茶叶中茶多酚含量测定工作方案
茶叶中茶多酚含量测定工作方案
一、 紫外分光光度法
1. 实验原理
在一定PH 条件下，酒石酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫色络合物，该络合物在540nm 波长下具有最大吸光度。。用分光光度法测定其含量
2. 仪器试剂
A. 酒石酸亚铁溶液:称取1.0g 硫酸亚铁(FeSO 4∙7H 2O ) 和5.0 g 酒石酸钾钠
(C 14H 14O 6KNa ∙4H 2O ) ，用水溶解并定容至1L （低温保存有效期10天) 。 B. PH=7.5 磷酸盐缓冲液
1/15mol/L磷酸氢二钠:称取23.9 g 十二水磷酸氢二钠(Na 2HPO 4∙12H 2O ) ，加水溶解后定容至IL 。
1/15 mol/L磷酸二氢钾:称取经110℃烘干2h 的磷酸二氢钾(KH 2PO 4)9.08 g, 加水溶解后定容至1L 。
取上述 1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液85mL 和1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液15mL 混合均匀。
3. 工作步骤
1) 试样的制备与测定：
称取磨碎茶叶试样0.1g(准确至0.0001g) ，置于小烧杯中，加温水30mL ，溶解冷却，注入100mL 容量瓶中，定容、摇匀、过滤，弃去初滤液约20mL ，剩余的滤液为试液【1】。
取试液【1】 2mL于50mL 比色管中，加酒石酸铁10mL 摇匀，用PH=7.5的磷酸盐缓冲液定容。
取2mL 蒸馏水于50mL 比色管中，加酒石酸铁10mL 摇匀，用PH=7.5的磷酸盐缓冲液定容作为空白对照，于540nm 处用1cm 比色皿测定吸光度值。
2) 标准系列溶液的配制与测定： 称取茶多酚纯品0.2500g ，加水溶解定容至250mL ，混匀，即为每毫升含1mg 茶多酚
的标准溶液。
分别称取标准溶液0.0mL 、1.0mL 、2.0mL 、3.0mL 、4.0mL 于一组50mL 比色管中，各加水至10mL ，再加酒石酸铁溶液10mL ，用PH=7.5的缓冲液定容至刻度，混匀后用1cm 比色皿，以试剂空白作参比，于波长540nm 处测定吸光度，绘制出标准曲线。
4. 数据计算
茶叶中茶多酚的含量以干态质量分数表示，按下式计算：
L 1A ⨯1. 957⨯2⨯⨯100
1000L 2⨯M 0⨯m 茶多酚 ( % ) = 式中：L 1——试液的总量,mL
L 2——测定时的用液量,mL
M 0——试样的质量，g m ——试样干物质含量，%;
A ——试样的吸光度
二、 高锰酸钾直接滴定法
1. 工作原理
茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1ml0.318g/ml的高锰酸钾相当于5.82mg 茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
2. 仪器试剂
1) 仪器
分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500ml 白瓷皿。
2) 试剂
A. 0.1%靛红溶液：
称取靛红1g 加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50ml ，冷却后用蒸馏水定容至1000ml ，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称
取靛红1g ，加浓硫酸50ml ，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000ml ，过滤后贮于棕色瓶中。
B. 0.630%草酸溶液：
准确称取草酸6.3034g ，用蒸馏水溶解后定容至1000ml 。
C. 高锰酸钾标准溶液：
称取AR 的高锰酸钾1.27g ，用蒸馏水溶解后定容至1000ml 。准确吸取0.630%草酸溶液10ml ，放入250ml 锥形瓶中（平行2份），加入蒸馏水50ml ，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10ml ，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边颠边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。按下式计算高锰酸钾溶液
100.63
的浓度：ω（kMnO4浓度，%）= kMnO4
3. 工作步骤
1) 供测试液的准备：
准备称取茶叶磨碎样品1g ，放在200ml 三角烧瓶中，加入沸蒸馏水80ml ，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100ml 容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100ml ，摇匀。 2) 测定：
取200ml 蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5ml ，再加入供测试液5ml ，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。同时做空白测定。
4. 结果计算
X=
(A -B ) ⨯w ⨯0. 00582/0. 318
m ⨯V 1/V 2
X —茶多酚的含量，%
B —空白消耗的高锰酸钾毫升数，ml A —样品消耗的高锰酸钾毫升数，ml ω--高锰酸钾的浓度，% m —样品的质量g
V1—测定用供测试液的体积，ml V2--供测试液的体积，ml