幼狼血液生理生化及激素参考值
动物学杂志Chinese Jou rna l o f Zoology 2008, 43(4) :127~130
幼狼血液生理生化及激素参考值
陈 磊 张洪海
*
(曲阜师范大学生命科学学院 曲阜 273165)
摘要:为了了解狼(Can is lu p us ) 幼体的血液生理生化和某些激素正常值及其特点, 为相关生物学研究、人工饲养和健康检测提供参考资料, 本文采用全自动血球计数仪、全自动生化分析系统和全自动第三代发光免疫仪对8只4月龄幼狼的40项血液生理生化及8项血清激素指标进行了测定。结果表明, 雌雄幼狼的血液生理生化指标无显著差异; 雄性幼狼的大多数血液理化指标均比雌性幼狼偏高; 雌雄幼狼的血清激素水平存在一定的性别专属。关键词:幼狼; 血液学; 血液生化学; 激素
中图分类号:Q955 文献标识码:A 文章编号:0250-3263(2008) 04-127-04
The Hematology, Blood Biochemistry and Serum Hormones in Wolf Pups
C HE N Lei ZHANG Hong -Hai
*
(College o f Life Sc ie nce , Qu fu No rmal Unive rsit y , Qu fu 273165, China )
Abstract :To explore the normal values of hematology, blood biochemistry and serum hormones of wolf pups (Canis lu p us ) , 40hematological and blood biochemical indexes and 8serum hormone indexes were measured in eight 4-month -old wolf pups. It is showed that there i s no significant sexual difference in hematological and blood biochemical indexes between male and female wolf pups except for the sex -specific serum hormones. Key words :Wolf pup s; Hematology; Blood biochemistry; Serum Hormone
狼(Canis lupus ) 属于食肉目犬科犬属, 适应能力强, 曾在我国有广泛的分布。近年来, 由于人为干扰的影响, 狼野生种群的分布和数量已明显减少。目前, 国内外对狼的研究已从多方面展开, 在遗传学、生态学和行为学方面的研究
[1]
已较深入。在形态学方面, 有狼的颅骨、牙齿
[2]
形态结构及四肢骨骼等的研究报道, 在生理学方面, 也有学者从事幼狼的能量和蛋白质需求量的研究, 但目前仅有成年狼的血液指标
[4]
的参考值。本文对4月龄幼狼的血液生理生化和激素指标进行了测定, 旨在为狼的相关生物学研究以及人工饲养、繁殖、疾病诊断和防治提供一些基础性资料。
[3]
于内蒙古自治区达赉湖自然保护区附近。捕获时幼狼大约出生20d 左右。捕获后室内笼养,
室外有运动场。饲料主要以活鸡、鱼为主, 辅以鲜牛羊肉, 饮自来水。采血时已人工饲喂三个半月。生长发育良好, 平均体重12 84kg 。活动正常, 被毛光泽, 经兽医师检验无任何疾病。已免疫犬五联苗(美国Fort Dodge Animal Health 公司生产, 犬瘟热、狂犬病、犬细小病毒病、犬传染性肝炎、犬副流感五联苗) 。
基金项目 国家自然科学基金项目(No. 30370218) , 2007新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-07-0507) ; *通讯作者, E -mail:zhanghonghai67@126 com;
第一作者介绍 陈磊, 男, 博士研究生; 研究方向:野生动植物保护与利用; E -mail:lei surechen@163 com 。::1 材料与方法
1
128
动物学杂志Chinese Journal o f Zoology 43卷
1 2 仪器与试剂 采血用的2ml EDTA -k 2血常规管和5ml 促凝管为山东成武华通医用制品厂生产。
血常规指标应用全自动血球计数仪(Cel-l
Dyn3700型, 美国Abbott Laboratories) 进行检测。该仪器是一种5分类仪器, 采用氦氖激光, 运用流式细胞术进行红细胞和血小板计数; 应用电阻法原理(WIC) 和激光分析(WOC) 计数白细胞总数, 利用多角度激光散射分析技术(MAPSS 技术) 对白细胞进行分析, 可同时实现25项血常规和3项网织红细胞分析。
血液生化指标应用全自动生化分析系统(ADVIA2400型, 美国Bayer) 进行检测。仪器采用惰性碳氟油循环系统, 可基于分光光度法对血液各种生化指标进行测定。所有的样本按1 5比例进行预稀释处理, 标准反应温度为37 。Bayer 原装试剂可以分析包括3项电解质指标在内的49项血液生化指标。
血清激素指标应用全自动第三代发光免疫仪(AxSYM System, 美国Abbott Laboratories) 进行检测。该系列产品的主要作用原理是基于微
粒酶免疫技术(MEIA) 或荧光偏振免疫技术(FPI A) , 应用AxSYM System 进行人和哺乳动物血清及血浆激素指标的定量检测。仪器操作自动化, 可连续取样, 任意加样本、试剂和消耗品。加样时, 所取血液样本经离心(3000r min, 5min) 分离血清后, 与待检激素试剂盒同时放置于AxSYM System 试剂托盘的固定位置, 样本和待检激素的抗体通过取样臂的探头自动吸入AxSYM System 的反应锅(RV) 中, 反应锅即被转移至反应中心进行反应。激素检测所用试剂盒购于美国Abbott Laboratories, 试剂盒均为即用型, 规格为100Tests, 使用时血清样本及检测试剂均无需稀释。试剂盒主要成分及其检测时所需血清量见表1。
表1 血清激素指标检测试剂盒及血清量
Table 1 The reagent kits and the quantity of serum for serum hormone test
名称Reagent kit AXS FT3RGT AXS FT4RGT AX S INSUL RGT AXS FSH RG T AX S ESTRA R GT AXS TESTO RG T AXS PR OG RG T AXS COR TI RG T
主要成分Composition
FT3碱性磷酸酶标记物, 山羊Ant-i T3单抗(微粒子包被) FT4碱性磷酸酶标记物, 绵羊Ant-i T4单抗(微粒子包被) Insulin 碱性磷酸酶标记物, 鼠Ant-i Insulin 单抗(微粒子包被) 鼠Ant-i FSH 单抗(微粒子包被) , 山羊Ant-i FSH 多抗碱性磷酸
酶标记物
Es tra 碱性磷酸酶标记物, 兔Ant-i Es tra 多抗(微粒子包被) Testo 碱性磷酸酶标记物, 鼠Ant-i Tes to 单抗(微粒子包被) Prog(微粒子包被) , 绵羊Ant-i Prog 单抗碱性磷酸酶标记物Corti 荧光追踪剂, 鼠Ant -i Corti 单抗, 山羊Ant-i Corti 多抗
灵敏度(95%) Sensitivity 1 1~30ng L 4~60ng L 1~40mU L 0 17~106IU L 0 025~4 8mg L 0 01~15mg L 0 2~40 g L 0 01~0 6mg L
方法
Method MEIA MEIA MEIA MEIA MEIA MEIA MEIA FPIA
血清量( l) Quantity
[***********]150150
1 3 实验方法 于秋季(9月初) 进行实验。幼狼采血前禁食14h, 早8 00~9 00时在清醒状态下人工仰卧保定, 后肢外侧隐静脉采血12~15ml 。其中, 2ml 注入EDTA -k 2血常规管中, 颠倒8~10次, 制备抗凝血, 用于血液生理指标的检测。另外10ml 分别注入两个5ml 促凝管中, 静置, 制备血清, 用于血清生化和激素水平的检测。所有血样均未出现溶血现象。所有检测均在当天完成, 检测具体工作在济宁医1 4 数据处理 统计分析应用SPSS 13 0完成, t -检验比较雌雄个体间相应指标的差异显著性。分析数据用平均值 标准差(Mean
SD) 表示。
2 结 果
2 1 血液生理指标测定结果 经测定比较发现, 雄性幼狼的大多数血液生理指标均比雌性幼狼偏高, 但未发现显著差异(P >0 05) (表
4期陈 磊等:幼狼血液生理生化及激素参考值
表2 4月龄狼血液生理参考值
Table 2 The hematological indexes of 4-month -old wolf pups (Mean SD)
129
测定项目Item 白细胞Leucocyte (109 L) 红细胞Erythrocyte (10 L)
血红蛋白浓度He moglobin (g L)
12
(n =4) 10 07 2 89
5 73 0 18138 50 6 3641 20 1 4171 90 0 1424 15 0 35336 00 4 24138 00 144 2513 75 0 3529 65 1 06
(n =4)
10 50 2 60
5 28 0 44126 50 16 2637 45 2 6270 95 0 9223 90 1 13337 00 19 80178 50 75 6614 30 0 4230 55 1 91
红细胞压积He matocrit value (%)
平均红细胞体积Mean corpuscular volume (fL *)
平均红细胞血红蛋白Mean corpusc ular hemoglobin (pg)
平均红细胞血红蛋白浓度Mean corpus cular hemoglobin concentration (g L) 血小板Blood platelet (10 L)
红细胞分布宽度变异系数The variation coeffici ent of corpuscular dis tribution (%)
9
红细胞分布宽度标准差The s tandard di fference of corpuscular dis tributi on ( *fL, 毫微微升, 即10-15L 。*fL, fe mtoliter, 1fL=10-15L.
fL *)
2 2 血液生化及激素指标测定结果 经测定比较, 雌雄幼狼的各项血液生化指标未发现显著差异(P >0 05, 表3) 。睾酮和雌二醇的测定
值雌雄幼狼差异显著(P
表3 4月龄狼血液生化参考值
Table 3 The blood biochemical indexes of 4-month -old wolf pups (M ean SD )
测定项目Item
总蛋白Total protein (g L) 白蛋白Albumin (g L) 球蛋白Globulin (g L) 白蛋白 球蛋白A G
谷草转氨酶Aspartate aminotrans ferase (U L) 谷丙转氨酶Alanine transa minase (U L) 谷草 谷丙AST ALT
肌酸激酶Creatine kinase (U L)
肌酸激酶同工酶Creatine kinas e i soenzyme (U L) -谷氨酰转肽酶 Glutamyl transpeptidase (U L) 乳酸脱氢酶Lactate dehydrogenase (U L)
羟丁酸脱氢酶Hydroxybutyrate dehydrogenase (U L) 碱性磷酸酶Alkaline phosphatase (U L) 总胆固醇Total choles terol (mmol L) 总胆红素Total bili rubin ( mol L) 直接胆红素Direct bilirubin ( mol L) 间接胆红素Indirect bili rubin ( mol L) 尿酸Uric acid (mmol L) 尿素氮Urea ni trogen (mmol L) 肌酐Creatini ne ( mol L)
甘油三酯Triglyceride (mmol L) 葡萄糖Glucose (mmol L) 钙Calci um (mmol L) 镁Magnesium (mmol L) 磷Phosphorus (mmol L)
载脂蛋白a Apolipoprotei n a (g L) 载脂蛋白b Apolipoprotein b (g L)
高密度脂蛋白Hi gh density li poprotein (mmol L) 低密度脂蛋白Low density lipoprotein (mmol L) 极低密度脂蛋白Very low densi ty lipoprotein (mmol L)
(n =
58 25 30 35 27 90 1 09 47 50 59 00 0 84 294 50 539 00 5 50 120 00 51 50 213 00 6 75 1 90 0 80 1 10 17 50 4 05 68 00 0 60 5 60 2 73 0 71 3 42 0 40 0 04 4 35 0 86 1 56
4) 3 181 631 560 012 1218 380 2354 45120 210 7132 5312 0215 570 630 140 010 143 540 350 010 140 280 100 090 470 010 010 190 260 23
(n =4)
58 45 0 6430 00 0 5728 90 0 571 04 0 0442 50 0 7155 00 2 830 77 0 03277 00 28 28497 50 62 934 50 0 71127 00 12 7348 50 7 78208 50 9 196 60 0 282 40 0 571 05 0 211 35 0 3518 00 7 076 05 2 0569 00 1 410 60 0 016 45 1 062 73 0 140 67 0 063 26 0 450 40 0 010 04 0 014 13 0 060 76 0 061 72 0 32
130
动物学杂志Chinese Journal o f Zoology 43卷
表4 4月龄幼狼的血清激素参考值
Table 4 The blood serum hormone indexes of 4-m onth
-old wolf pups (Mean SD)
测定项目Item
游离三碘甲胺酸
Free triiodothyronine (pmol L) 游离四碘甲胺酸Free thyroxine (pmol L) 胰岛素Insulin (mU L) 促卵泡成熟激素Follitropin (IU L) 雌二醇Es tradiol (mg L) 睾酮Tes tos terone (mg L) 孕酮Proges terone (mg L) 皮质醇Cortis ol (mg L)
(n =4) 4 70 0 42
(n =4) 4 25 0 21
否犬科动物幼兽的血液各项参数同样较为接近, 尚待考证。同时, 通过对金钱豹
[5~8]
等动物
的血液指标研究发现, 血液指标年龄间的差异
明显大于性别间的差异。这一点在狼的血液指标中是否也有体现, 还需进一步验证。
幼狼的血清激素水平体现了性别差异。但是这种差异较之成年动物还不是很明显, 这一点体现在雌雄幼狼除睾酮和雌二醇以外其他指标(如孕酮) 的差异不显著上。
致谢 本实验得到了济宁医学院附属医院的鼎力相助, 在此谨表谢意! 参 考 文 献
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9 75 1 0617 40 9 050 25 0 050 05 0 071 40 0 421 38 0 480 11 0 32
10 50 0 5716 55 9 830 31 0 071 15 0 210 05 0 012 08 1 030 12 0 38
3 讨 论
血液指标是反映动物生理机能和生物学特性的重要参数, 直至成年, 动物的各项血液指标逐渐趋于稳定。幼狼血液生理生化测定结果中
大多数指标吻合情况比较好, 而谷草转氨酶、谷丙转氨酶、 -谷氨酰转肽酶、乳酸脱氢酶、羟丁酸脱氢酶、碱性磷酸酶等酶类指标浮动比较大。在对山魈(Mandrillus s phinx ) 、梅花鹿(Cervus nippon ) 、金钱豹(Panthera pardus ) 等野生动物血液生理生化指标测定中也存在同样问题
[5~7]
。
由于动物血液指标测定结果与动物年龄、性别、生理状况、生活环境等因素有关, 同时还受动物采食、运动、应激以及样本处理的影响。所以, 以上结果还需进一步验证。
雌雄幼狼的各项血液指标差异不显著(P >0 05) , 这一结果与成年狼(Panthera tigris amoyensis )
[7]
[8]
[4]
及华南虎
的情况相同, 而与
金钱豹的测定结果不同。通过对成年狼和犬科其他动物的比较研究发现, 犬科动物大多数血液生理生化参数值无种属特异性
[4, 9~11]
。是