高密度脂蛋白受体及结合蛋白

CN 43-1262/R 中国动脉硬化杂志2002年第10卷第6期

[文章编号] 1007-3949(2002) 10-06-0537-05

537

#文献综述#

高密度脂蛋白受体及结合蛋白

王 东综述, 丁 华审校

(山东大学医学院药理学研究所, 山东省济南市250012)

[主题词] 脂蛋白, 高密度; 受体; 动脉粥样硬化; 胆固醇; 逆向转运

[摘 要] 高密度脂蛋白受体在脂质代谢中发挥着重要的作用。最近十年, 有关高密度脂蛋白受体及结合蛋白的研究受到了广泛的重视, 其中被公认为高密度脂蛋白受体的清道夫受体B Ñ及很有可能被确定为受体的高密度脂蛋白结合蛋白2最引人注目。两者的分子结构、特异性配体及在胆固醇逆向转运中的作用具有较大的差异, 进一步探明两者之间的关联可为研究动脉粥样硬化的发病机理及其新的治疗途径提供有力的理论基础。[中图分类号] R363[文献标识码] A 迄今为止, 在不同细胞的表面及细胞内已分离出了多种可与高密度脂蛋白(high density lip oprotein, HDL) 结合的蛋白质, 它们具有截然不同的分子结构, 分别参与多种生物化学过程的调控。其中某些蛋白质可特异性识别并以高亲和力与HDL 结合, 引发下游的生物学效应, 称之为HDL 的特异性受体。有些蛋白质也可与HDL 结合, 但不产生或只产生较弱的效应, 则称之为HDL 的结合蛋白。至今, 研究比较深入的HDL 受体及结合蛋白包括清道夫受体B Ñ(scavenger re -ceptor class B type Ñ, SRB Ñ) 、高密度脂蛋白结合蛋白(HDL binding protein, HB) 、CD36、vigilin 及cubili n 等, 其中只有SRB Ñ被公认为HDL 受体[1], 并对其它几种的结构和功能进行深入的研究, 以探明其与HDL 及相关效应的关系。

蛋白的羧基端有一个亮氨酸拉链区, 决定蛋白质二聚体结构的形成; 另外还存在一个亲过氧化物酶的序列(PTS1) , 可与特异的PTS1受体(PTS1导入受体) 结合, 指导HDL 与过氧化物酶结合, 使胆固醇发生B -

氧化降解。

1 清道夫受体B Ñ

1. 1 结构

SRB Ñ在结构上的同源性隶属于CD36膜蛋白家族成员, 在功能上与CD36、SRB Ò同属于B 类清道夫受体家族, 此类受体存在一免疫优势区域(immunodominant domain) , 类似于A 类清道夫受体带正电荷的胶原样结构, 具有广泛的配体结合特性, 可与低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL) 、修饰的LDL 、HDL 等结合, 却不能与A 类受体某些其它的配体如岩藻多糖、多聚鸟苷酸、角叉聚糖等结合。Johnson 等克隆了大鼠卵巢细胞上mSRB Ñ的基因) ) ) Srbl, 然后由结构基因推测SRB Ñ含有509个氨基酸残基, 分子量约为57kDa, 包括一个较长的胞外结构域, 胞外段上含有8个半胱氨酸和11个潜在的N -糖基化位点, 另外还包括两个疏水区和两个胞内结构域(图1) 。两个疏水区参与形成跨膜片段, 而胞内段含有潜在的蛋白激酶C(protein kinase C, PKC) 和蛋白激酶A(protein kinase A, PKA) 的丝氨酸磷酸化位点。在受体

[收稿日期] 2002-05-20 [修回日期] 2002-09-17

[作者简介] 王东, 男, 1977年3月出生, 河南卫辉人, 硕士研究生, 研究方向为心血管药理学。丁华, 女, 1952年3月出生, 山东济南人, 教授, 硕士研究生导师, 主要从事心血管药理学, 特别是抗动脉粥样硬化药研究。

[2]

图1. mSRB Ñ示意图. 小鼠SRB Ñ含有两个胞浆域、两个疏水

的跨膜域和一个胞外域.

Babitt 等[3]用免疫化学法发现, mSRB Ñ经N -寡糖链糖基化后, 分子量变为82kDa, 并且可抵抗蛋白水解酶的消化。另外, 位于跨膜区与胞浆区交界处的半胱氨酸残基可发生脂酰化, 有利于SRB Ñ与胞浆侧的蛋白质(如胞内的酪氨酸激酶和内皮细胞NO 合酶) 相互作用, 触发信号的转导。另外还发现SRB Ñ存在于被称作caveolae 的膜微凹陷区。caveolae 是细胞膜表面50~100nm 的瓶状凹陷, 此结构中主要成分为21~24kDa 的caveolin, 是一种胆固醇结合蛋白[13]。caveo -lae 在SRB Ñ介导的脂质转运中发挥着重要的作用。1. 2 功能及分布

1996年, Acton 等[1]克隆了SRB ÑcDNA, 并将其转染到中华仓鼠卵巢(chinese hams ter ovary, C HO ) 细胞上表达, 利用核素标记HDL 中的载脂蛋白和胆固醇, 测定受体相关指标及胆固醇酯(cholesterol ester, CE) 的摄取, 结果显示HDL 可与SRB Ñ以高亲和力结合。当细胞与标记配体结合达到平衡后, 18%的CE 被细胞摄取, 只有0. 5%的载脂蛋白与细胞结合。为了区分CE 进入细胞是净转运还是细胞与HDL 脂质

538

的交换, 又测定了胆固醇含量, 发现反应达平衡后转染细胞内胆固醇含量大约增加了20%, 与上述结果基本吻合, 说明CE 选择性摄取是一种净转运过程。同时证实了SRB Ñ是HDL 的特异性受体, 介导CE 的选择性摄取。

用抗体阻断鼠肾上腺皮质及卵巢细胞上SRB Ñ的胞外段, CE 的选择性摄取被抑制

[4]

ISSN 1007-3949Chin J Arterioscler, Vol 10, No 6

浆膜脂质双分子层的外层融合, 在融合状态下, 位于脂蛋白核心的CE 可直接接触并转移到膜的疏水中心, 再从膜上转运到胞内其它胆固醇池。同时未酯化的游离胆固醇则通过融合的磷脂膜在细胞及脂蛋白之间交换。因此半融合机制可解释SRB Ñ介导的脂质摄取及胆固醇外流之间的相关性。

综上所述, SRB Ñ介导CE 选择性摄取的机制可能为:HDL 识别SRB Ñ后, SRB Ñ通过亮氨酸拉链区形成二聚体, 建立疏水通道, HDL 球形颗粒外面的磷脂膜与胞膜外层形成半融合状态, 由于SRB Ñ存在于caveolae 上, 因此CE 通过疏水通道沿浓度梯度转运至caveolae, 并与caveolin 蛋白结合, caveolae 形成含有SRB Ñ、caveolin 及CE 的囊泡内陷至细胞内, 将CE 运输到胞内其它的胆固醇池后, caveolin 及SRB Ñ重新回到细胞表面进行下一个转运过程, 从而完成CE 的选择性摄取。

M argarita 等[16]认为HDL 与SRB Ñ的结合在一定程度上有利于外流, 但将HDL 结合到细胞表面上并不足以解释胆固醇的外流, 因为用中性的不含载脂蛋白的磷脂双层脂质体, 虽然无法与SRB Ñ结合, 但一样可刺激胆固醇的外流。但如果用抗体阻断结合, 同时也阻断了胆固醇外流到脂蛋白[15], 可见单纯SRB Ñ与HDL 的结合在胆固醇的外流中是不充分的, 同时也说明磷脂在SRB Ñ介导的胆固醇外流中至关重要。Gregory 等[14]发现caveolin 、HSP 56、cyclophilin 40、cy -clophilin A 可组成chaperone 蛋白复合物, 将胆固醇转运到caveolae, 参与胆固醇的外流。因此HDL 与SRB Ñ结合后, 通过某种未知的途径可使胆固醇经chaperone 复合物转运到细胞膜上, 并分布于caveolae 中, 然后HDL 颗粒膜上的磷脂发挥接受媒介的作用, 将胆固醇转运到HDL 颗粒上。

Fluiter 等[18]研究发现, 在乙炔雌二醇的作用下, 肝实质细胞中SRB Ñ表达下调, 而枯否氏细胞的表达量显著增加。实质细胞中表达降低是对胆固醇累积的反应, 而枯否氏细胞(巨噬细胞) 增加受体的数量可能与它调节胆固醇的外流有关。因此他们认为胆固醇的外流和CE 的摄取两种作用是通过一种相互协调的方式进行的, 这种观点被Gu 等[15]所证实, 他们发现降低SRB Ñ摄取的功能后, 胆固醇的外流也受到一定程度上的抑制, 因此认为SRB Ñ介导的CE 的摄取与胆固醇的外流机制十分相关。另外SRB Ñ所介导的胆固醇外流不以载脂蛋白A Ñ(apolipoprotein A Ñ, apo A Ñ) 为接受体, 载脂蛋白A Ñ作为接受体的外流是单向的净转运, 而SRB Ñ介导的外流是双向的转运。

M endez 等观察到胆固醇累积的人皮肤纤维母细胞上HDL 受体与HDL 3结合后, 引起细胞内胆固醇由细胞内池转运到膜上, 此时胞浆中PKC 活性一过性升高; 如果阻断与受体的结合, PKC 的活性就不会升高, 也不发生胆固醇的胞内转运; 如果使用PKC 激活剂二辛酰基甘油、乙酰十四烷酸佛波酯可诱发胆固醇外流; 而PKC 抑制剂神经鞘胺醇则可抑制胞内胆固醇向胞膜转运, 但对膜上的胆固醇外流则无抑制作用。提示细胞内胆固醇外流的分子机制涉及PKC 的激活, 但如何激活PKC 及PKC 的下游途径尚在研究中。1. 4 受体活性的调节

。用基因打靶技术使小鼠

SRB Ñ基因突变, 则血浆中HDL 浓度升高, 肾上腺皮质细胞中中性脂质含量随之下降; 而肝脏中SRB Ñ表达降低二分之一后, CE 的摄取也随之减少[5]。可见SRB Ñ是介导肝及类固醇激素生成细胞中选择性摄取CE 的受体。

另有证据表明, SRB Ñ可介导胆固醇外流, 从而在胆固醇逆向转运过程的前期发挥作用。Ji 等[8]发现在用鼠SRB Ñ转染后的C HO 细胞中胆固醇的外流明显增强。外流率与受体的表达呈正相关性(r =0. 859) 。此结果在腹腔巨噬细胞、成纤维细胞、肝肿瘤细胞及肾上腺细胞中均得到证实。

SRB Ñ在鼠肝、卵巢、肾上腺细胞上高度表达, 在睾丸和乳腺细胞上表达相对较低, 在心脏上几乎无表达[1], 其分布与生理意义基本吻合。但是, 啮齿类动物中HDL 携带着循环中大部分的胆固醇, 在人体中主要的胆固醇转运体是LDL, 而不是HDL, 如培养的肾上腺细胞在ACTH 作用下, LDL 的摄取及代谢增加了5~6倍, 而HDL 中的胆固醇并未参与激素的合成[6]。这表明在人体中, HDL 胆固醇很少被类固醇激素生成细胞所利用, 而且在LDL 缺陷及垂体激素持续刺激下, 仍未发现受体上调以补充LDL 的不足[7]。因此SRB Ñ介导的胆固醇转运在人体中发挥怎样的作用需进一步研究。1. 3 作用机制

SRB Ñ既参与了CE 的选择性摄取, 又介导胆固醇的外流, 提示此受体可能在胆固醇逆向转运的起始及终末阶段均发挥作用。Steinberg 等[9]1996年提出SRB Ñ作用的一个停靠模式(docking action model) , 认为HDL 通过SRB Ñ停靠在细胞膜上, 或提供或接纳胆固醇, 运动方向取决于HDL 及细胞表面胆固醇的密度梯度, 但其具体机制仍未阐明。

Gu 等[10]发现, 尽管SRB Ñ和CD36均可与HDL 结合, 但只有表达SRB Ñ的COS 细胞才能有效介导脂质转运。而且两者转运效率的差异是由于胞外段的不同产生的, 因此认为在CE 的摄取中, 不仅需要SRB Ñ与HDL 的结合, 而且需要胞外段特异性介导CE 转运。Margery 等[11]也发现用基因突变法阻断HDL 与受体的结合可抑制CE 摄取, 所以受体与配体结合将HDL 固定在细胞表面是摄取中必须的一步。

研究发现, CE 是通过疏水通道沿浓度梯度转运的, 因此SRB Ñ的胞外段除可与配体结合外, 还可能形成疏水通道供CE 通过[12]。Margery 等[11]观察到SRB Ñ可形成二聚体或多聚体, 从而利于形成疏水通道, 供脂质转运, 可见SRB Ñ胞外段在CE 摄取中作用至关重要。caveolae 被认为是SRB Ñ介导的CE 摄取的起始接受部位, 超过80%的CE 在经由SRB Ñ摄取后首先累积于caveolae, 以与caveolin 蛋白结合的形式存在[14]。然后, caveolae 顶端融合, 复合物被胞饮入细胞内。

Gu 等[15]提出SRB Ñ可能与HDL 颗粒呈半融合的方式结合而介导脂质转运。球状脂蛋白颗粒的单层脂质外壳与

CN 43-1262/R 中国动脉硬化杂志2002年第10卷第6期

Landschulz 等[19]应用绒毛膜促性腺激素(hCG) 可致睾丸Leydi g 细胞上SRB Ñ的表达量剧增。Ri gotti 等[20]也发现应用AC TH 后肾上腺皮质细胞上SRB Ñ表达量增加。以上研究提示促激素可上调SRB Ñ的表达以增加胆固醇的供给, 有利于合成甾体激素。

Reaven 等

[21]

539

的纯化不稳定, HB 2含量较为丰富, 已被克隆并测序[27]。HB 2含有583个氨基酸残基, 由一个32个氨基酸残基的胞浆区(位于羧基端) , 一个24个氨基酸残基的疏水跨膜区和大约500个氨基酸残基的胞外区组成, 氨基端存在于胞外侧(图2) 。胞外段包括N -寡糖链修饰的8个糖基化位点, 其具体功能仍未查清, 因为脱糖基化后并不影响HDL 与HB2的结合[26]。另外还发现HB 2上存在着PKC 磷酸化位点。但由于位于细胞外, 在信号转导中的作用仍不清楚, 也许是在HB 2或其片段进入细胞内后被激活。HB 2与SRB Ñ在结构上有很大的差异, 属于免疫超家族类, 与活化白细胞粘附分子(activated leukocyte -cell adhesion molecule, ALCAM ) 、BEN (一种神经元粘附分子)

具有很高的同源性。

用过量的hC G 导致小鼠卵巢细胞hC G 受体

脱敏, 从而使细胞对hCG 的敏感性降低, 继之细胞内胆固醇耗竭。虽然此时细胞对hCG 的敏感性下降, 但SRB Ñ的表达及CE 的摄取却明显增加, 同时伴有胆固醇合成酶及LDL 受体表达增加, 反映了由于胆固醇含量降低导致的负反馈调节。因此, 除促激素外, 细胞内胆固醇含量的高低可能也参与了SRB Ñ表达的调节。Sun 等

[22]

也发现用环状糊精诱发

胆固醇外流, 使细胞内胆固醇含量减少后, Y1-BS1肾上腺细胞SRB Ñ的表达增加。虽然抑制ACTH 的释放可致SRB Ñ水平下降, 但胆固醇含量低的细胞内SRB Ñ表达量仍明显高于胆固醇含量正常的细胞。以上结果说明, 促激素及胞内胆固醇含量均可促进SRB Ñ介导的CE 摄取, 细胞内胆固醇含量降低时可导致SRB Ñ的表达增加, 但在体内高ACTH 条件下这种效应就被掩盖了。

细胞内胆固醇含量降低可反馈性升高SRB Ñ的表达水平, 但Hirano 等[23]发现人主动脉粥样斑块中泡沫细胞表面SRB Ñ表达水平相对较高。在细胞培养中, 人原单核白血病细胞THP -1用PMA 刺激分化为巨噬细胞后, SRB Ñ表达水平降低, 但用修饰的LDL 累积于巨噬细胞后, 则SRB Ñ表达水平明显升高, 这与在泡沫细胞上高SRB Ñ表达是一致的。提示异常脂质可能通过不同于正常脂质的作用途径调节SRB Ñ表达。另有实验证实, 氧化型低密度脂蛋白(oxidized low densi ty lipoprotein, ox -LDL ) 可呈时间与剂量依赖性降低SRB Ñ的表达, 提出在巨噬细胞, ox -LDL 除可通过增加氧化脂质的摄取诱导泡沫细胞形成外, 还可通过改变SRB Ñ调节的脂质跨膜双向流动促进泡沫细胞形成[36]。看来, SRB Ñ在动脉斑块病变的发生中可能发挥一定作用, 但在泡沫细胞上的表达是促进斑块的进展还是具有保护作用尚不清楚。曾有报道, 将SRB Ñ基因导入LDL 受体基因敲除的鼠肝细胞中, 可明显减轻粥样病变造成的损伤[24]。

最近Lopez 等[25]研究发现, 用cAMP 孵育大鼠黄体细胞后, SRB ÑmRNA 水平提高118倍, 认为SRB Ñ基因启动子上存在类固醇生成因子-1(SF -1) 的结合位点(SFBD) , SFBD 能与SF -1结合激活转录。若使PKA 的调节亚单位基因突变, 则cAMP 的激活作用消失。当除去SF -1上的PKA 的丝氨酸磷酸化位点, 则可减少SF -1对启动子的激活。因此, cAMP 可激活PKA, 磷酸化SF -1, 生成SF -1-P, 从而促进启动子SFBD 与SF -1-P 结合, 激活启动子, 使转录水平提高。

HB 2类似于ALCAM, 在体内分布很广, 可在肝脏、肺、小肠细胞表面检测到, 在肾脏、卵巢及睾丸上也有少量的分布。HB 1在组织分布上与HB 2略有差异, 脾脏上分布较多, 肝、小肠、肺上分布较少。HB 1与HB 2之间不存在免疫交叉反应, 提示两种蛋白具有不同的功能[17]。Hidaka 等[30]最近利用荧光显微显像及流式细胞术技术从人血单核细胞中分离出两种HDL 结合蛋白, 与HB 极为相似。其与HDL 3的结合不受VLDL 、LDL 的竞争性抑制, HDL 2可被部分抑制。另外还发现载脂蛋白A Ñ与HDL 3一样可结合于此位点, 若用胰蛋白酶消化后则结合被抑制。2. 2 功能及调节

为测定HB 2是否为另一个HDL 受体, Matsumoto 等[27]用HB 2转染COS 、C HO 及HepG 2细胞, 转染后HB 2表达的细胞与HDL 的结合增加了80%~90%。在未分化的THP -1细胞中几乎测不到HB 2mRNA, 但如果用PMA 诱导THP -1分化为巨噬细胞后, 细胞中HB 2mRNA 浓度则明显增高, 配体印迹试验也表明, 转化后的细胞上HDL 与HB 2的结合明显高于未经处理的细胞。而用乙酰化的LDL 孵育巨噬细胞, 使细胞中胆固醇含量增加, 此时HB 2mRNA 浓度呈剂量依赖性降低。此结果与在SRB Ñ上的发现正好相反, 提示了HB 2在功能上图2. HB 2模式图. 蛋白一次跨膜, 疏水跨膜区含24个氨基酸

残基, 羧基端的32个氨基酸残基位于细胞内。位于细胞外侧的527个氨基酸残基, 包括氨基端是HDL 或载脂蛋白A Ñ的结合区。8个潜在的糖基化位点始于氨基端第95、167、265、306、361、457、480和499位残基。

2 高密度脂蛋白结合蛋白2

2. 1 结构及分布

大鼠肝细胞膜上存在另外两个HDL 结合蛋白, 被称为HB 1和HB 2, 分子量分别为120kDa 和100kDa [17,26], 可特异识别HDL 及载脂蛋白A Ñ。HB 1存在的数量很少, 对进一步

540

可能与SRB Ñ有所不同。Mathai 等[28]发现, 辛伐他汀可导致大鼠细胞HB 2的表达降低50%~60%。家兔实验也证实了辛伐他汀具有相同的作用

[29]

ISSN 1007-3949Chin J Arterioscler, Vol 10, No 6

表1. SRB Ñ与HB 2的特点.

SRB Ñ

分子量结构同源性

82kDa

两端均在胞浆内, 两个跨膜

区CD36

HB 2100kDa 羧基端位于胞内, 一个跨膜区粘附分子

, 这可能与他汀类药物抑制细

胞内胆固醇的合成有关, 当由于合成减少导致细胞内胆固醇含量降低时,HB 2的表达也降低, 胆固醇外流随之减少, 最终保证细胞内胆固醇含量的稳态, 维持细胞的正常功能。因此有学者提出, HB 2在HDL 的抗动脉粥样硬化作用中可能担当着重要的角色

[27]

, 其机制一方面可能介导胆固醇的外流,

分布

参与胆固醇的逆向转运; 另一方面, 由于其与粘附分子同源性很高, HB 2可能与其他粘附分子形成寡聚体[31], 促进同型和异型细胞之间的粘附, 如参与巨噬细胞的粘附, 诱发动脉斑块的发生。当HDL 及载脂蛋白A Ñ颗粒与HB 2结合后, 破坏寡聚体的形成, 阻碍细胞间的相互作用, 从而抑制巨噬细胞迁入内膜形成泡沫细胞。

Morrison 等[32]报道大鼠细胞表面存在两个HDL 结合位点, 一个Kd 值是0. 94mg P L, 另一个Kd 值是33mg P L, 后者的数值接近公认的HDL 受体SRB Ñ的Kd 值。如果用胰蛋白酶消化HDL, 则与高亲和力位点的结合消失, 但低亲和力位点的结合仍在, 提示需要完整的肽链存在才能与高亲和力位点结合。Barbaras 等[33]证实了这一点, 而且这个高亲和力位点只识别载脂蛋白A Ñ。HB 2结合特异性配体的特征与此高亲和力位点类似, 但没有直接证据表明两者的关系, 而且也没有报道说在同一细胞上同时分离出SRB Ñ和HB 2。

不含脂质或脂质含量很少的载脂蛋白作为接受体可能通过其他机制介导胆固醇的外流。Yukihiro 等[36]认为循环中存在着数量很少的不含脂质或携带脂质很少的载脂蛋白A Ñ, 之所以含量很少是因为它从HDL 颗粒上解离下来后被迅速内吞到细胞内, 此过程是通过特异的胞膜上的受体完成的, 进入细胞后, 可与胞内的磷脂及游离胆固醇结合, 然后再以胞吐的形式释放到胞外, 又迅速与HDL 颗粒结合, 将脂质转运到HDL 颗粒上, 如此循环使得胞内胆固醇外流到细胞外。至今此特异性受体尚未被纯化和鉴定, 是否与HB 2为相同的物质仍未阐明。支持HB 2介导载脂蛋白A Ñ参与的胆固醇外流的证据是:HB 2识别载脂蛋白A Ñ为高度特异的; PKC 的激活可导致胆固醇的外向流动, 而HB 2的肽链中存在PKC 的结合位点, 且在细胞外, 提示需要进入细胞内发挥作用; 药物使细胞中胆固醇含量减少, 可反馈性降低HB 2含量; PMA 可诱发胆固醇外流是通过激活了PKC, 而PMA 也可使THP -1细胞内编码HB 2的核酸含量增加, 提示两者存在一定相关关系。但此种外流方式特异性高, 效率也高, 它的阐明对胆固醇外流的研究意义重大。

效应降低升高配体调节因素

肝脏、由PM A 刺激

肝脏、类固醇、卵巢、睾丸、

后单核源性的巨噬

R AW 、J774

细胞LD L 、modified -LDL 、HDL 、阴

离子磷脂囊泡及含apo A 、HDL 、apo A ÑE 、C 的脂质体

cA MP

促激素(hCG 、ACTH) 雌激素对肾上腺、黄体、枯否氏细胞

多不饱和脂肪酸

细胞内胆固醇含量下降人单核细胞源性巨噬细胞用修饰的LD L 孵育分化后动脉粥样病变泡沫细胞中细胞内胆固醇含量上升维生素E

雌激素对肝实质细胞THP -1细胞用PMA 刺激后促进CE 摄取和胆固醇外流

THP -1细胞用P MA

刺激后

人巨噬细胞用LDL 孵育分化后辛伐他汀促进胆固醇外流

SRB Ñ和HB 2作为两种HDL 的结合蛋白在相同条件下发挥相反的效应, 提示同一细胞上可能同时存在两种结合蛋白, 在调节脂质转运中的作用也各有不同。但至今仍未在同一细胞上同时分离出两种结合蛋白, 因此对其在动脉粥样硬化的发生、发展及消退中发挥什么样的作用也未阐述清楚。对于他汀类药物降低肝细胞HB 2蛋白含量, 由于肝细胞和外周细胞在胆固醇代谢中的不同意义以及修饰后的LDL 造成的异常脂质沉积, 无法判断其对泡沫细胞HB 2的影响以及对SRB Ñ和胆固醇外流效应的影响, 有关问题尚在研究中。

4 其它的高密度脂蛋白结合蛋白

鼠SRB Ñ的同源蛋白质CLA -1, 在人的肾上腺、肝脏和睾丸细胞表面大量存在, 也可介导CE 的摄取。CLA -1也存在于单核细胞上, 可识别凋亡的胸腺细胞, 提示在处理损伤细胞中也具有一定作用[34]。CD36与SRB Ò与SRB Ñ同属CD36家族成员, 由于分别在胞外段及羧基端与SRB Ñ不同, 因此无法介导有效的CE 的摄取。Vigilin 是一种120kDa 的胞内蛋白质, 多肽链上含有核酸定位序列, 可与RNA 结合, 可能介导HDL 结合后的信号转导及影响RNA 的代谢。在斑块中胆固醇累积后的巨噬细胞中水平较高, 有关其在胆固醇外流中的意义仍不清楚[35]。Cubilin 是存在于肾小管近曲小管上皮细胞表面的分子量为460kDa 的蛋白质, 载脂蛋白A

3 清道夫受体B Ñ与高密度脂蛋白结合蛋白2之

间的异同点

SRB Ñ与HB 2都可特异性的结合HDL, 并参与到脂质代谢中, 异同点见表1.

CN 43-1262/R 中国动脉硬化杂志2002年第10卷第6期

Ñ可特异性识别并以高亲和力结合, 以内吞的形式重吸收入肾小管上皮细胞中, 经溶酶体降解。另外在卵黄囊上皮细胞及小肠上皮细胞中同样发现了Cubilin 。由于Cubilin 分子量过大, 还可与维生素B 12结合, 且载脂蛋白进入溶酶体降解, 因此不被认作是HDL 特异性受体。

总之, 由于HDL 受体及结合蛋白可影响动脉粥样硬化的发生、发展及消退等生物化学过程, 必将促使人们进一步研究受体上的活性位点以揭示具体的作用机制。一方面应该对现有受体蛋白中的位点进一步查明, 另一方面应该不断查找新的膜蛋白发现新的生理意义。[参考文献]

[1] Ac ton S, Ri gotti A, L andschulz K, e t al. Ide nti fic atio n o f sc avenge r rec eptor SRB Ñas a high densi ty l ipoprotei n rece ptor. Science , 1996, 271:518-520[2] Johnson MS, Sve nsson P A, Helo u K, e t al. Cha racte ri za t i on a nd c hromo som al

l ocali za tion of rat sca v e nger rece ptor cla ss B t ype Ñ, a hi gh de nsi ty lipo pro tein

re cepto r with a putati ve l eucine zippe r domai n and pero x i mal ta rg e ting sequence. Endocrinolo gy , 1998, 139(1) :72-80[3] Babitt J, Tri gatti B, Rigot ti A, et al. Muri ne SRB I , a hi gh densi ty lipo pro tein rec eptor t ha t medi ates sel ecti ve lipid upta ke i s N -glyco syla ted and fat ty acyl ated

a nd coloc alizes wit h plasma me mbrane ca veolae . J Biol Chem , 1997, 272(20) :13242-249[4] Rea ven E, Lua Y, No mot o A, et al. The se lecti ve pa thway and a high -densi ty li poprotei n rece ptor (SRB Ñ) i n o varian gra nul osa ce lls of the mouse. BBA , 1999, 1436:565-576

[5] Va rba n M, Rinni ng e r F, Wa ng N, et al. Ta rg e ted m utati on re veal s a ce ntral

role for SRB Ñin he pa tic se lecti ve upt ake o f hi gh densi ty lipoprot ein c holesterol. Proc Natl Acad Sci U SA , 1998, 95:4619-624[6] Carr B R, Parker CRJ, Mil ewic h L, e t al. The rol e of lo w densi ty, hig h dens-i ty, and very l o w densi ty lipoprote ins in steriodo genesi s by the human feta l adrenal gland. Endocri no logy , 1980, 106:1854-861[7] Illi ngworth DR, Ke nny TA, Or wol l ES. Adrenal f unc tion in hete rozy gous and homo zyg ous hypobetali poprotei ne mi a. J Cli n Endocrinol Metab , 1982, 54:27-33

[8] Ji Y, Ji an B, Wang N, et al. Scave ng e r rec eptor B Ñprom otes hi gh -density l -i

poprotei n -me di ated cell ul ar c holesterol eff lux. J Biol Chem , 1997, 272:20

982-985[9] Ste inberg D. A docking re cepto r f or HDL chol esterol e ste rs. Science , 1996, 271:460-461[10] Gu X, Triga tti B, Xu S, et al . The e ffici ent cel lular uptake of hi gh density l -i poprotein lipids v i a sc avenge r rece ptor cla ss B t ype Ñre qui res not o nl y recepto r -mediate d surface binding but al so recept or -spe cifi c li pi d transfer mediate d by it s e xtracel lular domai n. J Bio l Chem , 1998, 273:26338-348[11] Ma rgery A, Connell y , Se th M, e t al. Co mparison o f cl ass B scave nger rec ep -tor, CD36and scave nger re cepto r B Ñ(SRB Ñ) , sho ws that both rece pt ors m ed -i ate hi gh de nsit y l ipoprotei n -chol esteryl ester se lecti ve uptake but SRB Ñexhibit s

a unique enhancem ent of chol esteryl e ste r upta ke. J Biol Chem , 1999, 274(1) :41-47

[12] Rodri gue za W, Thuahnai S, Teme l R, e t al. Mechanism of scave ng e r rec eptor cl ass B t ype Ñme di ate d se lecti ve uptake of c holesteryl esters f ro m hi gh densi ty li poprotei n to adrenal cel ls. J Bio l C hem , 1999, 274:20344-350

[13] Ro thbe rg K, He user J, Donzell W, et a l. Caveoli n, a protei n c ompone nt of c aveol ae me mbrane c oats. Cel l , 1992, 68:673-682

[14] Gre gory A, P atric e M, De ne ys R, e t al. The c lass B, type Ñsc avenge r re -cepto r prom otes the se lecti ve uptake of hi gh densi ty lipopro tein c holesterol et he rs

i nto c aveol ae. J Biob Chem , 1999, 274:12043-048[15] Gu X, Karen K, Krie g e r M, et a l. Sca venger recept or c lass B, type Ñ-me d-i

3a ted [H]chole ste rol effl ux t o hi gh and l ow density l ipoprotei ns i s depe nde nt of li poprotein bi ndi ng to t he rece ptor. J Biol Chem , 1999, 274:29993-30001

[16] Margarit a de la, Geo rg e H, Marge ry A, et al. Sca venger re cepto r B Ñ(SRB

Ñ) media tes f re e chole ste rol flux independentl y of H DL tethe ri ng t o the cell sur -face. J Li p i d Res , 1999, 40:575-580

[17] Tozuka M, Fidge N H. Puri fic atio n and characte rizatio n of t wo hi gh de nsit y l -i

541

poprotei n bi ndi ng protei ns from rat and hu man li ver. J Biochem , 1989, 261:

239-244

[18] Fl ui ter K, Van der We sthuij zen DR, e t al. In vivo reg ul atio n of sc avenge r re -cept or B Ñand the selec tive upta ke of hi gh densi ty li po protein chol est ryl esters i n

rat live r parenchy mal and Kupffe r cel ls. J Bio l C hem , 1998, 273:8434-438[19] L andschulz KT, Pa thak RK, Rigot ti A, e t al . Regula t i on of sc avenge r recep -t or, c lass B, type Ñ, a hig h densi ty lipop ro tein recept or, in l ive r and ste roido -ge ni c ti ssues of the rat. J Clin In vest , 1996, 98:984-995

[20] Rigo tti A, Edelm an ER, Sei fert P, e t al. Re gulati ons by a dre nocortic otropic

horm one of the in vi vo expressi on o f sca venger recept or c lass B t ype Ñ(SRB Ñ) , a hi gh de nsit y li poprotei n recept or, in ste roi dogenic cel ls of the muri ne ad -re na l g l and. J Bi ol Chem , 1996, 271:33545-549

[21] Re aven E, Nomo to A, Te mel R, et al. Expressi on a nd mi crovi lla r loc alizati on

of sc avenge r recept or, class B, t ype Ñ(a hi gh de nsi ty lipo pro tein rece ptor) i n lutei ni zed and ho rmone -lesensi tized rat ova ri an model s. Endocri no logy , 1998, 139:2847-856

[22] Sun YU, Wang N, Alan R. Regula t i on of adrenal scave nger re cepto r-B Ñex -pressi on by AC TH and cel lular c hol esterol pool s. J Li p i d Res , 1999, 40:1

799-805

[23] Hi rano K, Yam ashi ta S, Naka gawa Y, et al. Expressi on of hu man scavenge r

recept or cl ass B type Ñi n c ul tured huma n monocy te -de ri ved mac rophages and

athe ro scle rotic le sio ns. Circ Res , 1999, 85:108-116[24] Arai T, Wa ng N, Bezouev ski M, et al . Decrea sed athe ro scle rosi s in hete rozy -gous lo w density li poprotei n rec eptor -defici ent mi ce expressi ng sca venge r rece ptor -BI t he t ra nsge ne. J Bio l C hem , 1999, 274:2366-371

[25] L ope z D, Sandhoff TW, Mclea n MP, et a l. Steroi dogenic fa ctor -1media tes

cycli c adenosi ne mo nopho sphate re gul ati on of HDL rece ptor. En docrinolo gy ,

1999, 140(7) :3034-044[26] Hi da ka H, Fi dge NH. Affi ni ty puri fica tion of the he patic high densi ty lipopro -tei n rece ptor i dentifi es t wo acidic gl y c oprotei ns a nd e nables further c ha ra cteriza -ti on of thei r binding propertie s. J Biochem , 1992, 284:161-167

[27] Matsumo to A, Mi tchel l A, Kurata H, e t al. Clo ni ng and c haracte ri za tion of

HB 2a candidate hi gh de nsit y li poprotei n rec eptor:sequence ho molo gy with me m -branes of t he i mm unoglobuli n supe rfami ly of me mbrane protei ns. J Bio l Chem , 1997, 272:16778-782

[28] Mat hai D, F idge NH, Tozuka M, et al. Si mv ast atin and chol est yrami oe treat -m ent reduces the level of expressi on of high densi ty li poprotei n bi ndi ng pro teins i n

rat live r. Arteriosclero sis , 1990, 10:1045-050[29] Kurata H, Ma tsumoto A, Fuji wara Y, et al . Effec t of si mva sta tin on t he ex -pressi on of HB 2(HDL bi ndi ng prote in) i n rabbit, Procee di ngs of the XIII Inter -nati onal Sympo siu m o n Drugs Affec ting Lipi d Met abolism. 1998; 26

[30] H i daka H , Hi daka E, Tozuka M, et a l. The i dentifi cati on of speci fic hi gh

densi ty lipop ro tein 3bi ndi ng site s on human bl ood monoc ytes using fl uore sce nc e -la be led l igand. J Lipid Res , 1999, 40:1131-139

[31] Bo we n M, Baj orath AJ, Siada k AW, e t al. The ami no -te rmi na l i m munoglo bu -li n -like do main of acti vate d le ukoc yte cel l adhe si on molec ul e bi nds speci fic all y t o

the me mbrane -proxim al sc avenge r rece ptor cystei ne -rich dom ain of CD6wit h a 1:1stoi chiom etry. J Biol Chem , 1996, 271:17390-396[32] Morri son JR, Mc Pherson GA, F idge NH. E v i dence f or t wo site s o n ra t live r plasma me mbranes whi ch inte ract with hi gh density lipop ro tein. J Biol Chem , 1992, 267:13205-209[33] Barba ra s R, Colle t X, Chap H, et al. Specifi c bi ndi ng of f re e apoli poprotei n

A -Ñto a hi gh -af finit y bi ndi ng sit e on HepG 2cel ls:characte rizatio n of t wo hi gh -densi ty lipoprotei n site s. Bio chemist ry , 1994, 33:2335-340[34] Murao K, Terpstra V, Gree n SR, et al. Cha rac terizati on of CL A -1, a hum an

hom ologue of rodent scave ng e r re cepto r BI, as a re cepto r fo r hi gh de nsit y lipopro -tei n and apoptoti c t hymoc ytes. J Biol Chem , 1997, 272:17551-557[35] Chiu DS, Ora m JF, LeB o e uf RC, et al. High -densi ty l ipoprotei n bi ndi ng pro -tei n (HB P) vi gili n is e xpre ssed in hum an atheroscle rotic l esi ons and coloc alizes wit h apoli poprotei n E. Art erio scler Throm b V asc Bio l , 1997, 17:2350-358[36] Yuki hi ro Takahashi, Jonathan DS. Chole ste rol effl ux t o a polipoprote in A Ñin -vol ved e ndoc ytosis a nd resecreti on a cal cium -dependent path wa y. Proc Natl

Aca d Sci USA , 1999, 96(20) :11358-363[37] Han J, Ni cholson AC, Z ho u XF. Oxidi zed lo w densi ty lipop ro tein de creases macropha g e e xpressi on of scave nger recept or B Ñ. J Biol Chem , 2001, 276(19) :16567-572

(此文编辑 文玉珊)