安脑平冲汤对脑出血大鼠胃泌素\生长抑素表达的影响

　　安脑平冲汤对脑出血大鼠胃泌素、生长抑素表达的影响 　　周德生【sup】1【/sup】，朱婷【sup】1【/sup】，张熙【sup】2【/sup】，胡华【sup】1【/sup】，高晓峰【sup】1【/sup】，陈晖【sup】1【/sup】 　　（1.湖南中医药大学第一附属医院神经内科，湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学病理教研室，湖南 长沙 410007） 　　摘 要：目的：通过观察安脑平冲汤对大鼠脑出血后血清中胃泌素（gastrin）和生长抑素（Somatostatin）表达的影响，探讨安脑平冲汤对脑出血后引发急性胃粘膜病变的防治作用。方法：将120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安脑平冲汤组、雷尼替丁组。模型组、安脑平冲汤组、雷尼替丁组组内又分为24h、48h、3天、5天、7天共5个时间点，在脑立体定位仪下采用Ⅳ型胶原酶制备大鼠脑出血模型，观察大鼠脑出血后胃粘膜的病理变化，Elisa法检测血清中GAS、SS的表达。结果：与模型组比较，安脑平冲汤组和雷尼替丁组胃粘膜损伤程度降低（P＜0.05）；安脑平冲汤组、雷尼替丁组胃泌素水平较模型组均有明显下降（P＜0.05）；安脑平冲汤组生长抑素水平较模型组和雷尼替丁组均有明显升高（P＜0.05）。结论：安脑平冲汤可能通过抑制胃泌素的表达，促进生长抑素的表达而发挥减轻脑出血后急性胃粘膜损伤的作用。 　　关键词：脑出血；安脑平冲汤；急性胃粘膜病变；GASSS 　　中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2011）04-0795-04 　　Abstract:Objective:To study the effect of Annaopingchong Decoction on the expression of serum gastrin and somatostatin in intracerebral hemorrhage rat, To discussion preventive and therapeutic effects on Annaopingchong Decoction treatment acute gastric mucosal lesion in intracerebral hemorrhage rat.Method: 120 SD rats were randomly divided into 4 group:Sham-operated group，Model group, Treatment group with Annaopingchong Decoction, Ranitidine group. They were prepared at 24h, 48h, 3d, 5d and 7d, respectively after operation, The models were established by injecting collagenase type Ⅳ stereotaxicall. the pathological changes of gastric mucosal were observed on Intracerebral hemorrhage in rats, The expression of Serum GAS, SS were analyzed by Elisa.Results:Compared with model group,The degree of gastric mucosal injury was lower in Treatment group with Annaopingchong Decoction and Ranitidine group （P＜0.05） Compared with model group, The level of Gastrin was decreased in Annaopingchong Decoction group and Ranitidine group （P＜0.05）Compared with model group and Ranitidine group, The level of Somatostatin in Annaopingchong Decoction group was increased（P＜0.05）.Conclusion:Annaopingchong Decoction can affect the expression of gastrin and somatostatin, Reduce the acute gastric mucosal injury after cerebral hemorrhage. 　　Key words:Cerebral Hemorrhage Annaopingchong Decoction Acute gastric mucosal lesion Gastrin Somatostatin 　　急性胃黏膜病变是急性脑卒中的一个严重并发症，常与脑卒中的严重程度有关，脑卒中病情越危重，急性胃黏膜损伤出血发病率就越高，程度也越重，在临床处理上有一定困难，合并有消化道出血的患者预后亦差，病死率可达半数以上。胃黏膜攻击因子和保护因子失衡是急性胃黏膜病变发病的重要机制，许多临床研究表明在急性脑出血时生长抑素和胃泌素的表达与急性胃黏膜损伤有关。因此探讨脑出血后急性胃黏膜损伤的防治措施在临床上有重要意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　清洁级健康Sprague Dawley（SD）雄性大鼠，体重（200±20g），共120只。湖南中医药大学实验动物中心提供。每笼6只，大鼠饲养环境保持通风、恒温、安静，定期更换垫料，消毒笼具。 　　1.2 药物与试剂 　　安脑平冲汤（生龙骨30g，生牡蛎30g，怀牛膝15g，黑栀子12g，生大黄9g，黄芩12g，钩藤12g，青木香12g，泽泻12g，蝉蜕6g，柴胡6g，甘草6g），均购自湖南中医药大学附属一医院药剂科。水煎煮后浓缩成1.1g/mL，贮于冰箱备用。盐酸雷尼替丁胶囊：规格0.15 g／粒，由福建古田药业有限公司提供（批号：081202）。以生理盐水配制成混悬液（0.5 mg／mL）。Ⅳ型胶原酶（北京中杉金桥生物技术公司），大鼠血清胃泌素、生长抑素ELISA试剂盒（美国R&Dsystems Estradiol Elisa测定试剂盒）无水乙醇（安徽安特生物化学有限公司），苏木精―伊红染色液（上海化学试剂站）。 　　1.3 仪器 　　脑立体定位仪（淮北正华生物公司）,微量进样器（上海安亭微量进样器厂）,多管架自动平衡离心机（上海天创仪器制造公司）,LEICA DM LB【sub】2【/sub】型双目显微镜（德国LEICA公司产）,石蜡切片机（英国Shandon公司产）,Motic B【sub】5 【/sub】显微摄像系统（麦克奥迪实业集团公司）,Thermo Multiskan Spectrum spectrophotometer酶标仪。 　　1.4 方法 　　1.4.1 动物造模 按Rosenberg【sup】［1］【/sup】报道的方法造大鼠脑出血模型:大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.35mL/100g）麻醉后，俯卧位固定于立体定位仪上，局部剪毛，络合碘皮肤消毒，头皮正中切口，暴露颅骨，按包新民图谱定位【sup】［2］【/sup】取前囟为原点，前囟前0.2mm，中线右旁开3mm，深5.5mm为注射点（右侧尾状核），手术刀钻孔，用固定于立体定位仪上的微量进样器缓慢抽取含0.4U Ⅳ型胶原酶的灭菌生理盐水（0.2U/μL）2μL，校准后垂直进针，缓慢注射，留针5min后拔出针头，缝合皮肤，伤口局部以络合碘消毒、青霉素粉抗感染后，放回笼中饲养。假手术组以此方法注入等量灭菌生理盐水。

　　1.4.2 分组与处理 将120只SD大鼠按完全随机方法分为4组，组内再随机分成24h、48h、3天、5天、7天，每个时间点6只大鼠，术前禁食，安脑平冲汤组（安脑平冲汤以1.5mL/100g体重灌胃），假手术组与模型组（等体积的生理盐水灌胃），雷尼替丁组（雷尼替丁溶于等体积生理盐水灌胃），以上各组均以造模后给药直至处死为止，各组每天灌胃两次。 　　1.4.3 评分方法 神经功能缺损评分方法：根据Berderson【sup】［3］【/sup】等的评定方法分为四级。0级（0分）：未有神经缺失症状；1级（1分）：将大鼠尾巴提起，瘫痪侧前肢回收屈曲于腹下，正常侧前肢向地面伸展；2级（2分）：除1级体征外，向瘫痪侧推大鼠时阻力较对侧明显降低；3级（3分）：除以上体征外，大鼠向瘫痪侧旋转的行为。手术后2h对大鼠神经症状进行评定，神经症状达1、2、3级判断为模型成功。 　　胃组织损伤评分方法：对每张切片随机选取5个视野，每个视野按病变严重程度分级：0正常，1上皮细胞损伤和腺体破坏，2黏膜的出血性损伤和不超过黏膜下层的坏死，3超过黏膜下层的坏死和溃疡。5个视野得分累计为其组织学损伤积分【sup】［4］【/sup】。 　　1.4.4 大体标本观察 将各组实验大鼠分别于相应时间点内取出胃组织后处死，迅速开颅取出脑组织，观察胃黏膜情况及大鼠颅内血肿情况。 　　1.4.5 组织形态学观察 将各组实验大鼠分别于相应时间点内取出胃组织，观察胃黏膜情况，将胃组织置于10%中性甲醛液中固定，常规酒精梯度脱水，石蜡包埋，行6μm切片，HE染色后行胃组织损伤评分。 　　1.4.6 ELISA方法测定大鼠血清中GAS、SS的表达 各组实验大鼠分别于相应时间点内取动脉血5mL，离心分离血清，取大鼠血清100uL，使用大鼠血清ELISA试剂盒进行测定，测定过程严格按照试剂盒的说明进行操作。 　　1.4.7 统计学处理 计量资料以“平均值±标准差”（±s）表示。满足正态性和方差齐性，多组间比较采用单因素方差分析；方差不齐，采用非参数检验。各指标检测结果采用SPSS 16.0软件进行统计分析。 　　2 结 果 　　2.1 神经功能缺损评分 　　造模后假手术组未见神经功能缺损症状，模型组、安脑平冲汤组、雷尼替丁组大鼠均见不同程度的神经功能缺损症状，各组间神经功能缺损评分比较无显著性差异（P＞0.05）见表1。 　　表1 脑出血大鼠造模后神经功能缺损评分表 　　注：与模型组相比，#P＞0.05；与安脑平冲汤组相比，▲P＞0.05。 　　2.2 大体标本观察 　　2.2.1 脑出血大鼠颅内血肿情况 假手术组无出血，模型组、安脑平冲汤组和雷尼替丁组大鼠手术侧均出现血肿，在不同时间点的血肿大小有所不同，在3天、5天、7天时间点血肿可见不同程度的吸收。 　　2.2.2 脑出血大鼠胃组织大体标本观察 假手术组大鼠胃黏膜表面光滑，未见充血、出血及糜烂、溃疡。模型组胃黏膜明显充血、水肿，呈黯红色，部分可见多处糜烂和小溃疡；安脑平冲汤组胃黏膜充血、水肿较模型组明显减轻，色泽红润；雷尼替丁组胃黏膜颜色稍红润，色泽介于模型组与安脑平冲汤组之间。 　　2.3 脑出血大鼠胃组织病理组织学观察 　　HE染色显示假手术组未见胃组织损伤表现见图1；模型组黏膜上皮坏死脱落，腺体破坏，溃疡形成见图2；安脑平冲汤组部分腺上皮细胞轻度水肿，腺体排列欠整齐见图3；雷尼替丁组胃黏膜上皮细胞灶性坏死伴腺上皮细胞水肿见图4。 　　2.4 脑出血大鼠胃组织损伤评分情况 　　在24h时间点，模型组、安脑平冲汤组、雷尼替丁组均可见组织损伤，但损伤评分无显著性差异（P＞0.05）；在其余各个时间点，安脑平冲汤组与模型组相比，雷尼替丁组与模型组相比，损伤评分有所下降，差异有显著性意义（P＜0.05）见表2。 　　2.5 脑出血大鼠血清中GAS的表达 　　假手术组胃泌素无明显变化，模型组胃泌素含量明显升高，以72h为高峰，有显著性差异（P＞0.05），24h时间点，雷尼替丁组、安脑平冲汤组GAS水平与模型组相比均有所下降，雷尼替丁组与模型组差异有显著性意义（P＜0.05），安脑平冲汤与模型组差异无显著性意义（P＞0.05）；其余各时间点安脑平冲汤组、雷尼替丁组与模型组相比，胃泌素含量下降显著，差异有显著性意义（P＜0.05）见表3。 　　2.6 脑出血大鼠血清中SS的表达 　　在48h、72h、5天、7天各个时间点安脑平冲汤与模型组、雷尼替丁组相比，生长抑素水平均有所升高，差异有显著性意义（P＜0.05）；雷尼替丁组与模型组相比，差异无显著性意义（P＞0.05）；雷尼替丁组与安脑平冲汤相比，差异有显著性意义（P＜0.05）见表4。 　　3 讨 论 　　现代医学认为SS对胃肠道消化吸收及其他内分泌细胞起普遍性抑制作用。具有抑制胃酸、胃蛋白酶和胃泌素的分泌，刺激黏膜分泌，黏膜细胞蛋白质合成，抑制肥大细胞脱颗粒，保护胃黏膜屏障的作用【sup】［5］【/sup】，并有助于胃肠道黏膜微循环改善及黏膜修复【sup】［6］【/sup】；GAS有刺激胃酸分泌，促进胃肠黏膜增生，促使胃蛋白促胰液素、胰液、胆汁中水和盐等分泌的作用【sup】［7］【/sup】。脑出血后下丘脑或垂体的直接或间接损坏，导致机体交感神经兴奋，儿茶酚胺水平增高，消化道血管平滑肌收缩，胃壁血流量减少，刺激胃壁G细胞分泌胃泌素，胃酸分泌增高，H【sup】+【/sup】反弥散，最后导致胃黏膜的糜烂【sup】［8］【/sup】；加之机体处于应激状态，内分泌改变，生长抑素对胃泌素调节发生紊乱【sup】【/sup】［9-10］。因此脑出血并发急性胃黏膜病变较常见。 　　表2 胃组织损伤评分 　　注:与模型组相比,△P＜0.05，#P＞0.05与安脑平冲汤组相比,▲P＞0.05。 　　表3 脑出血大鼠胃泌素含量（ng/L） 　　注:与假手术组相比, *P＜0.05与模型组相比,△P＜0.05，#P＞0.05与安脑平冲汤组相比,▲P＞0.05。 　　表4 脑出血大鼠生长抑素含量（μg/L） 　　注:与假手术组相比, *P＜0.05与模型组相比,△P＜0.05，#P＞0.05与安脑平冲汤组相比,※P＜0.05，▲P＞0.05。 脑出血中医为出血中风，脏腑功能失调，气血逆乱,是中风病基本病机，尤其与肝、脾、冲脉密切相关。脑出血后急性胃黏膜病变为中风后变症，在中医属“胃脘痛”、“吐血”、“呕血”等范畴。叶天士《临证指南医案》云：“肝为起病之源，胃为传病之所”，指出肝失疏泄，肝气横逆犯脾，肝胃不和，气机紊乱则发病。故脑出血者并发急性胃黏膜病变的病因多为肝阳上亢，肝火横逆，乘犯阳明燥金之地，络破肉腐为疡而发病。《血证论》云:“以冲脉丽于阳明。冲气逆，则阳明之气，随逆故也。”冲气上冲，胃腑之气亦失其息息下行之常，或亦转而上逆，而出现胃脘痛、呕血等气逆诸症【sup】［11］【/sup】。安脑平冲汤功能镇肝熄风、平冲降逆、宁血安脑。方中怀牛膝、生龙骨、生牡蛎潜降冲脉为君药，生大黄通降阳明，黑栀子、泽泻清利三焦，血海宁静，神府得安，更佐以黄芩、蝉蜕、青木香清肃肺气，钩藤、柴胡清疏肝气，甘草调和阴阳，师气机升降得复。另外，生龙骨、生牡蛎制酸护膜，生大黄、黑栀子、黄芩、青木香清胃凉血止血，怀牛膝、生大黄、蝉蜕并能活血化瘀止血，早期灌胃对消化道黏膜屏障功能起积极保护作用。故能达到降逆制酸、止血、促进溃疡愈合目的。本实验结果显示，安脑平冲汤组大鼠胃组织损伤评分较模型组减低，血清GAS和SS的表达在48h、72h、5天、7天时间点与模型组相比，差异均有统计学意义，表明安脑平冲汤可以降低脑出血大鼠GAS的水平，促进SS的表达，对胃黏膜的损伤有一定的抑制作用，这一作用可能是通过下调GAS的表达和促进SS的表达两个方面来实现的。本研究为安脑平冲汤临床治疗脑出血并发急性胃黏膜病变提供了理论依据。 　　参考文献 　　［1］ Rosenberg GB.Collgenose-induced intracerebral hemorrhage in rat［J］.Stroke,1990,21:801. 　　［2］ 包新民,斯舒云.大鼠脑立体定位图谱［M］.北京：人民卫生出版社,1991: 26-27. 　　［3］ Bederson JB,Pitts LH,Tsuji M,et al.Rat middle cerebral artery occlusion:evaluation of the model and development of a neurologic examination［J］.Stroke,1986,17（3）:472-476. 　　［4］ 刘业成,齐志伟,马遂，等.急性缺血性脑卒中时胃黏膜细胞凋亡和胃屏障损伤的关系［J］.中国医学科学院学报,2008,3（2）:149-151. 　　［5］ 尹常高,李洪利,张伟栋.生长抑素及其受体与消化道疾病的研究［J］.医学综述,2006,12（24）:1485-1487. 　　［6］ 骆泽宇.生长抑素在消化系统疾病治疗中的临床应用［J］.现代中西医结合杂志,2007,16（25）:3755-3757. 　　［7］ 徐俊,宋于刚,桑显富，等.大鼠应激性溃疡自愈过程中胃泌素、生长抑素的变化［J］.中国血液流变学杂志,2005,15（2）:204-207. 　　［8］ 陈轩,任海军,高俊玮，等.GAS、SS在重型颅脑损伤合并急性胃黏膜病变中的动态变化［J］.中华神经外科疾病研究杂志,2008,7（4）:343-345. 　　［9］ 白玉海,曹丽华,曹淑梅，等.急性脑血管病并发应激性溃疡的临床观察［J］.医学信息,2005,18（10）:1362-1364. 　　［10］ 解立俊,屠伟峰.颅脑损伤后应激性胃黏膜病变的病理生理机制研究进展［J］.实用医学杂志,2007,23（26）:920-922. 　　［11］ 韩红.解析冲脉的特殊生理及临床意义［J］.辽宁中医杂志,2006,33（4）:477-478.