植物DNA的粗提取与鉴定报告

植物DNA的粗提取与鉴定

实验摘要：对香蕉的果肉组织进行DNA的粗提取，并用二苯胺﹝沸水浴﹞进行DNA鉴定。

实验原理：1.洗涤剂可溶解植物细胞膜

2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度曲线呈U字形。

3.细胞中的某些蛋白质溶于酒精，而DNA不溶。

4. DNA分子在低温下更易凝结。

5.在沸水条件下，DNA遇二苯胺会被染成染色。

6.离心机可使悬浊液中的颗粒沉淀下来﹝详见附录﹞ 实验器材：

玻璃棒、烧杯、滤纸、试管、试管夹、电磁炉、离心机、NaCl、二苯胺试剂、洗涤剂、香蕉等

实验步骤：

1. 取50克左右的去皮香蕉，放入研磨钵中研磨，同时加入一定量的氯化

钠与洗涤剂，尽可能的充分研磨，使更多的DNA从植物细胞中释放出来，但动作要轻缓，否则会产生大量泡沫，不利于后续操作。

研磨好后，过滤并收集研磨液，在研磨液中加入氯化钠，使氯化钠溶液物质的量浓度为2mol/L,过滤除去不可溶杂质。再调节氯化钠溶液物质的量浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质，再用物质的量浓度为2mol/L的氯化钠溶液溶解DNA。

加入与DNA溶液体积相等的、冷却的酒精溶液﹝体积分数为百分之九十五﹞，静置2到3分钟，溶液会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物﹝玻璃棒带负电，易吸附DNA﹞，并用滤纸吸去上面水分，注意搅拌动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

取两支20ml试管，各加入物质量浓度为2mol/L的氯化钠溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将两支试管放入沸水中加热5分钟，待两支试管冷却后，比较试管颜色的变化，看看溶有DNA的溶液是否变蓝。 2. 3. 4.

实验过程摘要：

1. 在研磨时发现，用研磨钵难以将香蕉研磨充分，估计是水分较多导致的。后用榨汁机进行该部分实验，效果好很多，没有较大的固体。并意外的发现剧烈的搅拌并没有产生大量泡沫。

2. 进行过滤时，所得到的研磨液非常少，担心DNA没有完全溶到研磨液中，所以往滤渣加一定量的2mol/L氯化钠溶液，用玻璃棒搅拌，再过滤一次。第二次过滤时，产生了大量的气泡。后来发现原来是第二次水分较多，使滤液直接通过滤纸底部尖端滴下，在经过漏斗下端细长部分时产生气泡。

3.

4.

5.

6. 让滤液沿漏斗壁流下时则不再产生气泡。 在将滤液的氯化钠量浓度稀释到0.14mol/L的过程中，并未发现任何絮状物，整个溶液非常澄清。一度以为实验失败，难以进行。后询问老师，老师认为有可能是因为植物DNA的提取物片段较小，加之本身DNA含量不多，故看不见。可试下离心实验。 于是将滤液上层的泡沫去掉，取清液分别加入12支离心管中，放入离心机进行试验。经过一段时间后，取出观察，仍未发现絮状物。我们认为可能是离心时间过短，转速不够。便再次放入，第二次在老师的指点下，振荡离心管，终于发现小段白色絮状物，每支离心管都有。 我们用滤纸进行过滤，发现过滤速度非常慢，加之由于时间关系，便直接将一支白色絮状物含量较多的离心液倒入一支试管中，加入4ml的二苯胺试剂，取另一支加入同离心液等量的2mol/L的氯化钠溶液，同样加入4ml的二苯胺试剂作对照。再放入沸水中加热。 遗憾的是，当时已打上课铃，实验还未做完，刘越老师说加热部分可统一交给实验老师进行。当第三节下课后来到实验室，发现还未加热。第二天早上再去时发现试管已被倒掉。故实验结果不得而知。

实验结果：

成功提取了白色絮状物，但二苯胺鉴定结果未知。

实验总结：

1. 总的来说，实验还是比较有意义的，虽然未完成DNA鉴定实验，但已提取出白色絮状物，并尝试着使用离心机。整个实验过程有很多问题，我们学会了独立地解决一部分问题，当然有一些问题仍需请教老师。

2. 一些难以观察到，难以测量的量可通过一些易观测的现象表达。如；在确定氯化钠的量浓度已调节到0.14mol/L，是通过溶液无新的絮状物生成得出的。

3. 实验设计的一些步骤在未进行实施，不清楚效果，在效果不好时应及时改进。如在用研磨钵研磨时，效果很不好，当时以为是研磨的时间不够，到后面才改用榨汁机，而刚好此时别的组在用榨汁机，这样浪费了很多时间。

4. 做实验前，或者是说设计实验前应去查阅资料。仅以靠课本，且课本还未对此实验进行专门的介绍是远远不够的。如果现在再让我重新设计一次实验，我会改进许多步骤，如；

1. 选取材料时会用DNA含量更高的菜花进行实验。

2. 在实验前，可先将香蕉冷冻24小时。冷冻过后，在研磨时，植物细胞更易破裂，便提取DNA。

3. 植物DNA片段比动物的细碎的原因是植物细胞的细胞质含有DNA酶，这种酶可分解DNA。有以下几种方法可以抑制该酶的活性﹝1﹞可加入EDTA﹝乙二胺四乙酸二钠﹞ ﹝2﹞可在低温下进行操作 ﹝3﹞可调整pH，使其大小约为8.0，呈偏碱性。方法1可能不太能够实现，但方法2,3还是可行的。

这些措施都可以提高实验的成功率，与此同时查资料后，面对实验意外的

状况时，不会太茫然、不知所措。这样可以节省很多时间，实验后面部分就不会太紧张，导致一些步骤都直接省略了﹝如离心后，本可利用冷却的

酒精溶液进行进一步提纯，这是提取的白色絮状物较少的很重要的一个原因﹞

附；

离心机原理

当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时，由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐

渐下沉。粒子越重，下沉越快，反之密度比液体小的粒子就会上浮。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关，并且又与重力场的强度及液体的粘度有关。象红血球大小的颗粒，直径为数微米，就可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。

参考资料 视频资料 文献资料