蝴蝶兰的组织培养技术

蝴蝶兰的组织培养技术

毛红丽

（襄阳职业技术学院．湖北寰阳４４１０５０）

【摘要】探讨了蝴垛兰的组织培养技术和方法。实验证明：用幼叶在散射光下培养诱导蝴蝶兰原球茎的效果最好，最适培养基为：ＭＳ＋６一ＢＡｌｏｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡｌｍｇ／Ｌ水解乳蛋白５００ｍｇ／Ｌ＋蔗培养基为：ＭＡ＋６一ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡｌｍｇ／Ｌ＋

３０９／Ｌ＋琼脂７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）；曩适增殖

解乳蛋白５００ｍｇ／Ｌ＋蔗．糖３０９／Ｌ＋琼．．脂７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）；曩适生根长苗培

７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）。

养基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡｌ．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋Ｏ．３％／ｇ＂性炭＋蔗糖３０９／Ｌ＋琼．

［关键词】蝴蝶兰；原球茎；组织培养

蝴蝶兰是单茎性气生兰．植株极少发育侧芽，且种子极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢。影响了它的推广和应用。笔者通过对蝴蝶兰的组织培养技术的研究。旨在提高

蝴蝶兰的繁殖系数。

２个月后统计原球茎的增殖倍数和原球茎的大小。

以上培养基中另添加５００ｍｅ／Ｌ的水解乳蛋白。７９／Ｌ琼脂和３０ｄＬ蔗糖，ｐＨ值５．４。培养条件均为２５℃，光照时间１６ｈ。光照

强度２０００１）【。１．３壮苗与生根

１材料与方法

将增殖培养所得到的蝴蝶兰小苗转接到各种生根培养基（见表４），每处理１０瓶，每瓶３株，重复３次。培养３０ｄ后统计

１．１实验材料苗的生长情况和生根率、平均生根率。

生根培养基中加入０．３％的活性碳＋蔗糖３０９／Ｌ＋琼脂７９ｎ．。

培养条件均为２５℃，光照时间１６ｈ．光照强度２０００ｈ。

从陕西省西安市鼎天农业科技有限公司购买的大红品系的３４月龄蝴蝶兰幼苗。

１．２实验方法

１．２．１外植体的消毒。从蝴蝶兰植株上取下幼叶（分１４ｄ、３０ｄ）

２结果与分析

和气生根尖，放在自来水下冲洗干净。在超净工作台上，将叶和根尖放入无菌瓶。用７５％酒精消毒３０ｓ。然后用无菌水清洗２．３遍．再用０．１％升汞溶液浸泡ｌＯｍｉｎ（分钟），用无菌水冲洗４—５

遍后待用。

１．２．２原球茎的诱导。将幼叶切成５ｘ５ｍｍ见方的小块和１０ｒａｍ长根尖，平放或按极性接种以ＭＳ为基本培养基。添加激索

２．１

不同的外檀体诱导原球茎的差异

对蝴蝶兰根尖、生长龄为１４ｄ的幼叶和生长龄为３０ｄ的叶

进行原球茎的诱导实验。结果表明（表１）：幼叶的诱导率最高为４７％。它的褐变率最低。只有６％。成熟叶的诱导率很低且褐化严

重到４７％。而根尖没有诱导出原球茎。可见生长龄为１４，ｔ幼叶

ＮＡＡＩｍｇ／Ｌ和不同的浓度ＢＡ（２ｍＵＬ、４ｍｇ／Ｌ、６ｍｇ／Ｌ、８ｍｓ／Ｌ、１０ｍｇ／Ｌ）配比的诱导培养基上，并设置散射光和２０００ｈ两种作

比较，每瓶接种一个．每处理１０瓶．重复３次。培养２个月后观

最有利于原球茎的产生。还发现在同一叶片上．叶基部的切块

较叶中和叶尖的切块诱导率高。对于比较小的幼叶，未切割时

也能诱导出原球茎。

２．２不同浓度的ＢＡ对原球茎诱导的影响

选用生长龄为１４ｄ．大小为ｌｅｍ左右、叶色墩绿的叶片为诱导材科。灭菌后接种到含不同浓度的ＢＡ培养基上培养。堵养１５—２０ｄ发现叶片被切割周围产生浅绿色的原球茎状小突起．很次．能有效地控制菌核病的漫延。老黄叶也是菌核病和霜霉病等病害传播源．容易将病害传刭其他叶片，尤其受冻叶霜霉病重。摘除老黄叶则可防治或减轻菌核病等病害的发生。促进植株的生长发育。另外。油菜生长中后期要加强对蚜虫的防治，减

轻病虫害损失。

察统计不同外植体在不同培养基中原球茎的诱导率及生长情况。１．２．３原球茎的增殖。将诱导的原球茎按３—５个为一团接种刭以ＭＳ为基本培养基添加激素ＮＡＡｌｍｓａ．．和不同的浓度ＢＡ（０、２ｍｇＩＬ、４ｍｇ／Ｌ、６ｍａＬ、８ｍｇ／Ｌ、１０ｍｅ／Ｌ）配比的增殖培养基中，培养苗肥多、长势好的田块一般不提倡在开春后施追肥．以免造成

贪青倒伏。

２．３加强病虫害管理

菌核病是油菜的主要病害，开花期和角果发育期最易发生，一般年份可减产ｌ一３成．严重的可以造成大幅度减产甚至绝收．因此防治苗核病是实现油菜丰收的重要环节。首先要抓

好清沟排溃．捧除田间渍水．降低田问湿度．从而茂小病菌繁殖。其次是及时药剂踌治．可选用５０％多菌灵可湿性粉卉畸０．１。

作者简介：

张英杰（１％７一’，女．湖北琏州人，ｌ奚职生技术学院捌教授，主要从事种植专生麓学与科研工作。

０．２ｋｇ或４０％菌核净Ｏ．１加．２ｋｇ免水５０ｋｓ。在油菜花期防治１－２

—２６一

万方数据

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快发育成为原球茎。

由表２可知．不同浓度的ＢＡ对原球茎的诱导率和原球茎

的大小影响比较明品。随着ＢＡ浓度由２ｍ班增加到１０ｍｇｌ，，原

囊＇

不同外粤体诱导原球茎的差异球茎的诱导率也由６＿３３％逐渐增大．当ＢＡ为１０ｍｇ／Ｌ时．诱导率最高达４１．６７％．说明高浓度ＢＡ促进原球茎的诱导。

但原球茎直径是随ＢＡ浓度的增大。由小到大．再由大到小。ＢＡ６ｍｇ／Ｌ时原球茎的直径最大为３．Ｓｍｍ。ＢＡｌｏｍｇ／Ｌ时原球茎的直径最小为０．９ｍｍ。不足１ｍｍ。在实验中发现当原球茎不足Ｉｍｍ时。很难进一步增殖生长；诱导出的原球茎越大．越有利增殖生长。所以在原球茎的诱导实验中。选择ＢＡ的最佳浓度为６ｍｇ／Ｌ。

２．３不同光照条件对原球茎诱导的影响

在对原球茎进行诱导的过程中。发现外植体很容易褐化。抑制叶片揭化的方法是勤换培养基（１０ｄ换１次）．及时将叶片移入新鲜的培养基．可减轻褐化状况。培养时还发现，褐化的程度与培养时的光照强度有关，当光照强度为２０００Ｉｘ时．叶片褐

化的程度较严重．

达４０％左右：当光照强度为其他培养架反射过来的弱散射光时．褐化得到了较好的抑制．仅为ｌＯ％左右。

２．４不同浓度ＢＡ对原球茎增殖与诱导出苗的影响

将诱导出来的原球茎转接到增殖培养基中进行增殖培养。表３可知．不同浓度的ＢＡ对原球茎的增殖和原球茎的大小影响比较明显。随着ＢＡ浓度的增加，原球茎增殖倍数逐渐增加但原球茎的大小呈先升后下降趋势。当ＢＡ为１０ｍ＃Ｌ时。原球茎的增殖倍数虽达到最高７．１２。但原球茎的大小最小为０．９。在原球茎增殖的同时。产生大量的丛生芽．但丛生芽长得较为弱小；如果降低ＢＡ的浓度．当其为２ｍｇ／Ｌ原球茎的增殖系数减少。但形成的多而粗壮。所以ＢＡ的最佳浓度为２ｍｇ／Ｌ。

２．５原球茎的生根

壮苗

将增殖得到的小

苗转入到生根壮苗．培养基中。由表４可知。

当基本培养基为１，

２ＭＳ．ＮＡＡ为００５ｍｇＬ．ＩＢＡ为１．ＳｍｇＬ时。苗的生根率达到最高

５００％．且苗的生长势最健壮。

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３讨论

３．１

影响原球茎诱导的因素

在蝴蝶兰的同体培养中．进行原球茎诱导的外植体选择

时．明显地发现生长肥厚的幼嫩叶片的诱导率最为理想。这与杨美纯等的研究一致。在实验中还发现．叶基部的切块较叶中和叶尖的切块的诱导率高。在对叶片切割时，过多的切口会使叶片褐化死亡。所以在对幼叶切割时，将叶片从叶基部切下。可以获得最高的诱导率。

在原球茎的诱导过程中。ＢＡ的浓度对原球茎的诱导效率和生长势有很大的影响。在ＢＡ为０一ｌＯｍｇ／Ｌ的范围内．随着ＢＡ浓度的升高原球茎的诱导率也在增加，但原球茎的生长势却不好。近年来。一些研究只报道了ＢＡ浓度对原球茎诱导率的影响。却没研究对诱导出的原球茎的生长势的影响。笔者结合两方面的比较．确定最终的ＢＡ的浓度为６ｍｇ／Ｌ．这样诱导率比较高。且原球茎的生长状况良好。为原球茎的进一步增殖打下基础。光照条件也是影响原球茎诱导的一个重要因素。散射光有利于原球茎的诱导。并能有效地减轻叶片诱导时的褐化状况。３．２影响原球茎增殪的因素

在对蝴蝶兰原球茎的增殖实验中研究发现。随着ＢＡ浓度的增加。原球茎的增殖率提高。并且在不加ＢＡ的条件下。原球茎也能增殖．这可能是原球茎自己体内已积累了较高水平的细胞分裂素的缘故。这与周俊辉、王芳的报道一致，但与王亦菲、彭立新的结果不同。另外。从控制遗传变异方面考虑．不应使用高浓度的激素组合．以免原球茎多代增殖后形成异常苗。在实验中还发现．原球茎在切割时。不应切的太小．否则褐化情况严重。在接种时．原球茎应紧密的靠在一起．这样才能生长旺盛。从实验中可以得出原球茎在增殖生长时。具有较强的群体优势效应．与彭立心、马子骏和周俊辉的报道一致。３．３影响蝴蝶兰生根壮苗的因素

在蝴蝶兰生根壮苗培养中发现．１，２ＭＳ比ＭＳ的效果好。ＮＡＡ浓度对出苗率没有多大影响。活性碳的添加．可以有效防止原球茎褐化．有利于小茁的生长。参考文献

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发生的影响ＬＪ】．广西植物．２０００．２０（１）：４２—４６．

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作者简介：

毛红膏（１９６１一）．女．ｔ英职业技术学院生物工程学虎工作。

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