链球菌和葡萄球菌分离鉴定
青岛农业大学
兽医微生物学课程论文
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学 号:任课教师:
链球菌和葡萄球菌分离鉴定 动物科技学院 马业科学1201 2012 温建新
二0一四 年 四 月 十二 日
链球菌和葡萄球菌分离鉴定
班 2012
指导教师 温建新
摘要:为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌,我们将用过氧化氢试验,甘露醇试验,凝固酶试
验等方法进行鉴别,并根据他们的不同性质出现不同的结果,得出菌的种类。
关键词:葡萄球菌;链球菌
引言:葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】,因常常堆聚成葡萄串状而得名。多数葡萄球菌为非致病菌,少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌。白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形,常葡萄状排列,革兰氏染色阳性,无鞭毛,无荚膜,不产生芽胞,呈球形或稍呈椭
圆形,直径1.0um 左右,排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛,不能运动。无芽胞,除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色,其衰老、死亡或被白细胞吞噬后,以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高,在普通培养基上生长良好,在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳,需
氧或兼性厌氧,少数专性厌氧【2】., 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖,产酸不产生气。致
病性菌株能分解甘露醇.
链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】,属于厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿
一个轴,所以通常成对或者链状的。因为这些特征,他们被称作“链球菌” . 球形或卵圆形,直径0.6~
1.0um ,多数呈链状排列,短者4~8个细菌组成,长者有20~30个细菌组成。链的长短与菌种及生长
环境有关,在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜,如延长培养时间,荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。无芽胞,无鞭毛,有菌
毛样结构,含M 蛋白,革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类,产酸不产气, 需氧或兼性厌氧,有些为厌
氧菌。营养要求较高。【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成
灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm 的细小菌落,不同菌株有不同溶血现象。
肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环【3】。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1待鉴定菌A.B 各一,健康兔。
1.1.2 试剂及其配制1:5兔血浆,革兰氏染色液,百分之三的过氧化氢溶液
1.1.3 器材:普通营养琼脂平板,血琼脂平板,甘露醇微量发酵管。无菌注射器,碘酒棉,酒精棉,无菌离心管,无菌平皿,离心机,接种环,小试管,载玻片。
1.2方法
1.2.1 划线分离,由接种环以无菌操作分别沾取少许待分离的材料A ,B. 。在无菌平板表面进行平行划线、,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来。如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落。分别取待测A ,B 菌于普通培养基划线培养和血琼脂培养基。置于37摄氏度培养18至24小时。 1.2.2 血平板制作取营养琼脂(PH7.6),加热使其溶解待冷至45-50℃,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加兔血5-10毫升, 轻轻摇匀,立即倾注于平板或分装试管,制成斜面备用
1.2.3兔心脏取血法和大、小鼠心脏取血法类似,且比较容易掌握。将兔固定在手术台上,用碘酒酒精消毒皮肤,选择心搏最明显处穿刺,针头刺入心脏后即有血液涌入注射器。取得所需血量后,迅速将针头拔出,这样心肌上的穿孔易于闭合。经6~7天后,可以重复进行心脏采血。
1.2.4 生化鉴定:分别取待测菌A ,B 。取2毫升百分之三的过氧化氢溶液,加入干净的小试管中,用细玻璃棒蘸取试验菌,插入过氧化氢液面下,发现B 有气泡产生,为葡萄球菌,A 为链球菌。
1.2.5形态鉴定:进行革兰氏染色。
1.2.6凝固酶试验:挑取细菌菌苔,混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆,同时用已知阳性菌株作对照,置37摄氏度培养2至4小时,观察结果,凝固者B 为阳性。
1.2.7甘露醇发酵实验:将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中,置37摄氏度培养24小时,观察情况。
2 结果与分析
2.1普通琼脂是直径1到2毫米的白色或米色略微凸起的光滑球面,菌落呈圆形,湿润,不透明,边缘齐整。血液琼脂平板:多数病菌株形成明显的溶血。但链球菌比葡萄球菌的效果明显。
2.2过氧化氢酶试验若有气泡产生,B 则为葡萄球菌,A 否则为链球菌。
2.3凝固酶试验:挑取细菌菌苔,混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆,同时用已知阳性菌株作对照,置37摄氏度培养2至4小时,观察结果,凝固者为阳性。
2.4甘露醇发酵实验:将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中,置37摄氏度培养24小时,观察情况。
3.1 结果讨论
经试验结果鉴定A 为链球菌,B 为金黄色葡萄球菌。 3.2操作的过程中可能出现的问题:触媒实验 ①3%H2O2溶液要新鲜配制。 ②不宜用血琼脂平板上生长的菌落,因红细胞含有触酶,可致假阳性反应。
③取对数生长期的细菌。
4 结论:A 为链球菌,B 为金黄色葡萄球菌。
参考文献:
【1】李一经,兽医微生物学,2011年1月第一版。 【2】陆承平,兽医微生物学第四版。
【3】兽医微生物学(原书第2版)