不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定
不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定
实验课题：? 不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定
二、选题背景或文献综述：?
四、实验条件：
实验仪器：722型分光光度计，水浴锅，烧杯，移液管、离心机、
实验试剂：冰醋酸，3%磺基水杨酸，标准脯氨酸溶液，酸性茚三酮试剂。
实验材料：小麦幼苗
五、实验原理与方法：
当植物遭受渗透胁迫，造成生理性缺水，植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株内的水分状况。所以其含量可作为植物缺水的参考指标。在酸性条件下，茚三酮与脯氨酸反应生成红色化合物。其含量与色度成正比，故可用分光光度计测定
六、实验方案或实验步骤设计：
（一）? 标准曲线的绘制:
（1）在分析天平上精确称取25mg 脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml 含脯氨酸100μg 。
（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml 容量瓶，分别盛入脯氨酸原液1.0，2.0，3.0? ，?4.0? ，?5.0及6.0ml ，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为2，4，6，8，10μg/m
(3）取5支试管，分别吸取2ml 系列标准浓度的脯氨酸溶液，加入2ml 蒸馏水，2ml?3%磺基水杨酸、2ml 冰醋酸和4ml 酸性茚三? 酮溶液，每管在沸水浴中显色1h 。
（4）冷却后各试管准确加入4ml 甲苯，振荡30S ，静置分层，使色素全部转至甲苯溶液。
（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯（红色甲苯相）溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm 波长处进行比色。
（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y ）依脯氨酸浓度（X ）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线。
（二）样品的测定：
1. 取地上部材料0.5g 剪碎后，加5ml?3%磺基水杨酸研磨，匀浆移至离心管，在沸水中提取10min ，冷却至室温后，3000r/min离心10分钟，取上清液2ml ，分别加蒸馏水2ml 、冰醋酸2ml 和2.5%茚三酮4ml ，置于沸水浴显色1h 。冷却后于520nm 处比色。从标准曲线上查出脯氨酸含量。
七、实验数据的处理：标准曲线
脯氨酸(ug/ml)
2
4
6
8
10
OD 值
0.1
0.168
0.248
0.356
0.461
测得的脯氨酸量：(通过回归方程) 甘露醇的量（mol/ml） 0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
OD 值
0.054
0.136
0.168
0.289
0.274
0.156
测得的脯氨酸含量(ug/ml)
1.3028
3.0965
3.9086
6.6553
6.1421
3.5379
八、实验结果与分析：
九、实验小结：