瑞氏-姬姆萨染液使用说明书
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瑞氏-姬姆萨染液
瑞氏-姬姆萨染液(Wright's-Giemsa Staining Solution)
瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料,血红蛋白,嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色。细胞核蛋白为酸性蛋白,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色。中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色。
吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同。吉姆萨染液对胞质和中性颗粒则着色较差。
为兼顾二者之长,选用复合染色法。即瑞氏-吉姆萨染液。
染色步骤
1、涂片并固定:将细胞均匀的涂布于洁净的载玻片上,待其干燥后进行固定。
固定液的选择视具体情况而定,多数细胞可用甲醇固定。甲醇固定:涂片干燥后浸入甲醇内,固定时间15-30min。
2、染色:
1)固定后,室温下通风晾干。将载片置于染缸内准备染色;
2)将瑞氏-吉姆萨染液倒入染缸内,使染液覆盖载片上的细胞。具体染色时间视细胞而定,一般3~30min,染色时最好在镜下观察;
3)染色后水洗,先用PBS溶液漂洗载片,再用小股水流冲洗,防止将大量的细胞从载片上冲落下来而影响后续观察。冲片结束后将载片放到阴凉处风干。
3、封片:中性树胶封片,制作成永久涂片。
4、显微观察:将干燥后的载片置显微镜下观察。
结果
细胞核被染成蓝色,而细胞质则被染成红色。
注意事项
1. 染色时间与室温及细胞多少有关。室温低、细胞多则染色时间要长;反之,可减少染色时间。必要时可增加染液量或延长时间。冲洗前,应先在低倍镜下观察有核细胞是否染色清楚,核质是否分明。应该在具体实践中摸索合适的时间,特别是在更换染液时。每批染色液,均需试染,以便掌握染色时间。
2. 冲洗时不能先倒掉染液,应以流水冲洗,否则会使染料沉着在载片上。
3. 冲洗完的载片应立放于支架上,防止剩余水分浸泡而导致脱色。
温馨提示
为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。
储存温度
避光储存于室温。 1