脆弱拟杆菌的分离
脆弱拟杆菌的分离
1 材料与方法
1．1 试验用培养基
本试验采用固体MRS肉汤增殖培养基。配制方法：准确称量下列各种成分，补水至原来体积，用lmol／L NaOH溶液调整pH至7．2—7．4，115℃灭菌 30min。’
培养基：牛肉膏10g、蛋白胨10g、酵母浸粉 5g、葡萄糖20g、吐温80 lmL、磷酸氢二钾2g、乙酸钠4g、柠檬酸氢二铵2g、水合硫酸镁0．2g、水合硫酸锰0．2g、琼脂20g、半胱氨酸0．3g、蒸馏水1 000mL
1．1．2 生化鉴定用培养基
参考《伯杰氏细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》配制。
1．2 试验动物
断奶仔兔和青年兔
1．3 试验方法
1．3．1 样品采集及细菌培养
样品采集：用兔回肠和盲肠粘膜上的内容物分别划线接种于普通培养基和特殊培养基上培养，每个样3个平行。
厌氧培养
采用干燥器法。计算好容器体积，根据其体积(1 000mL空间用焦性没食子酸10g，用10％氢氧化钠溶液100 mL)称取焦性没食子酸和配制氢氧化钠溶液；然后将氢氧化钠溶液倒人干燥器底部，盛有焦性没食子酸的平皿轻轻浮于液面之上，放好隔板，将接种好的平板置于隔板上，并在隔板上点燃一支蜡烛，把干燥器盖盖上密封。轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸和氢氧化钠溶液混合作用。待蜡烛熄灭后置于37℃温箱培养2—3d，取出观察。
1．3．2 菌落观察与挑纯
观察各种培养基上菌落生长的形态，结合镜检，对菌落进行归类计数，筛选出优势菌株，进一步用划线分离法对优势菌株进行分离纯化，直到分离到纯菌为止。
1．3．3 菌种保存
厌氧菌用厌氧肉肝汤保存。
I．3．4 细茵的鉴定
根据菌落形态、镜检和生化试验结果，参照《伯杰氏细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》，综合判断，确定分离纯化菌株的种属。
拟杆菌属：
严格厌氧培养，革兰氏染色阴性，镜检菌体长短不一，多形性的杆菌。
生化反应结果：葡萄搪(+，产酸)、乳糖(+，产酸)、麦芽糖(+，产酸)、甘露醇(+，产酸)、淀粉水解(+)、尿素酶活性(一)、硫化氢气体产生(+)、硝酸盐还原反应(一)、触酶(+)。