酵母固态发酵具体实验方案(1)
酵母固态发酵实验方案
一、实验目的
1.学习酵母固态发酵实验步骤、条件。
2.掌握酵母发酵产物的分析方法(气质联用仪的使用)。
3.了解酵母固态发酵的过程以及产物特征。
4.学习自主设计实验的方法与步骤。
二、实验原理
1.酵母与发酵糟醅中微生物区系协同作用,产生复杂的代谢产物。
2.利用气质联用仪可对发酵产物进行成分与含量的分析。
三、实验材料、仪器与试剂
材料:酵母菌、酵母固态发酵酒醅、黄水等;
仪器:气质联用仪、灭菌锅、窖粮糟、锥形瓶、烧杯、接种针、接种环、移液枪等;
试剂:YPD 培养基、糟醅浸汁液体培养基、蒸馏水等。
四、实验步骤
(一)、酵母活化
1.1将保存菌种的EP 管取出,4℃冰箱中解冻2-3h 。
1.2用牛皮纸包好130个平板(每个包12个)、4支接种针、130支10mL 试管,并将1000mL 蒸馏水(洗脱酵母用,130*5=650mL,实验时制备1000mL )分装至4个500mL 锥形瓶中,塞好棉花塞后,用牛皮纸包好,121℃灭菌20min ,灭菌完成后移至超净工作台冷却,备用。
1.3配制YPD 培养基(130株菌,共计130*30mL=3900mL,实验时制备4000mL 备用)
(1)称取40g 酵母膏, 80g蛋白胨于4000ml 水中,加入80g 琼脂粉于电磁炉专用锅(2个)中,加热搅拌溶解,用盐酸与氢氧化钠溶液调pH 为4.5,分装至16个500mL 锥形瓶中;
(2)塞好棉花塞后,用牛皮纸包好,121℃灭菌20min ;
(3)灭菌完成后移至超净工作台冷却至50℃-60℃,制备平板共计130个。
1.4接种酵母,培养
(1)在超净工作台上,用接种针将EP 管中的酵母挑取到制备好的平板上划线(每株菌一个平板);
(2)贴好标签后,移至恒温培养箱中28℃培养至形成肉眼可见的单菌落。
1.5制备酵母菌悬液
(1)在超净工作台上,向平板中加入5mL 先前制备好的无菌蒸馏水(条件允许时用酵母生理盐水),用接种针挑动,洗脱菌落,得酵母菌悬液;
(2)移至10mL 试管中,塞好棉花塞后,贴好标签,备用。
(二)、实验设备转移(实验室至生产现场)
1.准备约140个玻璃发酵坛(每株菌一个共130个,空白糟醅(未拌酒曲)一个、生产厂方发酵生产糟醅(加无菌水5%)一个、发酵完成但未蒸馏的糟醅一个、老师实验用2个、其它5个),装箱;
2.准备150双塑料手套、一张约10平方米塑料纸、150张保鲜膜、10个50mL 烧杯(拌黄水与菌种用)、4支玻璃棒,2-4壶开水(在厂方接取)等;
3.将上述物品与制备好的酵母菌悬液(试管)一并用车带至生产厂方,备用。
(三)、接种、拌和、封坛
1.将10平方米的塑料纸铺开,铲取130*700=91000mL约130*500=65000g=65kg(实验时可相应增加使用量)的糟醅(未拌酒曲)于塑料纸上;
2.分2-4组,拌和。每株菌用35mL 黄水、700mL(500g)糟醅、5mL 酵母菌悬液。
(1)用开水将烧杯与玻璃棒灭菌,冷却;
(2)移取700mL(500g)糟醅于一张保鲜膜上,将35mL 黄水与5mL 酵母菌悬液在烧杯中用玻璃棒拌匀后倒在糟醅上,带上手套拌和均匀(每株菌用一双手套、烧杯与玻璃棒拌菌后用开水灭菌,冷却);
(3)将拌好菌的糟醅移至发酵坛中,压至理想程度后,盖上坛盖,用细沙封口,贴好标签。
(4)操作完成后带走垃圾并打扫好卫生。
(5)将发酵坛转车运回实验室30℃恒温培养30d (开空调调温),定期观察记录。
附:
一、酵母浸提液制备:从厂方带回65kg 的糟醅用1:1的热水浸泡煮
沸5min ,沥取浸提液于塑料桶中(或在厂方将浸提液制备好后带回),冷冻备用
二、王老师实验用发酵材料:
1.700mL(500g)糟醅(拌曲)+半坛黄水
2.700mL(500g)糟醅(拌曲)+整坛黄水
3.具体操作参照酵母固态发酵实验方法。