蚕豆根尖微核测试
蚕豆根尖诱变物质的微核测试
生师(1)班
组员:刘春斗,柳俊,
一、实验目的
了解微核测定的方法和意义
二、实验原理
微核(micronucleus, 简称MCN),也叫卫星核,是真核类生物细胞中的一种异常结构,是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子,如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样,也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明,整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即形成了微核。已经证实,微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关,这一点与染色体畸变的情况一样。
致变因素——
化学因素:药物(环磷酰胺、氮芥、白硝安、甲氨喋呤、阿糖胞
苷等抗癌药物;农药(有机磷农药);工业毒物(苯、甲苯、铝、砷、二硫化碳、氯丁二稀、氯乙烯单体等);食品添加剂(食品的防腐剂、色素等)
物理因素:电离辐射,微小剂量的射线能不断积累
生物因素:生物体产生的生物类毒素;某些生物体(如杂色曲霉等)
母体因素:因年龄等
三、实验材料
1.蚕豆——根尖细胞的染色体大,DNA含量高,因而对诱变因子反应敏感。
2. 器具和药品
显微镜、手动计数器、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯。6mol/L盐酸、甲醇、冰醋酸、醋酸洋红、K2Cr2O7。
四、实验内容
实验选取蚕豆20粒,平均10粒分2组进行实验,ABC,A组
100mg/LK2Cr2O7 150ml浸泡,B组50mg/LK2Cr2O7150ml浸泡,C组25mg/LK2Cr2O7150ml浸泡,D组150ml蒸馏水浸泡,观察相同时间内不同因素对细胞的影响。
A组浸泡24h
B组浸泡24h
C组浸泡24h
D组蒸馏水浸泡24h
五、实验步骤
(1)浸种催芽:将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中,在25℃下浸泡24小时,此间至少换水两次,所换水应25℃预温。种子吸胀后,用纱布松散包裹置瓷盘中,保持温度,在25℃温箱中催芽12~24小时,待初生根长出2~3mm时,再取发芽良好的种子,放入铺满滤纸的瓷盘中,25℃继续催芽,经约36-48小时,大部分初生根长至1~2cm左右,根毛育良好,此时可用来进行实验。
(2)检测因子处理根尖:选取初生根生长良好,根长一致的种子,放入盛有被测液的培养皿中,被测液浸没根尖即可。
(3)根尖细胞恢复培养:处理后的种子用自来水(或蒸馏水)浸洗三次,每次2~3分钟。洗净后再置入辅有混润滤纸的瓷盘中,25℃下再恢复培养22~24h。
(4)固定:将恢复后的种子,从根尖顶端切下1cm长的幼根,用甲醇:冰醋酸(3:1)液固定24小时。固定后的根如不及时制片,可换入70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。
(5)解离:用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次,每次5分钟,吸净蒸馏水,加入6mol/L盐酸将幼根浸没,室温下酸解10分钟,幼根软
化即可。
(6)染色:吸去盐酸,用蒸馏水浸洗幼根三次,每次1~2分钟。截下1~2mm左右长的根尖,滴加醋酸洋红染液,染色5~8分钟,加盖玻片,压片观察。
六、实验结果
首先在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀,分裂相较多的部位,再转高倍镜观察。微核大小在主核1/3以下,并与主核分离,着色与主核一致或稍浅,呈圆形或椭圆形。每一处理观察3个根尖,每个根尖数1000个细胞,统计其中含微核的细胞数,然后平均,即为该处理的MCN%,即微核千分率,以此可作一个检测指标。 污染指数(PI)=样品实测MCN%平均值/对照组(标准水)MCN%平均值
鉴定出你所测水样的污染程度,也可以计算被检化学药剂的污染指数。
污染指数在0~1.5区间基本没有污染
1.5~2区间为轻度污染
2~3.5区间为中度污染
3.5以上为重度污染。