梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(被动凝集法)

梅毒螺旋体抗体诊断试剂（凝集法）说明书

一. 原理

日本瑞士必欧赛乐迪亚TPPA 是将梅毒Treponema Pallidum(Nichols株) 的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体Treponema Pallidum（TP ）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test;PA法），由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体Treponema Pallidum（TP ）抗体, 并且可用来测定抗体效价。

二. 特征

检查方式简单（Microtiter 法），适用于大量样品的筛选。

反应时间短，２个小时之后可以进行判定。

为了尽可能除去由于载体而产生的非特异性凝集，采用了自己公司开发的人工载体。

三. 试剂盒的组成

本试剂盒是由下述试剂和附带器具组成。

试剂组成 溶解液 血清稀释液 致敏粒子 未致敏粒子 对照用阳性

血清

包装规格

（注） （液状） （液状） （冷冻干燥） （冷冻干燥） （液状）

20个测试×5 8mL/瓶×1 29 mL/瓶×1 0.6 mL/瓶×5 0.6 mL/瓶×5 0.5 mL/瓶×1

55个测试×4 18mL/瓶×1 60 mL/瓶×1 1.5 mL/瓶×4 1.5 mL/瓶×4 0.5 mL/瓶×1

注）进行定性试验时的样品数

A ：溶解液（液状）

用于调制致敏粒子和未致敏粒子。

B ：血清稀释液（液状）

用于样品的稀释。

C ：致敏粒子（冷冻干燥）

调制时含有浓度为1%的被调制浓度为1% 的Treponema Pallidum(Nichols株) 致敏明胶粒子。

D ：未致敏粒子（冷冻干燥）

经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。

E ：阳性对照血清（液状）

用抗Treponema Pallidum(Nichols株) 家兔免疫血清调制成抗体效价为1：320（最终稀释倍数）。

附带器具

滴管 25ｕL 2支

该滴管只用于致敏粒子和未致敏粒子的滴入，请不要作为其他使用。

四. 使用目的

用于检测血清和血浆中的梅毒螺旋体Treponema Pallidum（TP ）抗体及测定其抗体效价。

五. 试剂的调制

A ：溶解液（液状）

按照测定操作规则使用。

B ：血清稀释液（液状）

按照测定操作规则使用。

C ：致敏粒子（冷冻干燥）

加入一定量的溶解液进行调制。

请在使用前30分钟于室温（15-30℃ ）下进行调制。

D ：未致敏粒子（冷冻干燥）

加入一定量的溶解液进行调制。

请在使用前30分钟于室温（15-30℃ ）下进行调制。

E ：阳性对照血清（液状）

按照测定操作规则使用。

六. 使用器具

使用本试剂时，请准备好以下器具。

微量反应板 U 型

微量加样器 25ｕ L （0.025mL ）用

微量滴管 25 ｕL （0.025mL ）用

移液管 微量移液管和刻度滴管

滴管

平板混合器

判定用观测板

七. 操作上的注意事项

样品中如果存在红细胞等其他有形成分，会给反应带来不便，所以应在离心除去之后再进行检查。血清样品即使钝化也不会影响检查结果。

致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均应该混合均匀后再使用。

微量反应板中的内容物充分混合后再静置。

反应静置过程中，一定要对微量反应板加盖并禁止振摇。

八. 测定操作

如果利用自动分析测定装置来使用本试剂时，请按照仪器的使用说明书进行操作。

以下所述是手工操作方法，请尽量迅速连贯的进行操作。

方法1（参照表1）

用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100 μL），从第2孔至第4孔各滴1滴（25 μL）。 用微量移液管取样品25 μL至第1孔中。然后用微量加样器或微量移液管以2n 的方式从第1孔稀释至第4孔。 用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴（25μL）未致敏粒子，在第4孔中滴入1滴（25μL）致敏粒子。 用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15-30℃）下水平静置。2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图象，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。另外，即使静置至次日也不影响判定结果。

表1

Well No. 1 2 3 4

血清稀释液

样品 100

25 25

25 25

25 25

25

样品稀释倍数 1：5 1：10 1：20 1：40

未致敏粒子（μl） 25

致敏粒子（μl） 25

最终稀释倍数 1：40 1：80

进行混合，盖上盖后静置反应2个小时

判 定

在方法1中判定为阳性的样品，请再用具有确定意义的方法2进行检测。

2. 方法2（参照表2）

用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100μL），从第2孔至最后一孔各滴入1滴（25μL）。 用微量移液管取样品25μL至第1孔中。然后用微量加样器或微量移液管以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔。

用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴（25μL）未致敏粒子，从第4孔至最后一孔各滴入1滴（25μL）致敏粒子。

用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15-30℃）下水平静置。2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图象，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。另外，即使静置至次日也不会影响其判定结果。

表2

Well No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

血清稀释液

（μl）

样品或对比用阳性血清

（μl） 100

25 25

25 25

25 25

25 25

25 25

25 25

25 25

25 25

25 25

25 25

25 25

25

样品稀释倍数 1：5 1：10 1：20 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 1：1,280 1：2,560 1：5,120 1：10,240 未致敏粒子

（μl） 25

致敏粒子（μl） 25 25 25 25 25 25 25 25 25

最终稀释倍数 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 1：1,

280 1：2,

560 1：5,

120 1：10,240 1：20,480

进行混合，盖上盖后静置反应2个小时

判 定

3. 对照试验

能够确认每例样品未致敏粒子的反应（最终稀释倍数1：40）均是（-）。

能够确认每次检查中血清稀释液和致敏粒子以及未致敏粒子的反应均是（-）（介质对照）。

每个试剂盒中的阳性对照血清都要与样品用相同的测定方法进行试验。阳性对照血清调制成抗体效价为1：320（最终稀释倍数）。

九. 测定结果的判定方法

1. 反应图象的判定

在判定用观测板上静置微量反应板，观察粒子的反应图象。将反应图象与介质对照的图象进行比较，并参照表３进行判断。

表3

反应图象 判定

粒子成纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形 (－)

粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形 (±)

粒子环明显变大，其外周边缘也不均匀且杂乱地凝集在周围 (＋)

产生均一的凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展 (++)

2. 判定基准

阳性：

未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－），致敏粒子（最终稀释倍数１：８０以上）的反应图象判定为（＋）时, 最终判定为阳性，进行方法2的测定时，将显示出反应图象为(+)时的最终稀释倍数作为抗体效价。

阴性：

无论未致敏粒子呈现何种反应图象，只要致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象显示为（－）时，最终判定即为阴性。

保留Ｂ）：

未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－）且致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象判定为（±）时，最终判定为保留。

注):通过本试剂判定为抗体阳性或保留时, 经过一段时间再进行检查要进行经时检查并与其他的检查结果和临床症状结合起来加以综合判断。

十. 吸收操作

对于未致敏粒子和致敏粒子均显示（±）以上凝集的样品，要按照下列顺序在完成吸收操作的基础上进行再试验。

取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95mL 至小试管中

加入样品50ｕL 混合，于室温（15～30℃）下放置20分钟以上

离心分离（2,000rpm 5分钟）, 然后分取上清液[吸收完毕的稀释样品（1：20）]50ｕL 至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。

从第4孔以后，要预先各滴入25ｕL 血清稀释液，从第3孔至最后一孔用微量加样器或微量移液管以2n 的方式进行稀释。

以后就与" 测定操作"2-3) 以后同样的操作进行判定。通常情况可以用上述的吸收操作吸收完全，但如果吸收不净时，请使用其他的检查方法。

十一 . 性能

1．特异性试验

自存标准样品按规定进行试验时，阳性标准样品的抗体效价相对于标准值在±１管以内，阴性标准样品在１：８０（最终稀释倍数）下不会显示凝集图象。

2. 灵敏度试验

试剂盒中带有的阳性对照血清按规定进行试验时，抗体效价相对于标准值（最终稀释倍数１：３２０）在±１管以内。

3. 重复性试验

对同一样品（最终稀释倍数１：１６０以上）重复进行５次测定，各抗体效价最大频数在±１管以内。 十二. 相关性

取样品３９１例，研究它们和对照品（间接红细胞凝集反应）的一致率，结果如下所示。

样品例数 n=391例

±１管以内一致率 100%

十三. 使用及处理上的注意事项

用本试剂判定结果为保留时，请使用其他的检查方法（FTA-ABS 法等）

本试剂用来测定样品中的梅毒Treponema Pallidum（TP ）的抗体效价，而不是直接用来测定梅毒Treponema Pallidum 。在判定为抗体阳性的情况下，请结合其他的检查结果以及临床症状来进行综合判断。

梅毒TP 感染初期，有可能不产生抗体，或虽然产生抗体但数量很少的情况。如果已被怀疑为感染时，即使本试剂的判定结果为阴性，也要经过一段时间再进行检查进行经时检查并与其他的检查（使用梅毒脂质抗原进行检查、FTA-ABS 试验等）结果和临床症状结合起来加以综合判断。

血清免疫反应中一般要考虑到前区现象，所以请充分注意。

服用了含有免疫球蛋白血液制剂的患者样品中，由于可能因服用的制剂而呈阳性反应，所以请注意对其做出准确判定。

在样品中，由于可能存在HBV 、HCV 、HIV 等，所以对样品的处理要特别注意。另外，使用过的器具（移液管、试管等）、废液、废物等除用次氯酸钠（有效氯浓度1,000ppm ，浸泡1小时以上），戊二醛（2%，浸泡1小时以上）进行消毒以外，还要进行高压蒸汽灭菌（121℃ 1小时以上）及焚烧等处理。

本试剂的溶解液、血清稀释液和阳性对照血清中含有0.1%的叠氮化钠防腐剂。在废弃时要用大量的水冲洗以避免生成具有爆炸性的金属叠氮。

试剂盒内的试剂都是为了产生正确的反应而组合起来的，请务必注意不要将生产批号不同的试剂混合在一起使用。

本试剂是以富士瑞必欧生产的FASTEC 微量反应板U 为基准进行调制的。

本试剂涉及仪器的使用，请按照使用说明书进行操作。

试剂误服入口中或进入到眼里，请采取用水充分冲洗等应急措施，如有必要请到医生处就诊。

在废弃试剂和容器等时，要按照有关废弃物的规定操作，将医疗废弃物和产业废弃物分开处理。

试剂盒内的冷冻干燥品原则上仅限于调制当天使用，但如果保存在2-10℃ 下，7日之内都很稳定。但为了慎重起见，在检查之前请进行对照试验。另外，在保存调制后的致敏粒子、未致敏粒子时，要特别注意不要混入异物，所以请用封膜等加以密封。

严格遵守本试剂的保存条件，注意不要冻结各种试剂。

十四. 贮存方法

请于2-10℃下保存

十五. 有效期

1年（参照外包装箱和容器的标识）

十六. 包装单位

20个测试/瓶× 5

55个测试/瓶× 4