高密度脂蛋白胆固醇直接测定的方法与应用

・综　　述・

高密度脂蛋白胆固醇直接测定的方法与应用

李　勇,　屈步华综述,　庄一义审校

(南京军区南京总医院解放军医学检验中心,江苏南京210002)

摘要:　本文就高密度脂蛋白胆固醇(HDL2C)直接测定方法与应用情况作一综述,对目前使用最广泛的聚阴离子多聚体/表面活性剂(PPD)法与PEG修饰酶/硫酸α2环糊精(PEGME)法进行评价,认为PPD法研究尚不完善,非特异性反应明显、抗干扰能力较差,使用应持谨慎态度;而PEGME法较为可靠,但高三酰甘油引起的结果可略有偏低。同时介绍了目前认为最理想的分析方法———消除法(clearancemethod)。

关键词:　高密度脂蛋白胆固醇;　直接法;　表面活性剂法;　修饰酶法;　消除法中图分类号:　R44611　　　文献标识码:　A　　　文章编号:　100828199(2002)0120093202

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Directmethodforthemeasurementofhigh2densitylipoproteincholesterolanditsapplication

LIYong,QUBu2huareviewing,ZHUANGYi2yichecking

(CenterofMedicalLaboratoryScience,JinlingHospital,Nanjing210002,Jiangsu,China)

Abstract:　Thisarticlereviewedthedirectmethodforthemeasurementofhigh2densitylipoproteincholesterol(HDL2C)anditsap2plication.Thetwomostextensivemethods—thepolyanionpolymer/detergent(PPD)methodandpolyethyleneglycol2modifieden2zyme/α2cyclodextrinsulfate(PEGME)sulfatemethodwasevaluatedinthisarticle.ThePPDmethodhadsomelimitationsinitsevi2dentlydifferentialreactionandlowanti2interferencecapability.ThePEGMEmethodiscredibleexceptitisusedinserumwithhy2pertriglyceride,inwhichlowresultmayberesulted.Inaddition,themostidealmethodindate,i.e.theclearancemethodwasalsointroducedinthisreview.

Keywords:　High2densitylipoproteincholesterol;　Directmethod;　Polyanionpolymer/detergentmethod;　Polyethylenegly2

col2modifiedenzyme/α2cyclodextrinsulfatesulfatemethod;　Clearancemethod0　引　　言

高密度脂蛋白胆固醇(HDL2C)是常规血脂测定的重要项

目之一。目前,临床生化已基本实现从化学沉淀法1到在全自动化分析仪上直接测定的转变。直接测定法主要包括免疫分离法(immuno2separation,IS)2、聚阴离子多聚体/表面活性剂法(polyanionpolymer/detergent,PPD)3、PEG修饰酶/硫酸α2环糊精法(Ployethyleneglycolmodifiedenzyme/α2cyclodextrin2sulfate,PEGME)4和消除法(clearancemethod)5。周永列6在1997年对直接测定法的原理、方法学性能等就已做过比较详尽的评述。由于近几年HDL2C测定方法的发展,不仅又出现了新的方法(消除法),而且已报道过的方法在实际应用中也发现了不容忽视的新问题。因此,作者就这些方法和问题进行如下综述和讨论,以供参考。

1　基本原理与应用

111　IS法　利用抗脂蛋白抗体与乳糜微粒(CM)、低密度脂

际上对比研究也证实了其应用的不可靠性,Smith等7与Kei2

jzer等8的研究结果,否定了该法应用的可行性。除非此法能在特异性抗体的制备与方法简便上获得突破。112　PPD法　首先使试剂中聚阴离子吸附到LDL与VLDL上形成稳定的复合物,然后用表面活性剂将游离HDL颗粒弥散、溶解,同时胆固醇酶系与之发生酶促反应来实现HDL2C测定的目的。本法比IS法相对要优越得多,并已得到临床生化相对广泛的应用。国内研究亦大多局限于此法。

随着研究与应用的深入,PPD法也暴露出许多问题。作者实验发现,一是反应速度较慢,反应曲线显示在10min内对HDL反应不够迅速,且反应不完全;二是反应选择性不理想,这也是该法最大的弊端。从对超速离心纯化的LDL作用来看,PPD法试剂总是对LDL发生一种匀速的非特异性反应,反应量约为LDL的10%～20%,由于人体LDL远超过HDL水平,故使HDL测定的准确性受到严重影响。对标本的测定显示HDL水平假性增高,增高幅度为7%～15%;三是抗干扰能力较差。当标本中胆红素浓度超过20mmol/L时,测值显著降低。随着胆红素浓度增高,测值甚至会低到参考方法的60%。当标本中三酰甘油浓度超过2.0mmol/L时,则出现明显的假性增高。随着三酰甘油浓度的增高,测值虽会有所降低,但假性增高程度仍难降到20%以下。因此,对PPD法试剂使用应持谨慎态度。实际上,有关PPD法

蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)的特异性结合,胆固醇酶系与不被抗体结合的HDL发生反应,从而达到测定目的。本法原理看似简单,但实际应用时特异性抗体很难制备,故从根本上影响到试剂质量与检验结果。另因本法反应步骤多,只适合一些特定型号的分析仪,也限制了它的应用。实

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收稿日期:　2001211219作者简介:　李　勇(19612),男,吉林长春人,副主任医师,检验本科,从事临床生化专业。

的评价文献报道很多5,710,作者的实验也与他们的结果吻合,而结论却是偏保守的。Huang等9实验认为PPD法准确性、特异性均较差;Keijzer等8实验认为PPD法试剂不够准确,甚至会出现42%的偏差;而Nauck等10甚至建议临床检验不推荐使用PPD法,并指出该法的缺陷在于无法从根本上消除反应酶系对LDL明显的副反应。这种副反应通过复合标准标定,虽可相应地降低非特异性反应对结果的影响,但却不能客观地反映标本情况,假性增高或降低的可能性会随时发生。113　PEGME法　在试剂1中硫酸α2环糊精、硫酸葡聚糖与标本中的LDL、VLDL及CM形成水溶性复合物。试剂2中

PEG修饰酶系对HDL发生反应,从而达到检测目的。本法原

理着重点在于:①硫酸α2环糊精对富含apoB的LDL组分产生一种屏蔽作用;②PEG修饰酶中的PEG分子产生空间位阻,不利于大分子底物与酶接触,而又不影响小分子的HDL与酶发生酶促反应;③试剂2中的表面活性剂在不影响硫酸2环糊精2LDL复合物的基础上能使HDL快速充分溶解。上述三点充分保证HDL测定的特异性和准确性。

本法试剂非常优良,也是目前使用最为广泛的品种。但因技术难度较大,国内尚无产品问世。技术问题主要存在于修饰酶的合成与表面活性剂的筛选。作者对该试剂考察认为,本法能够实现对HDL充分、快速的反应,对LDL的非特异性反应极少,抗干扰能力较强,结果较准确。上述结果与文献报道8,11一致。从报道的情况看,本法试剂除对高三酰甘油标本结果产生一定的负相关(测定值比参考方法约低

10%)外,未见其他干扰因素报道。因此,本法实际上已成为

公认的HDL2C自动化测定的可靠方法。实现本法试剂的国产化也是十分有意义的工作。114　消除法　这是迄今文献报道最有效的、最理想的测定

HDL2C的方法。基本原理是在试剂1中利用选择性离子强

度缓冲液,将除HDL以外的CM、LDL、VLDL组分快速充分溶解,胆固醇酶系发生酶促反应首先消除掉HDL以外的脂蛋白组分,然后在试剂2中利用常用的表面活性剂溶解HDL,并产生酶促反应达到测定HDL2C的目的。该法与LDL2C测定的消除法12近似,技术难度是相当大的。近期RANDOX推出了本法试剂,但在国内尚未普及应用。估计广泛应用只是时间问题。据文献报道5的情况看,该法直接测定HDL2C的线性范围达到1