发酵罐使用方法
操作前请认真检查冷水机、空压机、反应器、进出水管、气管情况。填好使用说明书。 开机:先打开其他单元上的开关,再打开主机背后的开关。
关机:先把控制器上所有单元的参数状态调到off ,把进气开关打开后关机;关机时先 关控制器后面的开关,再关其他单元上的开关。
灭菌操作
1、取下马达,平放于桌上。罐顶端套上黑色保护帽。
2、由罐上取下温度传感器,该传感器不需要灭菌。
3、取下PH 电缆线,盖上红色保护帽;将PH 电极要插到底。务必拧紧电极的上下两个固定螺帽。PH 电极灭菌前要标定。PH 电极标定:接好电缆后拧开电极的固定螺帽(第一个),将PH 电极取出后用去离子水冲洗干净后,轻轻用面纸吸干上面的水后先放入标准溶液4.01中校正,等控制器上数据稳定后在 set zero 处输入4.01(不管实际数值的微弱差别);输入完闭后从标准液中取出电极,冲洗、吸干后放入7.00的标准溶液中,等控制器上数据稳定后在set span处输入7.00(不管实际数值的微弱差别)。PH 电极校正后不要关控制器。
4、取下DO 电缆线,DO 电缆接口处用锡箔纸包好后套上黑色帽。DO 电极灭菌完后标定。DO 电极要插到底,拧紧电极的上下两个固定螺帽。灭菌前要注意溶氧电极里头的保护液是否还有,没有则要进行添加。
5、取下消泡或液位电缆线,将消泡或液位电缆插到底,灭菌后定位到所需要的高度后就不要再压下去。消泡电极的高度离液面约1.5cm 处。
6、拆下发酵罐上和冷凝器上的进、出水管,拆下的同时要用夹子夹住拆下水管的接头处,以防水流出。
7、发酵罐上的过滤器的两端多要用夹子夹死,过滤器的出口处用锡箔包好,所有过滤器的两端多要用夹子夹住。发酵完毕倒罐后注意检查过滤器是否被打湿,若有则赶快用吸球将其中的液体吹出。
8 、用铁夹夹死收获管上的硅胶管以防在灭菌锅内跑液。收获管不用时上面一定要卡死不移走。
9、在灭菌前. 将发酵罐的六个固定螺帽拧松出气,其他螺帽一定要拧紧!灭菌完后打开高压锅后立刻将其拧紧,注意戴上手套防止被烫伤。
10、酸不要放高压锅内灭菌,将空的酸液瓶上的过滤器用锡箔包好,并将瓶盖拧松出汽。灭菌完后去掉锡箔过滤器上的锡箔纸作为出汽口。(注意与酸瓶相连的硅胶管不要卡死);碱液瓶和硅胶管可以一起灭菌(与碱液瓶相连的硅胶管要卡死)。
11、取下电热夹套将其平铺于桌面。
12、灭菌前调整好搅拌叶的位置,底下的搅拌叶尽量靠近空气分布器,上面的一个位置调整到所加发酵液的中间位置。
13、取样器的位置不要靠近挡板的位置,尽量靠中间位置。
14、灭菌前将取样器的吸球取下。所有的硅胶管不要靠到高压锅的内壁上。
灭菌完毕后
1、将六个松开的固定螺帽和酸碱瓶盖拧紧。
2、去掉包在过滤器上的锡箔纸和卡硅胶管的夹子。
3、装上马达,若马达内侧润滑油干了,涂上适量的凡士林。
4、接上溶氧电缆线后进行DO 电极标定:灭菌完后接上DO 电极的电缆线后在set zero处输入0;将反应器的空气流量控制在1L/min,Agitation调到100r/min过夜,早上开在set span 处输入100后按确认键。
5、等温度降到发酵所需温度时接好各进出水管、PH 电缆线,消泡电缆线。
6、在放入温度电极之前,先往温度电极的进口里滴加甘油,插入电极后继续滴加到冒出止。注意温度电极要插到底。
7、. 检查空压机的输出压力,应在0.7~1.0kg/cm3 范围内。
8、消泡剂的硅胶管要按从下往上顺序在泵上安装。
冷水机工作温度的设定
开机:接好进出水管→打开总电源→进行温度设计→打开循环泵→开始制冷
关机:先关制冷开关→关循环泵开关→同时将进、出水口阀门关闭→关上电源
温度设定:开机→面板显示“PP0.0” →按“移位键”和“调整键”后显示“PP0.1”
→按SET 键确认→此时面板显示上限值,按“移位键”和“调整键”设定上限值→按SET 键确认→此时面板显示下限值,按“移位键”和“调整键”设定下限值→按SET 键确认→再按SET 键→再按SET 键→面板显示结束标志“---”,按SET 键回到测量显示,设置结束。
上述操作结束后准备接种
接种准备:准备好铁挡板、打火机、酒精喷壶、接种圈、装95%乙醇的搪瓷缸容器、尖头钳子、活动扳手,接种瓶。
接种操作
1、移开接种口附近的胶管,将铁挡板围住接种口后用酒精喷壶朝接种口处喷酒精后点着,(注意:如果有火焰顺着酒精溢出铁板外,则需要吹灭铁板两侧溢出的火焰。)
2、将接种圈沾酒精点着后套住接种口处,将扳手或钳子沾酒精后拧开螺帽后用钳子将其夹住拿出,吹灭螺帽和钳子上的火焰后迅速放入装95%乙醇的搪瓷缸容器里。
3、将接种瓶在火焰处拔开后迅速倒入发酵罐内。完毕后用钳子夹出螺帽拧上。整个过程确保无菌操作!
溶氧设定:发酵模式下溶氧的控制由有四种情况:按off 键→按control 键→ 按Auto 键→setup→cascade→选择以下四种模式。
1、None 状态:溶氧的控制主要通过增加空气流量和设定好固定的转速来控制。
2、Agit 状态:溶氧的控制主要通过提高转速来控制,此状态在空气流量保持不变的情况下溶氧随着细胞消耗降低时通过增加转速来提高溶氧水平。直到转速达到设订的转速上限值为止。该过程为自动控制。
3、02 状态:该状态主要通过控制氧气与空气的混合百分比来控制。溶氧随着氧气百分比的增加而增加。为自动控制过程。
4、Agit/ 02 状态:该状态中溶氧的控制先是通过提高转速来增加的,当转速达到设定的上限值时若实际溶氧值仍没达到所需要的设定值,此时转速控制在上限值,开始以从小到大的百分比自动提高氧气的进入量,直到达到所设定的溶氧值附近为止。该过程亦为自动控制过程。
注意:在使用Agit 状态和Agit/ 02 状态时,若实际溶氧值与设定值相差太大,则要确保所设定的搅拌转速上限值不要太大,否则转速会瞬间内增大带来太大的剪切力和大量的泡沫。实际操作中可以同时通过空气流量计的手动控制来辅助操作。
按off 键→按control 键→ 按Auto 键→setup→此时界面中出现的P Gain和 l Gain为两个出厂设定好的参数,不要改动。
其他控制操作:
选择U1:1、开机后→按use 键→按U1~U4单元的Fermentation 或cell culture键选择发酵模式或细胞培养模式;连续按翻阅键→分别对U1~U4单个单元进行控制操作。
2、Tem→按off 键→按control 键→ 按Auto 键→ 按setpoint 键,输入设定值→按确定键→按 Disp Hi 输入上限值后按确定键→ 按 DispLo 输入下限值后按确定键;输入值若有错误按删除键后更改。
搅拌设定:按off 键→按control 键→ 按Auto 键→ 按setpoint 键→输入设定转速值→按确定键→Disp Hi和DispLo 值的设定如上。
Pump A: 1、off→按control 键→按manual→按 setpoint 设定百分比(以10秒为单位,如键入20%表示转2秒停8秒:100%表示连续运转)→Disp Hi和 DispLo 的设定同上。PumpB 和PumpC 的设定与PumpA 相同。
2、off→按control 键→按Antiforma(消泡) 键 →wet on和wet off 分别调节液位的高低。
3、PumpC 暂时没有连接蠕动泵;蠕动泵3与碱相连,蠕动泵4与酸相连。
PH 值设定:1.off→按control 键→ 按Auto 键→ 按setpoint 键→输入设定值后按确定键→Disp Hi 和Disp Lo值的设定如上。
dO2值设定:按off 键→按control 键→ 按Auto 键→ 按setpoint 键→输入设定值后按确定键。
O2流量设定:按control 键→ 按Auto 键→按setpoint 键输入设定的百分比。
Unit2、Unit3、Unit4的操作同上。
发酵罐指工业上用来进行微生物发酵的装置。
发酵罐的分类:
按照发酵罐的设备, 分为机械搅拌通风的和非机械搅拌通风发酵罐。
按照微生物的生长代谢需要, 分为好气型发酵罐和厌气型发酵灌。
发酵罐广泛应用于乳制品、饮料、生物工程、制药、精细化工等行业,罐体设有夹层、保温层、可加热、冷却、保温。罐体与上下填充头(或雏形)均采用旋压R 角加工,罐内壁经镜面抛光处理,无卫生死角,而全封闭设计确保物料始终处一无污染的状态下混合、发酵,设备配备空气呼吸孔,CIP 清洗喷头,人孔等装置。
发酵罐的主要部件:
传动部件: 是传动装置,是电动机和搅拌器链接部件
机械密封:阻止外界气体,微生物进入发酵罐
电动机: 搅拌器的动力来源
入孔: 加料
取样口: 取小量样品检验
冷却水出口: 导出冷却水
温度计口: 放置温度计进行温度监测
视镜: 观察发酵罐内部
进气口、排料口:通入洁净空气,放出发酵物出口
仪表口:搁置仪器显示器
热电偶口: 热和电的传感器将热信号转换为电信号
PH 电极口:PH 的监测器,就是酸碱度的检测器
冷却水进口: 输入冷却水,当发酵温度高是进水
打泡器: 可以产生气泡,使空气中的氧气溶解在发酵液中
搅拌机构:搅拌,使发酵物分散均匀,使温度,氧气,PH 分散均匀
罐体:主要用来培养发酵各种菌体,密封性要好(防止菌体被污染)
罐体当中有搅拌浆,用于发酵过程当中不停的搅拌
底部通气的Sparger ,用来通入菌体生长所需要的空气或氧气
罐体的顶盘上有控制传感器,最常用的有pH 电极和DO 电极,用来监测发酵过程中发酵液pH 和DO 的变化控制器,用来显示和控制发酵条件等等.
发酵罐的使用方法操作步骤:
1) 校正pH 电极和溶氧电极。
2) 罐体灭菌。根据需要将培养基配入罐体,按要求封好后将罐体放入大灭菌锅灭菌(115℃,30分钟)。
3) 待罐体冷却后,将其置于发酵台上,安装完好;打开冷却水,打开气泵电源,连接通气管道开始通气,调节进气旋钮使通气量适当;打开发酵罐电源,设置温度、pH 、搅拌速度等, 640r/min下开机转动30min ,设定溶氧电极为100。
4) .待温度稳定,各项参数都正确后,将预摇好的种子接入,开始发酵计时,并开始记录各种参数。
5) .发酵完毕后清洗罐体和电极,将电极插入有4M 氯化钾的三角瓶中待用。
注意事项:
1) 罐体灭菌前务必检查其中液面高度,要求所有的电极都没于液面以下。
2) 打开发酵罐电源前务必检查冷却水是否已打开,温度探头是否已插入槽中,否则会烧坏加热电路。
3) 发酵过程中一定要保持工作台的清洁,用过的培养瓶及其它物品及时清理,因故溅出的酸碱液或水应立即擦干。
4) 对罐体安装,拆卸和灭菌时要特别小心pH 电极和罐体的易损又昂贵部件。