蒽酮法测定可溶性糖
植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法)
一、材料、仪器设备及试剂
1． 材料
新鲜或烘干的植物叶片
2． 仪器设备
分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。
3．试剂
蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解；
9.2mol/L HCIO
浓硫酸（相对密度1.84）；
l％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；
100μg蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。 淀粉标准溶液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60-70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，却为每ml含淀粉100 g的标准液。
二、实验步骤
1． 标准曲线的制作
取20ml刻度试管11支，从0~10分别编号，按表加人溶液和水，然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡,，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml．以糖含量为横坐标；光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
表
试剂 管号
0 1,2
0.2
20 2.0 1.8 0 3,4 0.4 12.6 40 5,6 0.6 1.4 60 7,8 0.8 1.2 80 9,10 1.0 1.0 100 100μg·L-1蔗糖液/ml 0 水/ ml 蔗糖量/μg
2．可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10~0.30g ,共3份，分别放入3支刻度试管中，加人5－10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至20ml。
3．显色测定：吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中，加蒸馏水1.5ml，然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。 可溶%）＝（C*V／a*n）／（W*106）
式中C：标准方程求得糖量（g）
a：吸取样品液体积(ml)；
V：提取液量hal）；
n：稀释倍数；
W：组织重量（g）。
附注：该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与已糖，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的精况下，用惠酮法可以一次测出总量。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加人反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
淀粉测定