生物药剂学和药物动力学实验

生物药剂学与药物动力学

实验讲义

中药药剂学教研室编写

2006年12月

目 录

实验一 片剂溶出度试验························································································· 4 实验二 尿药法测定水杨酸钠片剂的生物利用度··················································· 7 实验三 扑热息痛血管外给药的药物动力学研究················································· 10 实验四 大鼠在体小肠吸收实验············································································ 13 实验五 氨茶碱药物动力学的研究········································································

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生物药剂学与药物动力学实验须知

生物药剂学与药物动力学属于药物临床应用学科的范畴，具有综合性强、应用性强、创新性强等特点。生物药剂学与药物动力学实验是教学的重要组成部分，是理论与实践结合的主要方式之一。通过实验课不仅能印证、巩固和扩展教学内容，还能训练基本操作技能，培养良好的实验作风。

为保证实验课顺利进行，并达到预期的目的，实验中必须做到以下六个方面：

1．预习实验内容 通过预习，明确实验目的与要求，对实验内容做到心中有数，并能合理安排实验顺序与时间。要明确每个处方中药物与辅料的用途。

2．遵守实验纪律 不迟到，不早退，不旷课，保持实验肃静，未经许可，不得将实验室物品带离实验室。

3．重视药剂卫生 进入实验室必须穿整洁的白工作服。先将工作台面擦洗干净再开始做实验。实验过程中应始终注意台面、地面的整洁，各种废弃物应投入指定位置，不能随手乱丢，更不能弃入水槽内。完成实验后，应将容器、仪器清洁，摆放整齐，台面擦净，经教师同意后方能离开。值日生负责整理公用器材，清扫实验室，关好水、电、门、窗。

4. 细心操作、勤于思考 称量药品、试剂时，要在称量前（拿取时）、称量时和称量后（放回时）进行三次核对。称量完毕应立即盖好瓶塞，放回原处。对剧毒药品更要仔细核对名称与剂量，并准确称取。实验中要严格控制好实验条件，认真操作每一道工序，以保证成品质量。实验成品应标明名称、规格、配制者、配制时间，并交教师验收。实验中遇到问题应先独立思考，再请教他人。在实验中逐步形成整洁、细致、严谨、冷静、善于观察、善于思考、勤于动手的实验风格。

5．正确使用仪器、注意安全 使用仪器时要按使用方法正确操作，不熟悉操作方法时，应在教师指导下使用。各种仪器、容器使用时要注意轻拿、轻放，用毕要清洁后放回规定位置。

6. 写好实验报告 实验报告是考察学生分析总结实验资料能力和写作能力的重要方面，亦是评定实验成绩的重要依据。实验报告的格式如下所示：

【实验目的及原理】写出实验目的及原理。 【实验操作】写出具体实验步骤和实验条件。

【实验结果】记录各采样时间点及采样的状态，按要求对数据进行处理，并将全班数据进行综合，求其平均值和标准差。

【讨论】阐述实验原理、实验收获与教训、建议等。 【思考题】回答实验思考题。

每一实验内容逐一按以上顺序书写实验报告。

实验一 片剂溶出度试验

一、实验目的

1. 掌握片剂溶出度测定方法及数据处理方法； 2. 了解溶出度测定的重要意义及其应用。

二、实验提示

片剂溶出度是指片剂主药在体外协助适当装置于适宜介质中溶出的速度和程度。

测定溶出度的依据是Noyes-Whitney的扩散理论，近年生物药剂学的研究表明，难溶性药物的片剂，崩解时限不能作为判断难溶性药物片剂吸收的指示，因为片剂崩解后的粉粒还不能直接被机体所吸收，溶解是吸收的主要过程，溶解度小于0.1～1mg／mL的药物，其体内吸收常受其溶出速度的影响。溶出速度除与药物的晶型、粒经大小有关外，还与制剂的生产工艺、辅料、储存条件等有关。所以为了控制这些片剂的质量，需测定血药浓度或尿药浓度，对于一些体外溶出度与体内血药浓度有相关性的药物，则可测定其主药成分的体外溶出度作为控制该片剂质量的一项指标。

本实验以对乙酰氨基酚片为样品，测定对乙酰氨基酚的溶出度。 原理：对乙酰氨基酚在溶出介质中，在257nm 波长处有最大吸收，因此可用紫外分光光度法进行测定，测定其在257nm的吸收度（A），用标准曲线方程计算其对应浓度。

三、实验内容

1. 测出比较法的A值， 用AW表示，作对照品。

取样品10片，精密称定，计算平均片重W，将称定的片子研细，再精密称取相当于W的量，加约600mL溶出介质（稀盐酸24mL加水至1000mL），水浴（40℃～50℃）中搅伴溶解，冷至室温，移入1000mL容量瓶中，加入介质至足量，摇匀，过滤，精密吸取滤液1mL置50mL容量瓶中，加入0.04％氢氧化钠溶液稀释至50mL，摇匀，照分光光度法（中国药典2005年版二部附录IVA），在257nm的波长处测定吸收度A值，用A-W表示。 2. 对乙酰氨基酚片溶出度的测定

A．仪器准备 转篮是用40目不锈钢制成的圆筒，高3.66cm，直径2.5cm，顶部通过金属棒连接于变速小马达上。转篮悬吊于盛有溶媒的容器中，距溶出杯底2.5cm，使用前安装就绪，开动电机空转，检查电路是否畅通，有无异常噪音，转篮的转动是否平稳，加热恒温装置及变速装置是否正常，如一切符合要求，就可以开始测定样品。

B. 测定方法 取溶出介质（稀盐酸24mL加水至1000mL）1000mL，加热至37℃，置溶出杯中，调节转篮转速为100转／分，将精密称定重量的药片一片（W）放在转篮内，以溶出介质接触药片时为零时刻开始计时，然后按2、5、10、15、20、30分钟定时取样，取样位置固定在转篮上端液面中间、距离杯壁1cm处，每次取样5mL，将样品液过滤，吸取滤液1mL，余按实验内容1，测出比较法A值项下，自“置50mL容量瓶……”始，依法测定规定时间药片溶出的 A值，以As 表示。 注：

（1） 对所用的溶出度测定仪，应预先检查其是否运转正常，并检查温度的控制，转速等是否精确、升降转篮是否灵活等。

（2） 溶出方法分转篮法、桨法和小杯法三种。本实验选用转篮法，转篮的尺寸和结构应符合药典规定。

（3）每次取出样品液后，应同时补充相同体积的空白溶液。

（4） 根据药典规定，应同时测定6片的溶出度，鉴于实验时间限制，每实验组仅要求完成1片的测试。

-

四、测定结果与数据处理

1. 每片测定结果记录

No.

取样时间（min）

As Aw 累计溶出5

1 2

2 5

3 10

4 15

5 20

6 30

Aw=

溶出度的计算

累计溶出%= ?????

2. 用普通坐标纸作图求t50

以累计溶出百分比对溶出时间逐一描点,用图估法拟合-平滑曲线,过累计溶出百分比50%处引一与t轴平行的直线,与溶出曲线相交于A,过A点向t轴引垂线交于t1，此t1即为t50，此值供方差分析用。

3. 用威布尔分布概率求t50，td和m三个参数

从上面所作溶出曲线所见，累计溶出百分比对相应时间各数据在一般直角坐标纸上作图，并不成直线关系，但可将累计溶出百分比与时间的关系看作统计学上的概率分布函数，用威布尔概率纸使之直线化，从图上即可极为方便的找到t50（溶解50％所需时间），td（溶解63.2％所需时间）及m（斜率）三个参数，在威布尔概率纸作图的基本步骤如下：

A. 以F(t)尺代替累计溶出百分比,t尺为释放时间,用原数据描点,若各点基本上呈直线分布，则可直接拟合一条直线，尤其注意照顾F(t)在30％至70％范围内的点，使之优先贴近该直线。

B. 若各点排布呈曲线状，则沿曲线趋势延伸，与t尺交点的数值作为α的初步估计值，以F(t)对t -α再作图，若所得各点的排列接近直线，则拟合成直线，若F(t)对t-α作图仍为一曲线，则可用类似的方法反复修改，直至作得一直线为止。

C. 在F(t)对t（或F(t)对t-α）所作图上拟合一直线，有X＝1和Y轴的交点（称m点）作该直线的平行线，该平行线和Y轴交点在Y尺上投影点的读数即为m值（取绝对值）。 D. 所拟合的直线与X轴的交点在t尺上投影点的读数即为η＝β／m的估计数，本实验中称为td值（溶出63.2％所需时间）；与溶出50％的交点在t尺上的投影点的读数即为t50。 E. 用威布尔概率纸求出t50，td和m三个参数后，可利用方差分析，相关与回归分析的数理统计法来评定同类产品不同批号或不同厂家的片剂质量；另外，还可以评定同一产品体内、体外的相关程度。 4. 用溶出参数作方差分析

将两个批号共八片，按本实验方法测得的累计溶出百分比共八组数据，经威布尔概率纸作图得八

参数 t50

方差来源

组间 组内 合计 组间 组内 合计 组间 组内 合计

自由度

离差平方和

方差

F值

显著性

td

m

条直线，由图中求出t50，td和m值，将所得参数列表如下，供方差分析用。

思考题：

检查固体制剂的溶出度有何意义？ 哪些种类的制剂需检查溶出度？

实验二 尿药法测定水杨酸钠片剂的生物利用度

一、实验目的

1. 通过实验掌握用尿药速率法求算体内药动学参数； 2. 通过实验掌握药物的生物利用度的一般研究方法； 3. 通过测定求出水杨酸钠的生物半衰期。

二、实验原理

药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄等过程既有区别，又有联系，具有一定相关性。药物在体内的速度过程变化规律及生物利用度等相关参数的提取，要通过实验采用血药浓度法、尿药浓度法或唾液药物浓度法等方法获得。

在多数情况下，尿药浓度高于血药浓度，定量分析精密度好，测定方法较易建立，且取样方便，可免除受试者多次抽血的痛苦。因此，在体内药物大部分以原型从尿中排出的条件下，通常可用尿药法提取消除速度常数、生物半衰期等动力学参数。

生物利用度反应药物在体内被吸收的速度和程度，它可分为相对生物利用度与绝对生物利用度。当药物的口服制剂与静脉注射剂相比较，可求算绝对生物利用度；与其他制剂相比较，可求算相对生物利用度。本实验采用口服真溶液剂为参比，测定水杨酸钠片剂的相对生物利用度。

三、实验方法

1. 绘制水杨酸钠标准曲线

精密称取干燥恒重的水杨酸钠0.5g，置100mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，各精密吸取此溶液1.5、2.5、3.5、4.5、5.5mL分别置50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为0.15、0.25、0.35、0.45、0.55mg/mL的标准溶液。

取干燥洁净的带塞玻璃试管5支，分别精密吸取以上各溶液的水杨酸钠标准溶液1mL于试管中，再分别加入Fe(NO3)3试管5mL，混合均匀，用72-100型分光光度计于540nm波长处测定吸收度，将测得数据进行回归分析，得吸收度对标准溶液浓度的回归方程，即为标准直线。参比液以蒸馏水1mL代替标准液。 2. 测定生物利用度

A. 实验方法

I. II.

a) b)

选择受试者的条件 对受试者的要求

服药前48小时开始,不吃任何含水杨酸盐类食物。

小便应按规定收集完全，不得损失，并保持尿样不污染。在收集尿样期间内不作剧烈运动。

c) 早晨收集空白尿，空腹时口服水杨酸钠片0.6g，对照组口服相当于0.6g的

水杨酸钠真溶液。

d) 按以下时间喝水和收集尿样，并记录排尿量： 服药当天：

7：30 喝水 150mL

7：55 小便（收空白尿）

8：00 用250mL温开水吞服0.3g／片的水杨酸钠片两片 8：30 收集尿样 9：00 收集尿样

10：00 收集尿样 喝水200mL 12：00 收集尿样 喝水150mL 14：00 收集尿样 喝水100mL 16：00收集尿样 喝水100mL

18：00收集尿样

20：00收集尿样 喝水100mL 22：00收集尿样

第二天

8：00收集尿样 22：00收集尿样

每次收集尿样的时间必须小便一次，在上一次收集尿样后所排出的小便，均要收集完全，作为下一个时间尿样，每次收尿容器必须洗净，用蒸馏水清洗，沥干备用。

III．受试者服用样品的安排

本实验仅作两种剂型，同一受试者二次服药之间应间隔4天以上。 IV．测定方法 每次尿样测量体积后，精密吸取1mL于干燥洁净的试管中，加Fe(NO3)3试管5mL，按“绘制标准曲线”项下进行测定，参比液用空白尿1mL替代含药尿样，如显色时发现色泽太深，则根据情况将尿样稀释后取样测定（如果气候炎热，须将空白尿及尿样置冰箱中保存，以防长霉发酵，影响结果的准确性。）

B. 数据处理 I. 将所测各时间尿样的吸收度代入标准直线，计算出该尿样浓度（mg/mL）再乘以尿量（如

尿样稀释则需乘上稀释倍数），计算出各时间的尿药排泄量。

II. 以lg△x/△t对相邻两时间的中点时间（t中）作尿药排泄速度曲线。 △x : 各时间的尿药排泄量.

△ t: 相邻两次集尿时间的间隔时间. 作图:

III. 根据作出的尿药排泄曲线求出水杨酸钠片剂和真溶液的动力学参数. 斜率(b)=(Y2-Y1)/( X2-X1)

或将曲线后部直线部分进行回归分析,求出直线斜率b 消除速度常数: k=-2.303×b

剂型 片剂 真溶液

消除速度常数k

半衰期(小时)

总排泄量(mg)

生物半衰期: t1/2=0.693/k

IV. 生物利用度：以真溶液为参比，求片剂的相对生物利用度 生物利用度（％）＝？？？？？？ V. 尿药法数据记录

姓名： 性别： 产品厂家及批号： 药量： 服药时间：

序号 3 6 9 10 集尿时间（小时） 1 6 12 14 口服水杨酸钠真溶液

尿量（ mL）

稀释倍数 吸收度 平均浓度排泄量尿量（mg/mL） （mg） （mL） 累计

稀释倍数 口服水杨酸钠片 吸收度 平均浓度（mg/mL） 累计

排泄量（mg）

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

集尿时间（h）

0 0.5 1 2 4 6 8 10 12 14 24 38

中点时间隔时间（t中） 间（△t）

0.25 0.75 1.5 3 5 7 9 11 13 19 31

0.5 0.5 1 2 2 2 2 2 2 10 14

真溶液

平均尿药速度（△X／△t）

片剂 平均尿药速度（△X／△t）

排泄量 (△X)

Lg(△X /△t)

排泄量 (△X)

Lg(△X /△t)

思考题：

血药浓度法与尿药法测定药物动力学参数各有何特点？

实验三 扑热息痛血管外给药的药物动力学研究

一、实验目的

1. 通过本实验，掌握生物样品分析方法的基本要求。 2. 掌握扑热息痛的血药浓度测定方法及有关参数的计算。

二、实验原理

扑热息痛与亚硝酸发生亲电取代反应，生成2-亚硝基－4－乙酰氨基苯酚，用氨基磺酸铵除去过量的亚硝酸，在碱性条件下，2-亚硝基－4－乙酰氨基苯酚于430nm波长处有最大吸收。

三、实验内容

1. 标准曲线

精密称取扑热息痛100mg，以95％乙醇3mL溶解加适量水，转移于100mL容量瓶中，加水至刻度，充分摇匀，得扑热息痛储备液（1mg/mL）,精密吸取储备液2.5mL准确稀释至10mL，得250μg/mL的标准液。

分别精密吸取250μg/mL的标准液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mL于离心管中，分别加水使成2mL，各加家兔血浆1.5mL，摇匀，再加入2mL10％三氯醋酸，充分混合再离心20分钟（3000rpm）。吸取上清液4mL于25mL带塞刻度试管中，加入1mL6N盐酸，1mL20％ NaNO2溶液，摇匀，放置5分钟，使反应完全。慢慢加入2mL15％氨基磺酸，振摇至无气泡产生，流水冷却，加入2.5mL20％ NaOH摇匀，用2cm比色杯于430nm波长处测定吸收度。用蒸馏水2mL代替标准液同法处理，作空白对照。

标准液（mL） 浓度（μg/mL） A（3次）

0.3 50 0.6 100 0.9 150 1.2 200 1.5 250 1.8 300 求出回归方程

标准曲线（回归方程） 2. 回收率试验

分别精密吸取250μg/mL的标准液0.3、0.9、1.8mL于离心管中各三份，分别加水使成2mL，各加家兔血浆1.5mL，摇匀，以下操作同标准曲线项下“加入2mL10％三氯醋酸，充分混合“起，依法操作，测定吸光度，代入回归方程求其浓度，并与加入时浓度相比求出回收率。

初始浓度 （μg/mL） 21.43 64.29 128.58

吸光度 测得浓度 （μg/mL）

回收率(%)

回收率 均值

RSD(%)

3. 精密度试验

精密吸取250μg/mL的标准液0.3、0.9、1.8mL于离心管中各6份，分别加水使成2mL，各加家兔血浆1.5mL，摇匀，以下操作同标准曲线项下“加入2mL10％三氯醋酸，充分混合“起，依法操作，测定吸光度，求其日内精密度。

初始浓度（μg/mL）

吸光度 吸光度均值

RSD(%)

21.43

64.29

128.58

4. 样品稳定性考察

将上述标准曲线项下的“0.9mL”样品处理好后于0.5h、1h、2h、3h、4h测定吸收度，考察处理后样品室温放置时的稳定性。

时间（h） 吸光度 均值 0

0.5

1

2

3

4

5. 样品测定

取家兔5只（雌兔不得怀孕），每只体重2.5 kg～3 kg，给药前先从耳静脉取血3mL留作对照。然后按200mg/kg的剂量，肌注给药（给药前禁食12小时）。给药后按第3、5、10、15、25、30、40、60、100、140、180分钟，定时从兔耳静脉取血3 mL，用干燥并带有适量肝素钠的离心管集血，轻轻摇匀，离心10分钟（3000rpm），吸取血浆于干燥试管中，置冰箱中保存备用。 取出无药血浆与各时刻的含药血浆，室温解冻后进行测定：

吸取1.5mL血浆，置刻度离心管中，加水2mL，混匀，以下操作同标准曲线项下“加入2mL10％三氯醋酸，充分混合“起，依法测定吸收度，代入标准曲线，计算出该时刻的血药浓度，以无药血浆按同法处理作对照。

6. 结果记录

兔子体重： 给药剂量： 测定记录：

编号 T(min) C(μg/mL)

1 3 C(μg/mL) 2 5 3 10 4 15 5 25 6 30 7 40 8 60 9 100 10 140 11 180 尾段直线相外推线浓度的对数（lgC外推） 外推线浓度（C外推） 残数浓度（μg/mL） C残＝C外推-C 残数浓度的对数lgC残

尾段直线相斜率＝ K＝ 残数斜率＝ ka＝

四、数据处理

1. 以血药浓度（μg/mL）为纵坐标，时间为横坐标，作吸收曲线图（血药浓度－时间曲线）。 2. 以血药浓度（μg/mL）的对数对时间作血药浓度－时间的半对数图，从图中求出消除速度常数K，再用残数法求出吸收速度常数ka。

3. 提取参数（t1/2吸收、t1/2消除、tp、Cp） A. 吸收半衰期:

t1/2吸收=0.693/ka B. 消除半衰期:

t1/2消除=0.693/K C. 血药浓度-时间曲线下的总面积(AUC0-∞) D. 达峰时间(tp)

⑴ 根据ka及K求出达峰时间tp

tp= (lnka-lnK )/(ka-K)=2.303×(lgka-lgK)/(ka-K)

⑵ 抛物线拟合法

用抛物线C=p+Qt_+Rt2的峰段代替药时曲线的峰段，选取实验数据中最大浓度C（I）左右三点，[ti-1, C(I-1)], [ti, Ci], [ti+1, C(I+1)]代入，则有：

C(I-1)=P+Q·ti-1=R·t2i-1 Ci= P+Q·ti=R·t2i

C(I+1)= P+Q·ti+1=R·t2i+1

解上述方程组，求得P、Q、R的值

抛物线的峰丢按横坐标（峰时）为tp=-Q/2R E. 峰浓度Cp Cp=A(e-Ktp- e-Katp)

A-截距(可以从lgC~t图中求得) 实验结果:

思考题：

血药浓度法求算药物动力学参数的原理？ 血药浓度法测定药物动力学参数的要求？

实验四 大鼠在体小肠吸收实验

一、实验目的

1. 掌握大鼠在体小肠吸收的实验方法。

2. 掌握计算药物的吸收速度常数（Ka），以及每小时吸收率的计算方法。

二、实验原理

大多数药物以被动扩散方式从生物膜的高浓度侧通过膜向低浓度侧转运。被动扩散可用Fick第一定律来描述。该定律指出，扩散速度（dC/dt）正比于膜两侧的浓度差（△C）,因此有：

−

式中C是消化道中的药物浓度，Cb是血液中药物浓度，Ka是吸收速度常数，其值大小取决于药物的扩散常数、吸收膜的厚度与面积以及药物对膜的穿透性。胃肠道吸收的生物学过程包括这样一个系统，即药物从胃肠道屏障的一侧向另一侧扩散。因为进入血液的药物很快分布到全身，故与吸收部位比较，血中药物浓度维持在很低的水平。几乎在所有口服给药的情况下，对于胃肠道来说，血液的作用犹如“水槽”。并且在整个吸收相保持很大的浓度梯度，C>>Cb，则△C≈C，于是（1）式可以简化为：

dc

=Ka∆C=Ka(C−Cb) （1） dt

−

dc

=KaC （2） dt

Xa

=KaX (3) dt

此为一级速度方程式的标准形式。胃肠道按一级动力学从消化液中吸收大多数药物。用消化液中药物量的变化）dXa/dt)表示吸收速度，则：

−

将（3）式积分，并在方程两侧同取对数。

lnXa=lnXa(0)−Kat （4）

式中Xa为消化液中药物量，Xa(0)为零时刻消化液中药物量，Ka为药物吸收速度常数。以lnXa对t作图得一条直线，其斜率为药物在小肠中的吸收速度常数（Ka）。

三、实验内容

1. 实验操作

（1） 取85ml供试液（100ml Krobs-Ringer试液含SD2mg, 酚红2mg）加入循环装置中。

（2） 将实验前禁食一夜，体重200g左右的雄性大鼠，称重，腹腔注射戊巴比妥钠（剂量为100g

体重注射0.4ml），麻醉后并加以固定。

（3） 沿腹中线打开腹腔。自十二指肠上部及回肠下部各剪开一个小口，各插入直径为0.5cm的玻

璃管，用线扎紧，并用37℃的生理盐水将小肠内容物冲洗干净，然后将大鼠串联到循环装置中。

（4） 开动蠕动泵，以5ml/分的流速循环10分钟后流速调至2.5ml/分。

（5） 自烧瓶中取样1.5ml（1ml、0.5ml各一份）为 和酚红零时间样品，并补加2ml酚红溶液（每

毫升Krobs-Ringer试液含酚红20μg），其后每15分钟取样（1ml、0.5ml各一份），同时补加酚红溶液2ml。由于酚红不被小肠吸收，用以测定水被小肠吸收的量。 2. 定量方法

（1）磺胺嘧啶的定量

取样品1ml，加入1mol/L 5ml, 加入0.1%NaNO2 1ml, 摇匀，放置3分钟，加入0.5％氨基磺酸氨1ml，摇匀，放置3分钟。加入0.1％萘乙二胺2ml，摇匀，放置20分钟。在波长555nm处测定吸收度。

参比溶液的配制：取1ml供试液按磺胺嘧啶的定量方法不加萘乙二胺显色剂。

（2） 酚红定量

取酚红溶液0.5ml，加入0.2mol/L NaOH 5ml，摇匀，在波长555nm处测定吸收度。 参比溶液：0.2mol/L NaOH溶液。 3． 标准曲线的制备 （1）酚红的标准曲线

精密称取酚红100mg，置1000ml容量瓶内，加1％Na2CO3溶液溶解并稀释至刻度，制成100μg/ml的储备液。取1，2，3，4，5，6ml的储备液于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。自上述各溶液中吸取0.5ml，按酚红的定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。

（2）磺胺嘧啶标准曲线

精密称取磺胺嘧啶标准品10mg置100ml容量瓶中，以蒸馏水溶解并稀释至刻度，使成100μg/ml的储备液。取储备液适量，稀释成20100μg/ml的溶液，分别吸取2，4，6，8，10ml于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。从上述溶液中吸取1ml按磺胺嘧啶定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。

四、数据处理

1． 将实验数据按表1中公式进行计算。

表1 大鼠在体小肠吸收量的计算式

取样时间（h） 循环前 0

SD 吸收度 A0 A1

SD 浓度 C0 C1

酚红 吸收度 A’0 A’1

酚红 浓度 C’0 C’1

供试液体积 V0=85ml

剩余药量 P0=85×C0

0.25 A2 C2

A’2 C’2

C0'V0

V1=

C1'

P1=C1V1

Pn=CnVn+1.5∑Ci

i=1n−1

0.5 A3 C3 A3

’

C3

’

(V1−1.5)C1'+40 V2='

C2(V2−1.5)C2'+40

V3='

C3

….

P3=C3V3+1.5(C1+C2)

…

… tn

… An

….. Cn

…. A’n

… C’n

n−1

(Vn1−1.5)Cn1'+40

Pn=CnVn+1.5∑Ci Vn='

Cni=1

2. 以剩余药量的对数对时间作图，求出吸收速度常数Ka和每小时吸收率（％）。

每小时吸收率（％）＝（零时间剩余药量－60分钟剩余药量）/零时间剩余药量×100％

思考题：

用小肠剩余药量测定吸收速率常数的原理？

实验五 氨茶碱药物动力学的研究

一、实验目的

1. 掌握紫外分光光度法测定氨茶碱的血药浓度，求算有关药动学参数

二、实验原理

由于氨茶碱有效血药浓度范围较窄，一般为10～20μg/ml，故有必要进行临床监测。在酸性条件下，血清中的茶碱可用有机溶媒萃取出，并同时沉淀血清蛋白，再用碱夜把茶碱自有机溶媒中萃取出，然后进行紫外测定，采用双波长测定法，分别测定在波长274nm和298nm处的吸收度。

三、实验内容

1. 氨茶碱标准曲线的绘制：

取氨茶碱标准品，精密称量以0.1mol/L NaOH溶液配成500mg/L的贮备液。另取试管5只，各加入0.5ml空白血清，然后依次加入上述贮备液4.0μl、8.0μl、12μl、、16μl、20μl，各加入0.1mol/L NaOH溶液至4.0ml，其浓度分别为0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml的标准液。按血药浓度测定法处理，用紫外分光光度计在波长274nm及波长298nm处测定吸收度（0.1mol/L NaOH溶液作参比）。 2. 血药浓度的测定：

取血清样品0.5ml置试管中，加0.1mol/L盐酸溶液0.2ml，5％异丙醇－氯仿液5ml，振摇混合，离心（2500r/min）10min。吸取氯仿液（上层）4.0ml置于另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4.0ml，混匀，离心10min，吸取碱液（上层）3～3.5ml，用紫外分光光度计，测定碱液在波长274nm和波长298nm处的吸收度。 3. 药动学实验设计：

选用雄性家兔称重，按10mg/kg剂量给药，以5％葡萄糖溶液稀释氨茶碱注射剂10倍，由耳静脉给药（2min内注完）。然后分别于0.25h、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h取血约2ml（另一耳静脉取血）。分离血清（试管不涂肝素，静置，离心2000rpm），备用。依法测定血药浓度。

四、实验结果

1. 绘制标注曲线

根据测定的吸收度计算△A，即△A＝A274-A298。列表，求出标准曲线回归方程。

表1 氨茶碱标准曲线数据

试管号 C(μg/ml) A274 A298 △A 回归方程

1

2

3

4

5

2. 将测定的血药浓度测定数据填于表2，根据标准曲线计算样品的血药浓度。

表2 血清样品中氨茶碱浓度

T(h) A274 A298 △A C(

μ

0.25

0.5

1.0

1.5

2

3

4

6

8

g/ml)

3. 将表2中数据以半对数作图，得到血药浓度－时间图。按二室模型处理方法，求出α、β、

A、B等参数。

思考题：

做好本次实验的关键是什么？在操作中应注意哪些问题？

新药研制与开发实验讲义

中药药剂学教研室编写

2006年1月

目 录

概述·························································································································· 2 实验一 益母草颗粒的制剂工艺研究······································································ 4 实验二 益母草颗粒的质量标准的研究·································································· 7 实验三 益母草颗粒稳定性试验研究···································································· 13

益母草颗粒开发的实验研究

概 述

中药新药的开发对于加速我国中药的现代化进程具有十分重要的意义，中药新药的系统研究法主要包括：选题、设计处方、选择剂型及制备工艺、建立质量标准、药品稳定性试验、临床前药效学和毒理学研究、临床研究。

新药研究与开发是指从新药选题，实验室研究，获得临床研究批件，进行临床试验，获得新药证书生产批件等职呢研究过程。通过本课程的讲授、实验教学，使学生掌握新药含义；药品注册申请的分类及申报资料要求，中药新药的药学研究内容和实验方案的设计，药品注册申请资料的撰写。熟悉新药研究课题的选择，临床前药效学研究，药理学研究；了解新药的临床研究和新药临床试验的基本要求，以及各期临床试验的目的。

新药研制与开发课程共50学时，理论讲授10学时，实验设计与实验研究40学时。 本实验是参照药典中成药制剂益母草口服液的质量标准，按照中药新药第8类新药注册申报要求，进行益母草颗粒设计研究和撰写申报资料。要求学生查阅相关文献，包括益母草颗粒的立题依据、制备工艺、质量控制等相关资料。自行设计制剂工艺流程质量控制方法，并按照方案独立进行实验操作，制备制剂样品。并对所制的样品进行质量控制研究和稳定性试验研究，起草该品种的质量标准草案，根据实验研究资料最终写出新药注册申报资料。其间将所学中药药剂学、中药化学、中药药理学与分析化学等理论知识，以及中药新药申报资料知识紧密联系。训练和提高学生创新能力和实验操作能力。运用专业知识，分析问题和解决问题，使学生的全面专业素质有较大的提升。为今后的实际工作打下良好的基础。

实验一 益母草颗粒的制剂工艺研究

一、实验目的

1．掌握益母草颗粒的制剂工艺设计与研究实验方法。

2．熟悉中药新药申报资料中生产工艺的研究资料及文献资料的撰写。

二、实验提示

选定课题研究为已有国家标准的益母草膏及益母草口服液的剂型改变为颗粒剂，属于中药、天然药物注册分类第8类改变国内已上市销售中药、天然药物剂型的制剂。要求按国家食品药品监督管理局中药、天然药物注册分类及申报资料要求，完成申报资料12（生产工艺的研究资料及文献资料，辅料来源及质量标准）的有关研究内容和申请资料。

三、实验内容

（一）益母草颗粒制剂工艺的研究 1．药材的提取工艺研究

（1）药材的前处理与质量控制 原药材必须经过鉴定，检验符合有关规定。前处理包括净制、切制、炮制、粉碎等加工处理。凡需特殊加工处理的药材，应说明目的与方法依据。

（2）提取工艺路线的设计

设计原则主要包括： 保留药效、缩小体积、减少毒性；单味药提取 、复方混合提取、分类提取；提取混合物或精制到“纯品”；根据方药的性质、剂型、给药途径、功能主治、化学成分和药效资料，结合临床要求统筹考虑。

（3）提取工艺技术条件

提取工艺技术条件的筛选主要采用正交试验、均匀设计、简单比较等方法。提取工艺技术条件主要有：溶剂、温度、设备、溶剂量、时间。 2．分离、纯化、浓缩与干燥工艺研究 （1）分离与纯化工艺研究

根据粗提取物的性质和新药类别、剂型、给药途径、处方量及与质量有关的提取成分的理化性质选择相应的分离方法与条件，除去无效和有害组分，保留有效成分或有效部位，为新药和剂型提供合格的原料或半成品。

（2）浓缩与干燥工艺研究

根据物料的性质及影响浓缩、干燥效果的因素优选方法与条件，达到一定的相对密度或

含水量。以浓缩、干操物的收率及指标成分含量，评价其工艺过程的合理性与可行性。建立半成品控制标准。

（3）制剂成型工艺研究

制剂成型工艺研究是按照制剂处方研究的内容，将经提取、纯化后所得半成品或部分生药粉与辅料进行加工处理，按照合适的评价指标进行筛选，并优选、确定适当的辅料、制剂技术和设备，制成一定的剂型并形成最终产品的过程。制剂成型工艺研究是处方设计的具体实施过程，并通过研究进一步改进和完善处方设计，选定制剂处方、制剂技术和设备。

3．样品的制备

确定制剂工艺后制备样品，验证制备工艺的可行性。所制样品用于质量研究和稳定性试验。

根据样品试制的情况确定药品质量标准草案中的制剂工艺。

（二）撰写生产工艺的研究资料及文献资料

按申报资料项目要求写出生产工艺的研究资料及文献资料，提纲如下：

一、处方和制法

二、工艺流程图

三、工艺研究

（一）剂型选择

（二）工艺研究

1、处方药物性质； 2、药材的鉴定和处理； 3、工艺路线的确定（初步）；

（三）前处理工艺条件筛选（1）前处理；（2）提取；（3）分离； （4）浓缩。（5）中间体内控标准。

（四）制剂成型工艺研究

稠膏密度；辅料种类与用量；润湿剂种类与用量；颗粒干燥等。

（五）样品的制备

四、扩大中试（略）

五、辅料质量标准与来源

六、参考文献

七、辅料质量标准复印件

实验二 益母草颗粒的质量标准的研究

一、实验目的

1．掌握益母草颗粒的质量标准研究方法。

2．熟悉中药新药质量研究工作的试验资料及文献资料撰写。

二、实验提示

药品质量标准是国家对药品质量及检验方法所做的技术规定，是药品生产、经营、使用、检验和监督管理部门共同遵循的法定依据，也是新药研究中的重要组成部分。

不仅要体现“有效安全、技术先进、经济合理”的原则，而且对于指导生产，提高质量，保证用药有效安全，促进对外贸易等方面均具有非常重要的意义。

药制剂质量标准必须在处方（药味、用量）固定和原料（净药材、饮片、提取物）质量稳定，制备工艺相对固定的前提下，用“中试”产品（不少于3批，）研究制订。须在大生产条件下制备10批样品，加以验证和修改。

在药理试验完成之后，药品送临床试验之前，必须完成药品质量规格的研究。临床研究的药品先要通过质量规格的检验，保证多批产品质量相同，否则很难判定实验中出现的差异和变化是来自药品本身的不一致或不稳定。

质量标准的内容一般包括：名称、汉语拼音、处方、制法、性状、鉴别、检查、浸出物测定、含量测定、功能与主治、用法与用量、注意、规格、贮藏、使用期限等项目。

三、实验内容

（一）益母草颗粒的质量研究

1．性状 色泽、形态、嗅味等。通常应该是中试产品。

2．鉴别 根据处方组成的实际情况，选择鉴别药味和专属、灵敏、快速、简便的鉴别方法，以判断制剂的真实性。

(1)鉴别药味的选择

原则上各药味均进行试验研究，选择列入标准中。首选君药、贵重药、毒性药。如鉴别特征不明显，或用量较小而不能检出，或难以排除干扰成分，也可选其他药，应在起草说明中写明理由。如为单味药制剂，成分无文献报道的，应进行植化研究，搞清大类成分及至少一个单体成分，借以建立鉴别及含量测定项目。

(2)鉴别方法

显微鉴别、理化鉴别、光谱鉴别、色谱鉴别等，要求专属性强、灵敏度高、重现性较好。叙述应准确，术语、计量单位应规范。色谱法鉴别应选定适宜的对照品或对照药材做实验。

中药制剂多为复方，鉴别常受干扰，须核对验证，选用专属性强、重现性好，较简单的方法：

显微鉴别，含有原生药粉的制剂，处方中药味逐一分析比较，排除类似细胞组织和内含物的干扰，特征必须明显，易察见。

理化鉴别，对某些显微特征不明显、易混淆或不具备显微特征的提取物，应以理化方法进行鉴别，如荧光法，显色法、沉淀法、升华法、结晶法等。

理化鉴别均应做空白试验（即阴性对照）。

对泡沫反应、生物碱试剂沉淀反应、三氯化铁试液显色反应等，必须注意假阳性结果。 确无干扰，方可列人正文鉴别项下。

中药制剂中某一味药的鉴别特征和方法，尽可能和药材相一致，但有些中药制剂中由于其他味药干扰，难以统一者，也可采用其他方法。

色谱鉴别 包括薄层色谱、气相色谱和液相色谱鉴别。薄层色谱鉴别法目前普遍使用，它具有分离和鉴定双重作用，只要一些特征斑点（不一定是已知成分）具有再现性，就可作为确认依据。此法可以鉴别药材的真伪、区别异构体、区别同一药材的不同药用部位、控制微量成分的限量（如毒性药材），并对某些不同检测要求（如鉴别、检查）项一次完成。

薄层色谱鉴别应采用适宜的化学方法提取纯化供试品，除去干扰杂质，提高被检成分浓度，方可得到清晰的色谱图。薄层色谱鉴别时必须在同一薄层板上设缺检测药材的阴性对照和阳性对照，阳性对照可用对照品或对照药材或两者同时对照。薄层色谱法应以彩色照片记录其真实性，定量试验也可用扫描图（从原点至前沿）记录。

气相色谱（GC）又称气相层析，适用于含挥发性成分的鉴别，也可结合含量测定进行。 液相色谱即高效液相层析（HPLC)，很少单独用于鉴别试验，多结合含量测定进行。紫外或红外光谱用于鉴别较少，但应注意复方制剂多味药、多组分吸收峰叠加或抵消等问题。

3．检查 控制药材或制剂中可能引入的杂质或与药品质量有关的项目。不同剂型要求检查的项目不同。

颗粒剂要求测定水分溶化性等。各种制剂均应作微生物限度检查。药典附录通则以外的检查项目应说明所列检查项目的制订理由，列出实验数据及确定各检查限度的依据。

4、浸出物测定 若复方中已知成分不能代表方剂的功能主治，或有效成分含量太低，有时采用浸出物测定法。

常用溶剂为：正丁醇、乙醚等。说明规定该项目的理由，所采用溶剂和方法的依据，列出实验数据，各种浸出条件对浸出物的影响，确定浸出物量限（幅）度的依据和试验数据。

5、含量测定 含量测定是质量控制中最能有效地考察制剂内在质量的项目，也是药品稳定性考察最重要的依据。

方案设计参照 “技术要求”及现国家标准中有关质量标准要求的条件。紧密地结合处方组成、制备工艺型。创新和提高，含量测定在质量标准项目中最为重要。中药新制剂处方药物成杂，难以用其中某个化学成分或某个有效成分来完全阐述清楚，疗效的发挥是要归结到其物质基础。含量测定则是应用现代理化分析手段中药新制剂中的物质基础，并得到的量化结果。因此正确合理的含量测定设案，是提高中药新制剂质量标准可靠性的关键。

（1）设计方案

中药新制剂总成分的测定，是建立在各组分含有相同的大类成分基础上的，因此含量测定须测各组分（各药味）中的含量，这亦是方法学的研究内容之一。

含量测定时，含量限度偏低，可暂将浸出物测定作为质量控制项目，但必须具有针对性和控制质量的意义。如含挥发性成分或脂溶性成分的可做醚浸出物测定，含各种苷类成分药味较多，可测正丁醇浸出物。

首先择其君药〔主药）、贵重药、毒性药制订含量测定项目，如含毒性药量微者也要规定限度试验，列入检查项中。如君药、贵重药、毒性药同时存在，则要求两项测定；对出口中成药，多要求建立二项以上的含量测定；对于中药注射剂，大部分成分或组分均要清楚，研究建立多项含量测定。我国从2000年起，要求对中药注射剂进行指纹图谱的研究。

如果含量限度低于万分之一者，应增加另一个含量测定指标或浸出物测定。

成品中规定有含量测定项的，其原料药材必须对成品中所测成分规定含量限度。 如某一成分为处方中几种药材所含有，可控制该成分含量，但应同时分别控制各有关药材原料中该成分的含量。

（2）含量测定方法

含量测定方法要有方法学的考察试验。必须做阴性对照和回收试验考察。

常用的有经典分析法（容量法，重量法）、分光光度法、薄层分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法、薄层扫描法、其他理化测定方法等。由于中药复方制剂药味多，成分干扰大，经典的分析法及分光光度法受影响的因素多，重现性、适用性差。色谱法，适应范围广，分离效能高，重现性及精密度好，是目前含量测定最主要的方法之一。

（3）含量测定中应注意的问题

样品的含量测定必须要有方法学研究，虽然《中国药典》中有单味药材的测定方法，但在复方中药物组成发生了变化，即使是同一种仪器进行测定，也需要有方法学研究。测定的方法学研究的样品必须是用同一批中试样品进行，所得研究数据方可靠。

①提取条件的选定：条件和溶剂选用，应根据所测成分性质和排除该制剂中非含量测定成分（杂质）的干扰为目的。直接取样品进行测定的方法极少，液体样品多采用萃取法等。

固体样品的提取条件对测定结果有直接影响，常见的提取方法有浸渍、回流、索氏提取、超声提取等，滤除残渣后即得提取液。对提取液有取全量和取一定量两种方法，进行含量测定后，对结果按相当的样品量计算，即得。一般通过考察不同溶剂、不同提取方式、不同时间以及不同温度、pH值等确定提取条件。

参考文献，重点对比某种条件，也可用正交试验、均匀设计等进行全面优选条件，再配合回收率试验或与经典方法比较，从而估计方法的可靠性。

样品还要进行分离和纯化：样品前处理。对于色谱法，可提高分析准确性并可保护色谱柱。对于分光光度法，除对仪器的准确度要求很高而需经常校正外，供试液的纯度也必须可靠。

②测定条件的选择

分光光度法，最大吸收波长处测定。灵敏度大，误差小。薄层扫描法定量方法可分外标法和内标法。由于内标物与被测物测定是在同一通道上，因此要求内标物的吸收波长接近被测物质的吸收波长，并与被测物质的斑点要完全分开。因而，选择内标物比较困难。

外标法常用，同一薄层板上点上标准品溶液，标准曲线是通过原点的直线时，选用一种浓度的标准品称一点法；标准曲线不通过原点时，选用两种浓度的标准品称两点法。

含量测定方法研究必须要有测定条件下，阴性样品溶液干扰情况的研究。分光光度法要求阴性样品液与样品供试品溶液的吸收度比值小于5%；薄层色谱法、气相色谱法和高效液相法色谱要求样品供试品溶液在与对照品液相同位置有相同的斑点或相同保留时间的色谱峰，而阴性则无。

③线性关系的考察：制备标准曲线的回归方程，分光光度法的相关系数r≥ 0. 999，薄层扫描定量法r≥0.995，这是一般要求。

分光光度法的供试品溶液含量可通过标准曲线中查出，而标准曲线可以制备后长期采用。线性关系的考察十分重要。 样品供试液的浓度必须在标准曲线的线性范围内，超出范围数据就会产生误差。故也可采用对照品比较法：cX/cR=AX/AR。对照品中所含被测成分的量应为供试品中被测成分规定量的100％±10％，溶剂一致。

对照品必须用化学纯品（合成品含量99％以上；提取品98％以上；个别97％以上）。 在寻找化学纯品确有困难时，含量可在90％～97％范围内（乘以相应系数），低于90％不能用于含量测定，可采用纯化、精制的手段，提高对照品的含量。

例如：在部颁新药转正标准第十一册中熊胆粉项下的含量测定中，采用高效液相色谱法以牛磺熊去氧胆酸钠为对照品。中国药品生物制品检定所提供的供含量测定用的对照品（暂行）纯度约为90％。

④精密度试验：用相同方法对同一样品供试品溶液进行多次测定，考察各测定值彼此接近的程度。

分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法是对同一供试液多次进行测定；薄层扫描法是对同一薄层板以及异板多个同量斑点扫描测定。考察其精密度，对同一薄层斑点连续进行多次测定，虽也可考察仪器精密度，但不是新药质量标准要求规范中的精密度试验范畴。

精密度试验的次数要求不得少于5次，并对5次试验所得数据进行统计学处理，计算其平均值和相对标准偏差（RSD% ) 。分光光度法、气相色谱法和液相色谱法相对标准偏差(RSD %) 一般不得大于3%；薄层扫描法相对标准偏差（RSD %) 一般不得大于5%.

⑤重现性试验：是指在同一条件下对同一批样品，从样品供试品液制备始，制备多份供试品溶液。每份供试品液再分别进行测定，测定所得到的数据进行统计学处理，计算其含量的平均值和相对标准偏差（RSD％）。

⑥稳定性试验：考察不同时间用同一测定方法所得到的测定结果，分光光度法考察吸收度A值；薄层扫描法考察色谱斑点的吸收值（峰面积值），气相、高效液相色谱法考察峰面积值。统计学处理，计算其平均值和相对标准偏差（RSD％）。 根据试验结果，选定最佳测定时间范围。通常延续3～4小时。要求在一个工作日内（即8小时内）完成。

注意：必须只能采用被测样品的供试液来进行稳定性试验，而不能单用对照品溶液来考察稳定性。

⑦回收试验：至少5次（n=5)或3组平行试验

对照品（纯品）加入量与加入样品量（已知量）从供试液（前处理）制备，至含量测定所得到的值。方法按供试品溶液制备项下的取样量一半的样品，称取对照品（量取对照品溶液）加入取样作为加样回收样品，进行3组平行试验，每组两份，共六个样。

对照品加入量，一组与样品中含量接近；另两组分别为样品含量的80％和120％左右。应在线性范围内,依法法分别制备加样回收试验的供试品液进行分析。

加样回收率=

测得量－样品中含量×100％对照品量

要求：通常回收率在95％～105%；前处理方法较为复杂时，回收率可放宽到90％～110%

⑧样品测定

生产用药品的含量限（幅）度指标，应根据实测数据（至少有10批样品、20个数据）制定。制定含量限度通常与工艺有相关性，一般控制在30％以内的损失（即提取转移率达70％左右）。在工艺合理，原料稳定时，成品含量应稳定在这一范围内。不符合这一范围，应考虑是否工艺或含量测定方法有问题。

⑨样品供试溶液的制备

中药复方制剂中含量测定采用灵敏度高的现代分析仪器设备，测试样品的用量减少。 为了提高样品测定的准确度和代表性，一般要用检查装量差异项下的样品作为测定用的样品，再在此基础上，均匀分取所需量的供试品来制备样品供试溶液。

⑩含量限度的表示法

含量表示方法有％、mg／片、mg／丸、mg/ml等。

含量限（幅）度规定方式有2种：规定下限值，如，甘草流浸膏含甘草酸C42H62O16）不得少于7.0%（规定低限）；规定标示量的幅度，如，北豆根片含生物碱以蝙蝠葛碱（C38H44N2O6）计，应为标示量的90.0%～110.0%。

毒性成分的含量必须规定幅度，如九分散项下规定，按干燥品计算，每包（(2.5g）含马钱子以士的宁（C21H22N2O2）计，应为5mg ± 10%，即为4.5～5.5mg。

（二）撰写质量研究工作的试验资料及文献资料

按申报资料项目要求，根据上述研究结果写出益母草颗粒质量研究工作的试验资料及文献资料，参考提纲如下：

一、试验材料与仪器

二、试验方法与依据

1、性状 按实际性状描述。

2、鉴别

3、检查

（1）粒度、水分、溶化性 。

（2）装量差异

（3）微生物限度检查

4、含量测定

（1）仪器与试药；（2）对照品溶液的制备；（3）样品处理提取方法；（4）分析测试条件；吸收光谱 、空白干扰等；（5）线性关系及标准曲线；（6）精密度试验、稳定性试验；

（7）重现性试验；（8）加样回收率试验；（9）加样回收率试验 ；（10）三批样品含量测定；

（11）含量限度的制定。

实验三 益母草颗粒稳定性试验研究

一、实验目的

1．掌握益母草颗粒的稳定性实验研究方法。

2．熟悉中药新药稳定性研究的试验资料及文献资料撰写。

二、实验提示

药品稳定性研究是新药研究中不可缺少的重要环节，是新药质量的重要评价指标之一，也是核定新药有效期的主要依据。申请临床试验时需报送稳定性“加速试验”资料及文献资料。在申请生产时需报送。稳定性 “长期试验”资料及文献资料。试验内容见中药新药稳定性试验要求。

三、实验内容

（一）益母草颗粒稳定性加速试验的研究

可于37 ℃～40℃和相对湿度75％，加速试验当月（0月）考察1次，在1个月、2个月、3个月、6个月末各取样考察1次，应有0月、1月、2月、3月、6月等5个贮存时间的实验结果与结论。如稳定，可以进入临床研究，有效期可暂定为2年。

（二）益母草颗粒长期稳定性试验

供试品三批，在上市包装条件下，温度25±2℃、相对湿度60%±10％的条件下保存。 第0个月、第3个月、第6个月、第9个月、第12个月、第18个月、第24个月末分别取样一次，按稳定性考察项目的检测方法进行检测。如所规定的考核时间为1年或1.5年，可相应减少最后1～2次实验），然后根据考察结果作出结论。申报生产时，应继续稳定性考察，标准转正时，据此确定有效期。

（三）益母草颗粒稳定性研究的试验资料及文献资料撰写

按申报资料项目要求，根据上述研究结果写出益母草颗粒稳定性研究的试验资料及文献资料，参考提纲如下：

一、供试品样品和对照品来源，批号包装：铝塑袋包装。

二、稳定性考察项目及方法

稳定性考察项目：性状、鉴别、水分、粒度检查、含量测定、微生物限度。 测定方法：依据药典、质量标准草案。

三、试验仪器试剂

四、试验内容

1、制剂稳定性加速试验研究：方法、结果。

2、制剂稳定性室温长期试验研究：方法、结果。 列表表示

五、初步试验结论

六、参考文献

附录一

益母草颗粒按新药注册

申报资料项目内容的研究与资料撰写提纲

一、综述资料

1、药品名称包括： ①中文名； ②汉语拼音名； ③命名依据。

2、证明性文件。（略）

3、立题目的与依据：

古、现代文献资料综述。处方来源和选题依据，处方优势，剂型优势。

研究现状或生产、使用情况的综述，成分、药理、制剂、治疗作用，流行病、市场调研数据。

创新性、可行性等的分析，包括和已有国家标准的同类品种的比较。

4 、对研究结果的总结及评价：主要研究结果进行的总结，及从安全性、有效性、

质量可控性进行的综合评价。如：

一、概述

二、主要研究结果总结 （一）生产工艺研究 1、处方和制法 2、剂型的选择 3、前处理工艺 4、制剂成型工艺

（二）质量标准的研究 （三）稳定性研究

（四）包装容器的选择的研究 三、主要研究结果的评价 （一）安全性、有效性评价 （二）质量可控性评价

（三）稳定性评价 参考文献

5 、药品说明书样稿、起草说明及最新参考文献 包括起草的药品说明书样稿 说明书各项内容的起草说明

有关安全性和有效性等方面的最新文献。

一、说明书样稿

xxx说明书

【药品名称】中文名、汉语拼音 【主要成分】 【性状】 【药理作用】 【功能主治】 【用法用量】 【不良反应】 【禁忌】 【注意事项】 【贮藏】密封保存。 【包装】铝塑泡罩。 【有效期】

【批准文号】 国药准字＋1位字母＋8位数字

1位字母：化学药品H；中药Z；生物制品S；保健药品B；体外化学诊断试剂T；药用辅料F；进口分装J。

8位数字：1，2位来源代码；3，4位公元年号后2位；5至8位为顺序号。 【生产企业】企业名称：地 址： 邮政编码： 电话号码： 传真号码： 网 址：

二、起草说明 上述各项逐一说明 三、参考文献 顺序列出

6、包装、标签设计样稿。（略）

二、药学研究资料 7、药学研究资料综述

制剂处方及工艺的研究资料及文献资料

（1）前处理；（2）提取；（3）分离；（4）成型；（5）中试。 质量研究工作的试验资料及文献资料 （1）鉴别； （2）检查 ；（3）含量测定

药物稳定性的研究试验（1）方法；（2）结果；（3）初步结论。8、药材来源及鉴定依据

12、生产工艺的研究资料及文献资料，辅料来源及质量标准。 一、处方和制法 二、工艺流程图 三、工艺研究 （一）剂型选择 （二）工艺研究 1、处方药物性质； 2、药材的鉴定和处理； 3、工艺路线的确定（初步）。

（三）前处理工艺条件筛选（1）前处理；（2）提取；（3）分离；间体内控标准。

（四）制剂成型工艺研究

稠膏密度；辅料种类与用量；润湿剂种类与用量；颗粒干燥等。（五）样品的制备

初步确定工艺后的验证试验。 四、扩大中试

验证工艺，列表表达投料量，得率 五、辅料质量标准与来源 六、参考文献

七、辅料质量标准复印件

14、质量研究工作的试验资料及文献资料。 一、试验材料与仪器

4）浓缩。（5）中

（

二、试验方法与依据 1、性状 按实际性状描述。 2、鉴别 3、检查

（1）粒度、水分、溶化性 。 （2）装量差异 （3）微生物限度检查 4、含量测定

（1）仪器与试药；（2）对照品溶液的制备；（3）样品处理提取方法；（4）分析测试条件；吸收光谱 、空白干扰等；（5）线性关系及标准曲线；（6）精密度试验、稳定性试验；（7）重现性试验；（8）加样回收率试验；（9）加样回收率试验 ；（10）三批样品含量测定；（11）含量限度的制定。

15、药品标准草案及起草说明，并提供药品标准物质 及有关资料。 一、药品标准草案

1、名称；2、处方；3.制法；4、性状；5、鉴别；6、检查： 6.1粒度、水分、溶化性；6.2装量差异；6.3微生物限度检查；7、含量测定：对照品溶液的制备、标准曲线的制备、测定法（含量限度）；8、功能与主治；9、用法与用量；10、规格；11、贮藏；12、有效期

二、起草说明；

三、药品标准物质的有关资料； 四、参考文献； 五、附件

16、样品检验报告书。

17、药物稳定性研究的试验资料及文献资料。

一、供试品样品和对照品来源，批号包装：铝塑袋包装。 二、稳定性考察项目及方法

稳定性考察项目：性状、鉴别、水分、粒度检查、含量测定、微生物限度。 测定方法：依据药典、质量标准草案。

三、试验仪器试剂 四、试验内容

1、制剂稳定性加速试验研究：方法、结果。

2、制剂稳定性室温长期试验研究：方法、结果。 列表表示 五、初步试验结论 六、参考文献

附录二

检 验 报 告 书

检品名称 批 号 规 格 检验依据

检验项目 [性状]

标准规定

XXXX颗粒

每袋装Xg

检验目的 取样日期 报告日期

报批检验 年 月 日 年 月 日

XXXX颗粒生产用试行质量标准以及中国药典2005年版一部

检验结果

[鉴别]

（1） （2）

应呈正反应

呈正反应

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 显相同颜色的荧光斑点 的位置上，显相同颜色的荧光斑点

[检查]

水分 粒度 溶化性 装量差异 微生物限度

应不得过6.0%

应符合规定 应符合规定

细菌总数：每1g不得过1000个 霉菌酵母菌：每1g不得过100个 致病菌：不得检出 活螨：不得检出

4.6% 7% 符合规定 符合规定 150个 10个 未检出 未检出

0.78mg

[含量测定] 本品每袋含XX以XXX（C10H10O4）计不得少于0.40mg。

结论：本品按XXX颗粒生产用试行质量标准以及中国药典2005年版一部检查，

结果符合规定。

检验人： 复核人：

附录三

制剂稳定性加速试验结果

样品名称：XXX 批号：20050311 生产日期 年 月 日

制剂稳定性长期试验结果

样品名称：XXX颗粒 批号：20050311 生产日期： 年 月 日