苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的形成及降解
ＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＢｕｌｌｅｔｉｎＶｏｌ．２３Ｎｏ．９２００７Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ
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苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的形成及降解
朱育菁，蓝江林，阮传清，刘芸，刘波
（福建省农业科学院生物技术研究所，福州３５０００３）
摘要研究苏云金芽孢杆菌【：研究目的】（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ）伴孢晶体的形成及降解，为其生物学特性的系统研究和活性成分分析提供理论基础将Ｂｔ菌株ＨＤ－１在牛肉膏蛋白胨固体培养【。方法】基上３０℃下培养２４ｈ，制成菌悬液后用日本电子ＪＥＭ１００－ＣＸ－ＩＩ透射电子显微镜观察伴孢晶体的形成。采用五种溶解方法降解Ｂｔ菌株ＨＤ－１和ＬＳＺ９４０８伴孢晶体后，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳【此。结果】研究的电镜观察表明ＢｔＨＤ－１在分裂过程中形成芽孢和晶体，晶体为大菱形。ＢｔＬＳＺ９４０８晶体含有
１３０和６５ｋＤａ的毒蛋白，ＨＤ－１晶体含有１３０、６５和２５ｋＤａ的毒蛋白。ＢｔＬＳＺ９４０８和ＨＤ－１伴【结论】
孢晶体都包含ＣｒｙＩ和ＣｒｙＩＩ蛋白质毒素。
关键词：苏云金芽孢杆菌；伴孢晶体；降解中图分类号：Ｑ９３４
文献标识码：Ａ
ＦｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＤｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆＣｒｙｓｔａｌｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ
ＺｈｕＹｕｊｉｎｇ，ＬａｎＪｉａｎｇｌｉｎ，ＲｕａｎＣｈｕａｎｑｉｎｇ，ＬｉｕＹｕｎ，ＬｉｕＢｏ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００３）
【ＯＢＪＥＣＴ】Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｃｒｙｓｔａｌｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ（Ｂｔ），ａｎｄ
ｓｕｐｐｌｙｔｈｅｏｒｅｔｉｃｓｂａｓｉｓｆｏｒｓｙｓｔｍｉｃｓｔｕｄｙｏｎｉｔｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｔｓａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏ－ｎｅｎｔ．【ＭＥＴＨＯＤ】ＢｔｓｔｒａｉｎＨＤ－１ｗａｓｃｕｌｔｕｒｅｄｏｎＮＡｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａｆｏｒ２４ｈｕｎｄｅｒ３０℃，ａｎｄｔｈｅｎｗａｓｍａｄｅｉｎｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎａｎｄｏｂｓｅｒｖｅｄｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｃｒｙｓｔａｌｗｉｔｈｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（ＪＥＭ１００－ＣＸ－ＩＩ）．ＦｉｖｅｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｃｏｍｐｏｓｅｔｈｅｃｒｙｓｔａｌｓｏｆＢｔＨＤ－１ａｎｄＢｔＬＳＺ９４０８，ａｆｔｅｒｔｈａｔＳＤＳ－ＰＡＧＥｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．【ＲＥＳＵＬＴＳ】ＢｔＨｄ－１ｆｏｒｍｅｄｓｐｏｒｅｓａｎｄｃｒｙｓｔａｌｓｄｕｒｉｎｇｓｐｌｉｔｐｒｏｃｅｓｓ，ａｎｄｔｈｅｓｈａｐｅｏｆｃｒｙｓｔａｌｗａｓｂｉｇｄｉａｍｏｎｄ．ＢｔＬＳＺ９４０８ｃｏｎｔａｉｎｅｄ１３０ａｎｄ６５ｋＤａｔｏｘｉｃｐｒｏ－ｔｅｉｎｓ，ｗｈｉｌｅＢｔＨＤ１ｈａｄ１３０，６５ａｎｄ２５ｋＤａｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ．【ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ】ＢｏｔｈｏｆｃｒｙｓｔａｌｓｏｆＢｔＬＳＺ９４０８ａｎｄＨＤ－１ｃｏｎｔａｉｎｅｄＣｒｙＩａｎｄＣｒｙＩＩｔｙｐｅｐｒｏｔｅｉｎｔｏｘｉｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｃｒｙｓｔａｌ，Ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，简称Ｂｔ）是一类包括许多亚种并对多种昆虫具有高毒力的产晶体芽孢杆菌［１］。自２０世纪初被发现以来，世界各国又相继从昆虫体内或土壤中分离出该种细菌，全世界收集保藏的Ｂｔ已达４万株，在害虫的防治中发挥了巨大的作用，是近年来发展最快、应用最广的微生物杀虫
剂［２］。中国地域辽阔、生态环境复杂多样，微生物资源极其丰富，ＢｔＬＳＺ９４０８（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｋｕｒｓｔａｋｉ）是福建省农科院生物技术研究所分离的、对多种鳞翅目具有高毒力的Ｂｔ菌株，有较大的应用潜力［３，４］。
Ｂｔ大多数菌株都能产生多种类型的晶体蛋白，不
同亚种甚至同一亚种不同菌株杀虫晶体蛋白的多肽成
基金项目：国家自然科学基金“新型生物杀虫剂ＢｔＡ的藕合技术及其杀虫效果的研究”（３０４７１１７５）；２００６年留学人员择优资助项目“新型生物杀虫剂
ＢｔＡ的藕合机理的研究”。
第一作者简介：朱育菁，女，１９７２年出生，福建省福州市人，副研究员，博士。从事植物病虫害生物防治研究。通信地址：３５０００３福州市五四路２４７号，
福建省农科院生物技术研究所。Ｔｅｌ：０５９１－８７８４８９３３，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｙｊｉｎｇｆｚ＠１６３．ｃｏｍ。
通讯作者：刘波，男，１９５７年出生，福建省惠安人，研究员，博士，从事植物病虫害生物防治研究。通信地址：３５０００３福建省福州市五四路２４７号。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｌａｅｐｔｂ＠１６３．ｃｏｍ。
收稿日期：２００７－０５－０９，修回日期：２００７－０６－０４。
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分都不同，杀虫蛋白晶体由多种蛋白多肽组成，这些蛋白多肽在不同类型杀虫蛋白中以不同方式结合而构建蛋白晶体［５］。ＣｒｙＩ、ＣｒｙＩＶＡ和ＣｒｙＩＶＢ蛋白的Ｃ端区域结构相似，富含半胱氨酸蛋白多肽之间通过二硫键能自我积聚，形成稳定晶体结构，这类伴胞晶体需要一个更严格的理化条件才能形成一个可溶和具有活性的杀虫蛋白结晶。ＣｒｙＩＩＩＡ蛋白由于其Ｃ端区域并不富含半胱氨酸，组成蛋白晶体的蛋白多肽之间并不是由二硫键相连而是盐桥作用构成伴胞晶体。７１ｋＤａ的ＣｒｙＩＩＡ蛋白、７２ｋＤａ的ＣｒｙＩＶＤ蛋白和２７ｋＤａ的ＣｙｔＡ蛋白晶体形成和稳定需要其它多种辅助蛋白（Ｐ１９，Ｐ２０，ｏｒｆ１，ｏｒｆ２）存在，表现出苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白晶体形成的多样性。由于杀虫晶体蛋白这些组成上的差异，其溶解性也是多种多样［６］。
笔者利用透射电镜观察了Ｂｔ标准菌株ＨＤ－１（Ｂ．并ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｋｕｒｓｔａｋｉ）的伴孢晶体形成过程，采用五种溶解方法对Ｂｔ菌株ＨＤ－１和ＬＳＺ９４０８伴孢晶体进行降解，并进行用胰蛋白酶进行激活，为Ｂｔ生物学特性的系统研究和活性成分分析提供理论基础。１材料与方法
地点１．１试验时间、
３０ｍｉｎ，离心前称重离心管重。芽孢的初分离。离心后称取沉淀物湿重，将沉淀（晶体和芽孢的混合物）重新悬浮在蒸馏水中，使成为每毫升含菌０．０７ｇ湿重的菌悬液。用快速混匀器振荡，此时液面上产生很多泡沫，泡沫里含有大量的芽孢和较少的晶体及营养体碎片。将泡沫取出，继续振荡，重复数次，直至泡沫减少为止。（２）液体双相分离：将上述去掉泡沫的悬浮液倒入分液体积漏斗中，然后加入１％硫酸钠水溶液与四氯化碳）比为（７：６：７）振荡１０ｍｉｎ，静置１０ｍｉｎ，此时有机相与水相分开。晶体与很少的芽孢进入上层水相。将油相由分８０００ｒｐｍ离心液漏斗下方流出，从漏斗上方倒出水相，３０ｍｉｎ，将沉淀用重蒸馏水洗一次再离心。将沉淀物称重、镜检，用水稀释至湿重为１０ｍｇ／ｍｌ的菌悬液。１．３．３伴孢晶体的降解方法（１）采用标准方法［８，９］降ＨＣｌ（ｐＨ解和激活伴孢晶体，即５０ｍｍｏｌ／ＬＮａ２ＣＯ３・９．５）含５％β－巯基乙醇处理伴胞晶体，３７℃温育１ｈ；用胰蛋白酶激活晶体蛋白（与晶体蛋白按１：５０混合），３７℃温育１ｈ。
（２）０．１ＮＮａ２ＣＯ３・ＨＣｌ含１％ＤＴＴ（ｐＨ９．５），３７℃温育１ｈ。
（３）１ＮＮａＯＨ（ｐＨ＝９．５），３０℃温育４ｈ。
（４）１ＮＮａＯＨ２％的β－巯基乙醇，４℃冰箱保存过夜。
（５）Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ＝９．５）含２％的ＤＴＴ，３７℃温育１ｈ，４℃保存过夜。
伴孢晶体用上述方法处理后，用１２０００ｒ／ｍｉｎ、４℃离心１０ｍｉｎ，取上清液备样。
１．３．４ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳参照分子克隆实验指南（萨姆
［１０］
２００２）进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，分子量标准为布鲁克，
试验于在２００６年在福建省农科院生物技术研究所进行。１．２试验材料
ＢｔＨＤ－１菌株由华中农业大学农业微生物学国家重点实验室孙明博士赠予。ＢｔＬＳＺ９４０８由福建省农科院生物技术研究所生物农药研究中心菌种室提供。培养基为牛肉膏蛋白胨固体培养基。１．３试验方法
１．３．１Ｂｔ伴孢晶体形成的电镜观察将ＢｔＨＤ－１在牛肉膏蛋白胨固体培养基上３０℃下培养２４ｈ，而后用少量无菌水冲洗菌苔，用接种环刮下，制成菌悬液保存于１．５ｍｌ离心管中。电镜观察在福建省农科院电镜室进行，采用日本电子ＪＥＭ１００－ＣＸ－ＩＩ透射电子显微镜（性能指标：点分辨率为０．０４ｎｍ；晶格分辨率为０．２ｎｍ；最大倍数为４５万）。
１．３．２伴孢晶体的提纯依据刘波等（２００５）的方法［７］（１）菌的培养和洗涤：将ＬＳＺ９４０８和ＨＤ－１菌接种在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养到芽孢、晶体游离，然后用０．８５％生理盐水将培养物洗下，５０００ｒ／ｍｉｎ离心
预混合蛋白标准Ｐ７７０２Ｖ（ＢｉｏＬａｂｓ），分离胶浓度为１０％，层积胶浓度为５％，考马斯亮蓝法染色。２结果与分析
２．１Ｂｔ晶体形成的电镜观察
培养２４ｈ的Ｂｔ菌株ＨＤ－１的透射电镜观察见图１。电镜观察表明：ＨＤ－１菌体为短杆状，细胞分裂时形成隔膜，隔膜的形成启动了芽孢和晶体的形成，隔膜中间向母细胞一端凸出形成脊，后隔膜两侧向端部移动，两边速度不一样，形成亚极型前芽孢，最后连接，前芽孢形成。芽孢形成于远离隔膜的一端，晶体形成在在隔膜的一端。芽孢和晶体在成熟后从细胞中脱离，晶体为
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正在分裂的
细胞，芽孢正在形成
分裂时形成的隔膜
三联体
二联体
正在分裂的细胞，形成隔膜，而后形成前芽孢。
对称分裂和不对称分裂
二联体和三联体
在细胞体内形成游离的芽孢
在细胞体内形成的完整的晶体
细胞体内正在形成的晶体和芽孢
细胞体内正在形成的晶体和芽孢
正在脱落的芽孢
细胞体内形成的成熟的晶体和芽孢
正在脱落芽孢的细胞脱落的芽孢
分裂后形成的子细胞
正在脱落的芽孢
正在分裂的细胞
芽孢衣
脱落的晶体
已脱落的芽孢和晶体芽孢一，芽孢外有一层纤维状的芽孢衣
芽孢二菱形的晶体
菱形的晶体一端带缺口的菱形晶体
图１培养２４ｈ的Ｂｔ菌株ＨＤ－１的透射电镜观察
菱形，芽孢椭圆形，外带有芽孢衣。２．２Ｂｔ伴孢晶体的降解和激活
采用液体双相分离法提纯ＢｔＨＤ－１和ＬＳＺ９４０８晶体，分别得湿重为１．１１ｇ和０．７ｇ的晶体，镜检观察纯
度在９０％以上，含有部分芽孢和菌体。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳试验结果见图２，ＢｔＬＳＺ９４０８和ＨＤ－１的晶体用标准方法降解后均出现明显条带，其它的处理未出现明显条带。ＢｔＬＳＺ９４０８有２条主要条带，分子量分别约
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图２Ｂｔ菌株晶体的降解与激活
为１３０和６５ｋＤａ，ＢｔＨＤ－１有３条主要的条带，分子量分别约为１３０、６５和２５ｋＤａ。用标准方法激活（降解１）后，ＢｔＬＳＺ９４０８的１３０ｋＤａ仍然存在，但含量减少，而６５ｋＤａ的条带变弱，但在１３０￣６５ｋＤａ之间出现约６条带；Ｂｔ菌株的１３０ｋＤａ的带变得非常弱，但保留着６５ｋＤａ的主要条带，２５ｋＤａ的带也变为弱带。３讨论与小结
苏云金芽孢杆菌产生的杀虫晶体蛋白可分为３种类型：１３０￣１４５ｋＤａ、６５￣７８ｋＤａ和２７ｋＤａ。不同的亚种或菌株，其伴孢晶体可由单一的蛋白质毒素组成，也可能由两个或多个不同大小级别的蛋白质毒素组成。对鳞翅目害虫有毒性的蛋白主要是前两种类型的蛋白［１１］。该研究的电镜观察表明Ｂｔ菌株ＨＤ－１在分裂过程中形成芽孢和晶体，晶体为大菱形。前期的预备试验还发现ＢｔＬＳＺ９４０８晶体形态多种，除有菱形晶体外，还带有不同大小的小方形的晶体。
大量的研究发现，有些Ｂｔ菌株能产生多分子量的复合蛋白。毒蛋白的分子量一般在１２５￣１３８ｋＤａ、６５￣７５ｋＤａ或２５￣２８ｋＤａ［６］。研究的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果表明，ＢｔＬＳＺ９４０８晶体含有１３０和６５ｋＤａ的毒蛋白，ＨＤ－１晶体含有１３０、６５和２５ｋＤａ的毒蛋白。采用５０ｍｍｏｌ／ＬＮａ２ＣＯ３・ＨＣｌ（ｐＨ９．５）含５％β－巯基乙醇处理伴胞晶体，ＢｔＬＳＺ９４０８的６５ｋＤａ蛋白溶解，而Ｂｔ菌株ＨＤ－１的１３０ｋＤａ蛋白溶解。其它的溶解处理和激活处理未出现条带，可能与电泳样品的浓度不足相关，需做进一步的试验。
Ｌｅｒｅｃｌｕｓ等（１９９３）［１２］将苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱分为５类：一类含ＣｒｙＩ和ＣｒｙＩＩ，分子量约为１３０￣１４０ｋＤａ和６７ｋＤａ；二类仅含
ＣｒｙＩ，分子量约为１３０￣１４０ｋＤａ，三类仅含ＣｒｙＩＩＩ，分子量约为６７ｋＤａ，四类则为ＣｒｙＩＶ，分子量为１３０，６７和２７ｋＤａ，另一类则仅含分子量约为４０￣４５ｋＤａ的杀虫晶体蛋白，各类都表现出不同的杀虫活性谱。并且ＣｒｙＩ蛋白一般在ｐＨ＝９．５条件下溶解，ＣｒｙＩＩ则要求ｐＨ约为１２才能完全溶解。研究结果表明ＢｔＬＳＺ９４０８和ＨＤ－１都包含ＣｒｙＩ和ＣｒｙＩＩ蛋白。ＢｔＨＤ－１的结果与张的相同，他们报道ＨＤ－１的晶体蛋白组宏宇等（２０００）成为ＣｒｙＩＡ（ａ）２８％，ＣｒｙＩＡ（ｂ）３９％，ＣｒｙＩＡ（ｃ）３３％，ＣｒｙＩ－ＣｒｙＩＩＢ［６］；但是却发现多了一条在２５ｋＤ左右的蛋ＩＡ，
白带。同时这两种菌株的ＣｒｙＩ蛋白都在ｐＨ＝９．５条件下溶解。
由于细胞产生的蛋白水解酶总是粘附于伴胞晶体，杀虫晶体蛋白在制样过程中往往产生不同程度的酶解，而并未完全准确反映多肽的实际分子量［８］。研究结果也发现除了主要条带外，还有其它非主要的条带产生，可能与酶解有关。
为了对苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白晶体的多肽组成有了一个更清晰，更准确的认识，目前常用的方法是对杀虫晶体蛋白基因的克隆，目前已被克隆和序列化的１１６个杀虫晶体蛋白基因表达的蛋白质产物，分子量从２７ｋＤａ到１４０ｋＤａ不等
［９］
。因此将进一步对这两种
Ｂｔ菌株的杀虫晶体蛋白基因的克隆。
参考文献
［１］
邵宗泽，郭延奎，喻子牛．苏云金芽孢杆菌工程菌伴孢晶体的形态发生［Ｊ］．微生物学报，２００２，４２（５）：５５５－５５９．［２］
ＡｇａｉｓｓｅＨ，ＬｅｒｅｃｌｕｓＤ．ＨｏｗｄｏｅｓＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｐｒｏｄｕｃｅｓｏｍｕｃｈｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌ，１９９５，１７７（２１）：６０２７－６０３２．
ＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＢｕｌｌｅｔｉｎＶｏｌ．２３Ｎｏ．９２００７Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ
・・２８６
［３］
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｓｂ．ｏｒｇ．ｃｎ
ＺｈｕＹＪ，ＳｅｎｇｏｎｃａＣ，ＬｉｕＢ．ＴｏｘｉｃｉｔｙｏｆｂｉｏｃｉｄｅＧＣＳＣ－ＢｔＡｏｎａｒｔｈｒｏｐｏｄｐｅｓｔｓｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｅｓｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００６，７９（２）：８９－９４．
［９］
体特性及其活性成分研究［Ｊ］．生物技术通报，２００２，（２）：３８－４１．李长友，张杰，宋福平，等．苏云金芽孢杆菌菌株Ｂ－Ｐｒ－８８的生物学特性［Ｊ］．植物保护学报，２００４，３１（１）：２１－２５．
［１０］萨姆布鲁克ＤＷ拉塞尔．分子克隆实验指南［Ｍ］．北京：科学出版
社，２００２：１７１５－１７１８．
［１１］鲁松清，喻子牛．苏云金芽孢杆菌ＣＴ－４３的芽胞萌发及芽胞和伴胞
晶体的形成［Ｊ］．华中农业大学学报，１９９５，１４（１）：６４－６８．
［１２］ＬｅｒｅｃｌｕｓＤ，Ｄｅｌｅｃｌｕｓｅ，ＬｅｃａｄｅｔＭＭ．ＤｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＢａｃｉｌｌｕｓ
ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｔｏｘｉｎａｎｄｇｅｎｅｓ．Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，ＡｎＥｎｖｉｒｏｎ－ｍｅｎｔａｌＢｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅ：ｔｈｅｏｒｙａｎｄｐｒａｃｔｉｃｅ［Ｍ］．ＥｄｉｔｅｄｂｙＥｎｔｗｉｓｔｌｅＰＦ，ＣｏｒｙＪＳ，ＢａｉｌｅｙＭＪａｎｄＨｏｇｇｓＳ，Ｌｏｎｄｏｎ：ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＬｔｄＰｒｅｓｓ．１９９３：３７－７０．
［４］ＺｈｕＹＪ，ＬｉｕＢ，ＳｅｎｇｏｎｃａＣ．ＥｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｗｉｔｈＡｂａｍｅｃｔｉｎｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｐｅｓｔｓａｎｄｔｈｅｉｒｎａｔｕｒａｌｅｎｅ－ｍｉｅｓ［Ｍ］．Ｇ! ｔｔｉｎｇｅｎ：ＣｕｖｉｌｌｉｅｒＶｅｒｌａｇＧ" ｔｔｉｎｇｅｎ，２００５：１－３．
［５］ＣｒｉｃｋｍｏｒｅＮ，ＺｅｉｇｌｅｒＤＲ，ＦｅｉｔｅｌｓｏｎＪ．ＲｅｖｉｓｉｏｎｏｆｔｈｅｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅｆｏｒｔｈｅＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｐｅｓｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉ－ｏｌｏｇｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｖｉｅｗｓ，１９９８，６２：８０７－８１３．
［６］张宏宇，邓望喜，喻子牛．苏云金芽胞杆菌的遗传多样性，ＩＩ．杀虫晶体蛋白及其基因型［Ｊ］．遗传，２０００，２２（２）：１２５－１２８．
［７］刘波，朱育菁，ＳｅｎｇｏｎｃａＣ．多位点生物杀虫毒素ＢｔＡ形成的ＨＰＬＣ分析［Ｊ］．中国农业科学，２００５，３８（１１）：２２４６－２２５３．
［８］张松鹏，杨建州，张洪勋．经高浓度味精废水驯化的Ｂ．ｔ．菌株伴胞晶
（责任编辑：李碧鹰）