结核分枝杆菌。在2周后生长的菌落，呈奶油状，略带黄色，粗糙凸起，不透明，即取菌进行涂片染色镜检，及作其他鉴定。

【质量控制】自制或商品培养基在使用前，均应进行性能检测，符合要求者方可应用。

【保存】置冰箱内2～4周有效。

【临床经验】1.本培养基pH约为.0，一般无须校正。

2.间歇灭菌的温度不宜超过90℃。

★亚碲酸钾血琼脂

【用途】分离白喉杆菌用。

【原理】白喉杆菌能吸收碲盐，使其还原成金属碲而形成黑色或灰黑色的菌落，因而在该培养基上较易区别。

【成分】蛋白胨10氯化钠5牛肉浸膏3葡萄糖2胱氨酸0.05 1%亚碲酸钾45ml脱纤维羊血100ml琼脂20蒸馏水0.9pH7.6

【制备】先将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏、葡萄糖和胱氨酸加水加热溶解，调pH至7.6，加入琼脂，高压灭菌115℃15min,备用。

待上述基础培养基冷至50℃左右时，用无菌操作加入已灭菌的亚碲酸钾溶液及羊血，混匀倾注平板。

【接种】将标本接种于亚碲酸钾平板上。置35℃孵箱，经24～48h培养，观察结果。

【观察结果】白喉杆菌能吸收碲盐，使其还原成金属碲而形成黑色或灰黑色的菌落。大部分其他菌落在此培养基上被抑制，故较易鉴别。

★蜡样芽胞杆菌选择性琼脂（Bacillus cereus selective）

【用途】用于各种食品蜡样芽胞杆菌菌落计数，及其他标本中需氧芽孢杆菌的分离培养，本培养基亦称甘露醇卵黄多黏菌素琼脂（MYP琼脂，mannitol salt yilk pilymyxin agar）

【原理】本培养基内含有多面菌素B，对革兰阴性杆菌有抑制作用，卵黄主要是利用蜡样芽胞杆菌卵磷脂酶阳性的特征，于35℃培养18～24h，其菌落周围可出现一明显沉淀环，以资鉴别。

【成分】蛋白胨10牛肉膏1D-甘露醇10氯化钠10琼脂粉12蒸馏水950ml酚红0.025 50%l卵黄液50ml多黏菌素B10万UpH7.0～7.2

【制备】除酚红、卵黄、多黏菌素B，其余成分加入水中，加热溶解。调pH7.0～7.2，加指示剂，121℃75min高压灭菌。待冷至50℃，加入50%卵黄液50ml，多黏菌素B1000U，混匀，倾注无菌平皿。做无菌试验合格后备用。

【接种】取待检标本划线接种平板，置35℃培养过夜。

【观察结果】蜡样芽胞杆菌不利于甘露醇，其菌落呈粉红色，因产生卵磷脂酶，其菌落周围形成一明显的沉淀环。若菌落呈黄色则不是蜡样芽胞杆菌。

【质量控制】配成之平板应呈深红色。

蜡样芽胞杆菌接种平板35℃过夜生长良好，菌落典型。

★弯曲菌选择性培养基

（1）Skirrow培养基

【用途】供空肠弯曲菌及幽门螺杆菌分离培养用。

【原理】培养基内含有多种广普和窄普抗菌药物，能抑制大多数革兰阳性和革兰阴性菌的生长，有利于空肠弯曲菌和幽门螺杆菌的生长，为最理想的弯曲菌选择分离培养基。

【成分】蛋白胨15胰蛋白酶5酵母膏5氯化钠5琼脂粉12万古霉素10ml多黏菌素B2500U TMP5mg脱纤维羊血70ml蒸馏水930mlpH7.4

【制备】除血和抗菌药物外，其余成分混合于水中，加热溶解，调pH至77.2，分装每瓶100ml，121℃灭菌15min，待冷50℃时加入羊血7ml和多抗液0.5ml，摇匀，倾注无菌平皿。

【接种】取标本划线接种于平板上，置25℃或43℃微需氧环境中培养过夜。

【观察结果】经48h培养，菌落直径达1～2mm，不溶血的菌落。

【质量控制】大肠埃希菌，ATCC25922，补生长。粪肠球菌，ATCC33186，不生长。空肠弯曲菌胎儿种，ATCC29424，生长良好。

【临床经验】1.多抗液的配制：A:乳酸62mg（约2滴）加入100ml灭菌水中，然后加入TMP100mg，混合后加热100℃灭菌。B:取A液5ml，再加入万古霉素100mg和多黏菌素B0.38mg，摇匀即可成多抗液。

2.弯曲菌属系微需氧菌，环境中只可含5%氧气和10%二氧化碳。在较多氧气中极易死亡，尤其是幽门螺杆菌，因此标本采集后，应尽快接种培养，或放入运送培养基中运送。

3.弯曲菌运送可用布氏菌液培养基。

（2）Campy-BAP培养基

【用途】分离弯曲培养菌用。

【成分】蛋白胨10胰胨10葡萄糖10酵母浸膏3氯化钠5重亚硫酸钠0.蒸馏水0.9L脱纤维羊血100ml抗菌补充剂（万古霉素10mg多黏菌素B2500UTMP5mg两性霉素2mg）pH7.2

【制备】将上述成分（除羊血和抗菌补充剂），加入0.9L蒸馏水，加热溶解，校正pH，分装，121℃15min灭菌，加入羊血和抗菌药物，充分混匀倾注平板于无菌平皿内。

【接种】取标本划线接种于平板上，置25℃或43℃微需氧环境中培养过夜。

【质量控制】大肠埃希菌ATCC25922，不生长。粪肠球菌ATCC22186，不生长。空肠弯曲菌胎儿亚种，ATCC29424，生长良好。

【临床经验】置微需氧环境中或10%二氧化碳环境中培养。

★军团菌培养基

（1）缓冲活性炭酵母琼脂培养基（BCYE）（buffered charcoal yeast extract agar）

【用途】用于嗜肺军团菌的分离培养。

【成分】酵母浸膏10活性碳2L-半胱氨酸盐酸盐0.4可溶性焦磷酸铁盐0.25琼脂17N-2-乙酰氨基-乙氨基乙醇磺酸（ACES）10蒸馏水0.98LpH7.0

【制备】除半胱氨酸和焦磷酸铁外，其余成分混合加热溶解，经121℃15min灭菌，放于水浴中冷却到50℃，另外分别配制新鲜L-半胱氨酸溶液（10ml蒸馏水中含0.4g）及焦磷酸铁溶液（10ml含0.25g），分别经过过滤除菌，再加入灭菌琼脂中，加入1mol/LKOH4～5ml使培养基的最终pH为6.9～7.0，需要时可用1mol/LHCl校正，倾注平板，冷却后置冰箱中备用，亦可制斜面，用于保存菌种。该培养基为黑色。

【接种】液体标本可直接接种培养基，肺、肝、脾等固体标本需制成10%悬液后接种培养基，接种后的培养基置35℃需氧环境培养，培养箱需保持一定的湿度。

【观察结果】每天用解剖镜检查平板培养物。用略高于10°角的斜射光源照明。在BCYE平板上，培养4～5d，菌落直径1～2mm，并出现亮蓝和切削玻璃样的构造，继续培养后菌落增大呈黄绿色，较光滑。

【保存】在室温、暗室可保存1周。

（2）LCVB琼脂

【用途】供军团菌分离培养用。

【原理】本培养基内含有特制的猪肺消化汤，又增添了羊血、复合维生素B、活性炭和可被直接利用的氨基酸（L-半胱氨酸），有利于军团菌的生长繁殖。

【成分】猪肺消化汤100ml活性炭2琼脂分13脱纤维羊血100mlL-半胱氨酸0.4复合维生素B0.1

【制备】将上述成分除羊血、何复合维生素B外，充分混匀，高压灭菌121℃15min，待温度降至80～85℃时加入脱纤维羊血100ml，使成巧克力色。待冷至60℃，加入复合维生素B和L-半胱氨酸，混匀后倾注于无菌平皿。

【接种】取标本划线接种于平板上，置35℃0.5%二氧化碳环境下培养5d。每天观察结果。

【质量控制】嗜肺军团菌生长良好。

（3）F-G培养基

【用途】用于嗜肺军团菌的分离培养。

【原理】本培养基营养丰富，提供了可直接利用的必需氨基酸和进行氧化还原用的铁离子，因此，克完全满足军团菌生长繁殖的营养要求。

【成分】水解酪蛋白17.5牛肉膏3淀粉1.3琼脂粉12L-半胱氨酸0.4可溶性交性磷酸铁0.25蒸馏水1L

【制备】除L-半胱氨酸和焦性磷酸铁，其余成分混合于900ml蒸馏水中，煮沸溶解，121℃灭菌15min冷却至50℃，无菌加入L-半胱氨酸和焦性磷酸铁溶液，充分混匀后，调pH至6.9，混合后倾入灭菌平皿内，备用。

【接种】取待检标本划线接种于平板上，置35℃含2.5%二氧化碳环境下培养5d，每天观察结果。

【质量控制】嗜肺军团菌生长良好。

【观察结果】每天观察细菌是否生长良好，用解剖镜可在12～24h发现细小细菌。

【临床经验】1.4%L-半胱氨酸水溶液，临用时新鲜配制，配制后过滤除菌。

2.2.5%焦性磷酸铁水溶液，临用时新鲜配制，配成后过滤除菌，配妥后必须干燥避光保存，由绿色变为黄色或棕色时，不能继续使用。

★高渗液体的L型菌增菌培养基

【用途】1.供作基础培养基用2.用于血、骨髓、胸水等标本进行L-型细菌增菌培养。

【原理】细胞壁缺陷的细菌L型，在一般培养基上不能生长和存活，需在高渗环境中才能存活和生长。高渗环境可在培养基中加入适量地盐和糖来维持。

【成分】1.高渗盐液体培养基

新鲜纯精牛肉500蛋白胨10老黄牛40蒸馏水1L

2.高渗唐液体培养基

新鲜纯精牛肉500蛋白胨10老黄牛30蔗糖150蒸馏水1L

【制备】1.高渗盐液体培养基

将新鲜牛肉去除脂肪、筋膜，切成小块后用绞肉机绞碎，称取500g加水1000ml混合后置冰箱浸泡过夜；将肉浸液煮沸30min，然后用麻布或绒布挤压过滤；按量加入蛋白胨、氯化钠，加热使溶解，并补足因蒸发而失去的水分，调整pH至7.4～7.6；用滤纸过滤后分装小瓶，121℃灭菌15～20min。

2.高渗唐液体培养基

同上述高盐培养基，唯高压蒸汽灭菌时采用115℃20min，以免蔗糖分解。

【接种】取血液5ml及其它标本直接接种于高盐、高渗糖液体培养基，置35℃培养1～7d，每天观察细菌生长情况。

【质量控制】金黄色葡萄球菌L型生长良好。

【观察结果】在上述增菌培养基上，L型细菌呈颗粒状生长，颗粒可黏附于管壁或沉淀于管底。 ★L型增菌培养基

【用途】用于血液、脑脊液等体液标本中L-型细菌的增殖培养。

【原理】L型细菌由于细胞壁的缺陷，在高渗或低渗环境中容易造成菌体破裂。故L型细菌的朋友必须提供一个高渗和富有营养的条件，此能生存和繁殖。

【成分】（1）牛肉浸液1L老黄牛30～40蛋白胨20（2）牛肉浸液1L老黄牛30蔗糖150蛋白胨20pH7.4～7.6

【制备】将各成分称量混合加热溶解后，校正pH，分装培养瓶，每瓶15ml，121℃15min灭菌备用。

【接种】用无菌操作采集标本，立即接种到L型细菌液体培养基和常规血液增菌培养基内，标本与培养基之比例为1：10，置35℃培养3～7d，逐日观察。

【质量控制】用L型细菌做生长试验，配音24～72h，生长良好。

【观察结果】如发现培养液产生浑浊、溶血、絮状沉淀或瓶壁上附有粘性颗粒等细菌生长现象，立即分离到L型细菌分离平板上进行鉴定。

【保存】置冰箱内使用1～2周。

★布氏肉汤

【用途】供培养弯曲菌用。

【原理】弯曲菌的生物学特性必须在有丰富氨基酸和还原性的微需氧状态下，才有利于生长。

【成分】胰酶解酪蛋白10蛋白胨10葡萄糖1酵母浸膏2老黄牛5重亚硫酸钠0.1蒸馏水1LpH7.0±0.2

【制备】将上述成分混合于蒸馏水中，加温溶解，校正pH，分装于试管每只4ml，经121℃灭菌15min，低温保存备用。

【接种】取血液或脑髓液标本接种于培养基内每份标本接种2支，接种标本量与培养液的比例为1：10，然后分别置25℃、35℃含5%氧气、85%氮气、15%二氧化碳的环境下，培养48h观察结果。

【质量控制】自制或商品培养基在使用前，必须选用标准菌株进行生长试验，生长良好者方可应用。

【观察结果】若培养基内菌落呈均匀浑浊生长，即取培养物进行涂片染色镜检，并同时分离接种于改良弯曲菌落血琼脂平板上进行培养鉴定。

【保存】置冰箱内1～2个月有效。

【临床经验】1.布氏琼脂，即每升布氏肉汤中加入12g琼脂分即成。

2.培养基主要用于血液、脑脊液标本的增菌培养。

★李斯特郡增菌培养基

【用途】李斯特菌增菌培养用。

【原理】萘啶酮酸对多数革兰阴性细菌有抑制作用，而盐酸丫啶黄对部分革兰阳性球菌有抑制作用，培养基中高浓度的胨、酵母膏等有利于目的菌的生长。

【成分】蛋白胨17大豆胨3酵母浸膏6老黄牛5磷酸氢二钠2.5葡萄糖2.5盐酸丫啶黄溶液2.5ml萘啶酮酸溶液2.5ml蒸馏水1LpH7.2～7.5

【制备】1.除后两种外，将其它成分混合，加热溶解，调pH至7.2～7.5，分装每瓶225ml，置121℃15min高压灭菌，备用。

2.临用前，以无菌操作，每225ml，加入盐酸丫啶黄和萘啶酮酸各2.5ml，混匀可使用。

【接种】取粉碎的阳平25g，放入上述培养基中，经30℃培养24～48h，转种分离平板。

【质量控制】配成的培养基应呈淡黄色透明。

阳性指控菌：产单核李斯特菌，ATCC19117。

阴性指控菌:金黄色葡萄球菌，ATCC25923。

【临床经验】盐酸丫啶黄溶液配法，盐酸丫啶黄15mg，加无菌蒸馏水10ml，溶解后过滤除菌。 萘啶酮酸溶液配法：萘啶酮酸40mg，加0.05mol/LNaOH10ml，溶解后过滤除菌。

★TTC沙保罗培养基

【用途】用于临床标本中酵母与酵母菌分离。

【原理】该培养基酵母杨真菌分离效果理想，氯化三本四氮唑（TTC）起到菌落的鉴别作用，热带念珠菌为紫红色，白色念珠菌为无色，其它念珠菌为淡红色，氯霉素可抑制某些细菌和污染霉菌的生长，而对酵母杨真菌的生长不影响。

【成分】葡萄糖40蛋白胨10琼脂15蒸馏水1L氯霉素50mg1%TTC水溶液5ml

【制备】上述前5项成分混合溶解，最终pH至5.6。高压灭菌（121℃15min）后加入氯霉素和TTC液，充分混匀，分装试管，制成斜面或倾注平板。

本培养基不加琼脂u，即为沙氏葡萄糖液体培养基。

★玉米粉琼脂

【用途】鉴定酵母样真菌用。白色念珠菌在此培养基上可产生假菌丝和厚壁孢子。

【成分】玉米粉（白色的布适用）40琼脂10～15蒸馏水1L

【制备】将玉米粉加入500ml蒸馏水中，搅匀，65℃加热30min；用纱布过滤，补足原水量；将琼脂加入500ml蒸馏水中，加热溶化；将玉米粉浆与溶化的琼脂混合，趁热用纱布过滤，分装试管，高压灭菌15磅15min，备用。

【临床经验】该培养基中加10ml/LTween80，可制成玉米粉Tween80琼脂，用途相同，效果更好。 ★AB琼脂板

【用途】用于解脲脲原体和人型支原体的培养。

【成分】超纯水0.825LCaCl2·H2O0.15胰酶解大豆蛋白肉汤干粉（BD）2酵母提取物2二氯腐胺

1.7DNA0.2选择琼脂（BD）10.5

【制备】配制1L，将上述成分放入烧杯内，混匀，用2mol/LHCl调节pH到5.5，121℃15min高压灭菌。如果用于琼脂平板，冷却至56℃水浴。

添加物：马血清200mlEsoVitaleX（BD）4mlGHL三肽溶液1ml2%L-半胱氨酸（加入当日配制）5ml青霉素G1000U/ml

每种成分分别制备，不是无菌的需过滤除菌，将每种成分加入培养基中，调节pH至6.0。如果加入琼脂倒平板，冷却2h后翻扣平板，置室温过夜，封入塑料袋置4℃可保存3个月。

★10B肉汤

【用途】用于解脲脲原体和人型支原体的培养。

【成分】超纯水0.825L无结晶紫支原体肉汤（BD）14精氨酸2DNA0.21%酚红（每月新鲜配制）1ml

【制备】配制1L，将上述各成分放入烧杯内，混匀，用2mol/LHCl调节pH到5.5。121℃15min高压灭菌。如果用于琼脂平板，冷却至56℃水浴。

添加物：马血清200ml25%酵母提取物（Difico）100mlIsoVitaleX（BD）5ml10%L-半胱氨酸（加入当天配制）2.5ml

每种成分分别配制，不是无菌的需过滤除菌，将每种成分加入基础培养基中，调节pH到5.9～6.1。置4℃可保存3个月。

★SP-4肉汤和琼脂平板

【用途】用于肺炎支原体及人型支原体的培养。

【成分】超纯水0.643L无结晶紫支原体肉汤粉3.5胰蛋白胨10蛋白胨5.3精氨酸（用于人型支原体培养时）21%酚红（每月新鲜配制）2mlDNA0.2Noble琼脂（制备SP-4琼脂平板）15

【制备】配制1L，将上述各成分放入烧杯内，混匀，用2mol/LHCl调节pH到5.5，121℃15min高压灭菌。如果用于琼脂平板，冷却至56℃水浴。

添加物：10×CMRL1066（Gibco）50ml25%酵母提取物35ml2%自溶酵母水解物100ml灭火胎牛血清170ml5%葡萄糖10ml青霉素G1000U/ml

每种成分分别制备，不是无菌的需过滤除菌，将每种成分加入基础培养基中，调节pH到7.4～7.6（用于肺炎支原体培养），或调节pH到7.0并加入精氨酸（用于人型支原体培养）。如果加入琼脂倒平板，冷却2h后翻扣平板，置室温过夜，封入塑料袋置4℃可保存3个月。

运送、保存细菌培养基

★Cary-Blair运送培养基

【用途】供弯曲菌、霍乱弧菌、沙门菌、志贺菌的标本采集及保存适用。

【原理】该培养基具有抗氧化和缓冲等作用，达到保护病原菌的存活力，适用于标本长途运送，但保存时间不能超过72h。

【成分】硫乙醇酸钠1.5硫酸氢二钠1.1老黄牛5.0！%氯化钙水溶液9.0ml琼脂粉2.5～3.0蒸馏水1LpH8.4

【制备】将上述成分（除氯化钙）加入蒸馏水中，加热溶解，冷却到50℃时，加入氯化钙溶液，将pH校正到8.4，分装试管每只5ml或注入具有胶塞的瓶内，以121℃灭菌15min，冷藏用。

【接种】用灭菌棉签或吸管取标本0.5g或1～1.5ml立即加入培养基中，密封管或瓶口，表明标本名称或标本号迅速送实验室进行检验。

【质量控制】选用沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌以及空肠弯曲菌标准菌株进行存活力的检查，应于35℃3d内存活，方可使用。

【保存】置冰箱内，3周有效。

★缓冲甘油盐水保存液（buffered glycerol saline）

【用途】用于粪便标本的保存和利用。

【成分】磷酸氢二钾3.1磷酸二氢钾1氯化钠44.2中型甘油300ml蒸馏水0.7L0.1%酚红水溶液10mlpH7.3～7.5

【制备】将前三种溶液混合于水中，加热溶解，加入甘油，充分摇匀，调节pH7.3～7.5，再加入指示剂，分装试管，经121℃灭菌15min备用。

【接种】用灭菌棉签或吸管取标本0.5g或1～1.5ml立即加入培养基中，密封管或瓶口内，注明名称和标本号迅速实验室进行检验。

【质量控制】1.配成培养基应呈橘红色，pH不得低于7.2，否则要影戏那个肠道菌的检测。

2.选用伤寒沙门菌和宋内志贺菌进行存活力的观察，于35℃24h内存活，方可使用。

★改良Cary-Blair运送培养基

【用途】运送厌氧菌标本用。

【原理】该培养基具有抗氧化和缓冲作用，能保护病原菌的存活时间。此培养基几乎无营养成分，但能保持氧化还原较低的电势及稳定的pH值，有利于厌氧菌的生存。

【成分】硫乙醇酸钠1.5氯化钠5磷酸氢二钠0.1亚硫酸钠0.1琼脂5蒸馏水0.991LL-半胱氨酸0.5 1%氯化钙水溶液9ml0.025%刃天青水溶液4mlpH8.4

【制备】除半胱氨酸、氯化钙、刃天青、，其他成分混合，加热溶解，通入二氧化碳至冷却，加入半胱氨酸和氯化钙，调pH至8.4，再加入刃天青，摇匀，分装于带胶塞的灭菌小瓶中，同时充氮，用铅笔密封，抽取瓶中空气，连续充氮3次，再充二氧化碳，最后进行流动空气间歇灭菌，备用。

【接种】用灭菌棉签或吸管取标本0.5g或1～1.5ml立即加入培养基中，密封管或瓶口，注明标本名称和标本号迅速送达实验室进行检验。

【质量控制】1.配成培养基应呈无色半固体状。

2.产芽孢梭菌在此培养基中存活良好。

药敏用培养基

★Mueller-Hinton琼脂

【用途】用于细菌对抗菌药物敏感试验琼脂扩散法。

【原理】该培养基的特点是胸腺嘧啶核苷酸含量低，不干扰磺胺类的测定。另外，钙离子和镁离子的浓度也被控制，使其不干扰氨基糖苷类药物的测定。

用Mueller-Hinton琼脂（水解酪蛋白琼脂）或自制，专用于敏感试验。

【成分】牛肉浸液0.6L酪蛋白酸水解物17.5淀粉1.5琼脂17蒸馏水0.4LpH7.2～7.4

【制备】上述各成分混合，校正pH。121℃灭菌15min，冷却至50℃左右，倾注平板。琼脂平板厚度4mm。

【接种】按NCCLS的操作标准，用棉拭子蘸菌液均匀涂布平板，贴药敏纸片放35℃培养过夜。

【质量控制】用质量控制菌株测定药物的抑菌环与NCCLS的标准参比判断培养基的质量。金黄色葡萄球菌，ATCC25923。大肠埃希菌，ATCC25922。铜绿假单胞菌ATCC27853。粪肠球菌ATCC29212或33186。肺炎链球菌ATCC6305。流感嗜血杆菌ATCC10211。

【保存】置冰箱内，1周有效。

【临床经验】1.培养基不加琼脂为Mueller-Hinton肉汤液，用于药敏试验管稀释法。

2.培养基加入5%脱纤维羊血，为血Mueller-Hinton琼脂，可用于链球菌药敏试验。但本唑西林的抑菌环≤19 mm的肺炎链球菌菌株应当用稀释法测定青霉素、美洛培南和头孢塞亏或头孢区松的MICs，因为抑菌环≤19mm，可以发生在青霉素耐药、中介或某些敏感株中，不能仅仅根据苯唑西林的抑菌环≤19mm，就报告对青霉素耐药或中介。对于草绿色链球菌，青霉素、氨苄西林河阿莫西林纸片扩散试验结果不可靠，也应但用稀释法测定。

3.在M-H琼脂基础上，补充辅酶I15mg/ml，牛血红素15mg/ml，酵母膏5mg/ml，胸腺嘧啶脱氧核酸化酶0.2U/ml，可用于流感嗜血杆菌的药敏试验。

4.淋病奈瑟菌用NCCLS推荐的GC琼脂基础+1%特定的生长补充品。此补充品（1L水中加入1.1gL-胱氨酸、0.03g盐酸鸟嘌呤、3mg盐酸硫胺、13mg对氨基苯甲酸、0.01g维生素B12、0.1g辅羧酶、0.25gNAD、1.0腺嘌呤、10gL-谷氨酰胺、100g葡萄糖和0.02g硝酸铁）是在GC琼脂高压灭菌后加入的。

★Wilkins-Chalgren琼脂

【用途】厌氧菌药敏试验用。

【成分】姨酶解酪蛋白10姨酶明胶的胶溶物10酵母浸膏5葡萄糖1氯化钠5L-精氨酸1丙酮酸钠1氯化血红素5mg维生素K10.5mg琼脂15蒸馏水1L

【制备】上述各成分混合，校正pH。121℃灭菌15min，冷却至50℃左右，倾注平板。

★M-H肉汤

【用途】用于稀释法细菌药物敏感试验（MIC和MBC测定）

【原理】因M-H肉汤不含胸腺嘧啶，且镁、钙重金属离子含量低，不干扰磺胺类药及氨基糖酐类药物的抑菌作用，所以适宜细菌药物敏感试验的测定。

【成分】牛肉浸烫0.6L酸水解酪蛋白17.5可溶性淀粉1.5蒸馏水0.4LpH7.3±0.1

【制备】上述各成分混合，校正pH。121℃灭菌15min，备用。如试验对营养要求较高，临用前加血清0.5%。试验方法参照NCCLS稀释法操作规程。

【质量控制】质控菌株同M-H琼脂，凡自配或购置商品培养基均需用质控菌株和药物标准品进行测试，结果符合方可使用。

【临床经验】1.NCCLS推荐使用含氧离子M-H培养基，即在MH液体培养基中含有钙离子10-25mg/L，镁离子10-25mg/L。

2.配法：称取3.68gCaCl2·2H2O溶于100ml无离子水中，即含钙离子10mg/ml储存液。称取

8.36gMgCl2·6H2O，溶于蒸馏水中，即含镁离子10mg/ml储存液。