黄芪化学质量标准的初步研究_杜旻
第23卷 第10期ChineseTraditionalPatentMedicineVol.23 No.10
[化学分析]
黄芪化学质量标准的初步研究
杜
, 吴晓俊, 刘 涤, 胡之璧
(上海中医药大学中药研究所,上海200032)
关键词:黄芪;质量标准;皂苷;黄酮;HPLC-ELS;RP-HPLC
摘要:目的:通过比较中国药典规定的2种黄芪药材中皂苷类、黄酮类和多糖类物质的含量,确定了黄芪化学质量标准的评价指标。方法:HPLC-ELS法测定黄芪甲苷的含量,RP-HPLC法测定10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷的含量,硫酸-苯酚法测定黄芪总多糖的含量。结果:蒙古黄芪的黄芪甲苷、总黄酮、10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷、总多糖的含量分别是0.710±0.030mg/g,45±4.243mg/g,19.955±0.813μg/g,73.310±0.962mg/g,膜荚黄芪的黄芪甲苷、总黄酮、10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷、总多糖的含量分别为1.186±0.024mg/g、46±1.414mg/g、84.640±3.069μg/g、48.800±1.245mg/g。结论:本法具有一定的实用性,并对中药材化学质量标准的研究提出了一种新的思路。
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2001)10-0745-03
StudyonChemicalQualityStandardofRadixAstragali
DUMin, WUXiao-jun, LIUDi, HUZhi-bi
(InstituteofChineseMateriaMedica,ShanghaiuniversityofTCM,Shanghai200032,China)
Keywords:RadixAstragali;qualitystandard;saponin;flavonoid;HPLC-ELS;RP-HPLC
Abstract:Objective:ToestablishtheevaluationofthechemialqualitystandardofRadixAstragaliaccordingtotheircontentsofsaponin,flavonoidandpolyscaccharide.Methods:HPLC-ELSwasusedtodetermineastragalo-sideⅣcontent.RP-HPLCwasusedtodetermine10-hydroxy-3,9-dimethoxypterocarpancontent.Sulfuricacid-phenolmethodwasusedtodeterminetotalpolysaccharidecontent.Results:AstragalosideⅣ,totalflavonoid,10-hydroxy-3,9-dimethoxypterocarpanandtotalpolysaccharidecontentofAstragalusmongmolicusFisch.were0.710±0.030mg/g,45±4.243mg/g,19.955±0.813μg/g,73.310±0.962mg/g,respectively;Astragalo-sideⅣ,totalflavonoid,10-hydroxy-3,9-dimethoxypeterocarpanandtotalpolysaccharidecontentofAstragalusmembranacensFisch.were1.186±0.024mg/g,46±1.414mg/g,84.640±3.069μg/g,48.800±1.245mg/g,respectively.Conclusion:Themethodwaspracticalandprovidedanewideatostudythechemicalquality
standardoftraditionalChinesedrug.
黄芪(RadixAstragali)为常用补气药,始载于《神农本草经》,是我国重要的传统药材,每年需求量约600万公斤[1]。黄芪的化学成分众多,主要含有
[2][3][4]
皂苷类,黄酮类,多糖类,以及氨基酸类等。研究证实,黄芪皂苷Ⅳ(黄芪甲苷)是心脏正性肌力作用的主要有效成分[5],也是降压有效成分之一[6];黄芪总黄酮具有清除超氧阴离子自由基-(O2·)或H2O2作用,从而抑制膜脂质过氧化[7];黄芪多糖静注不仅使大鼠心率明显减慢,还可显著对抗垂体后叶素引起的心电图ST-T改变,对急性心
收稿日期:2001-01-18
作者简介:杜(1973～),女,江苏省南京市人,助理研究员,理学硕士,主要从事中药生物技术与中药质量标准化的研究。电话:021-54232308.
肌缺血有保护作用[8]。由此可见,黄芪中的不同化
学成分具有不同的药理活性,仅以黄芪甲苷的含量作为质量标准的唯一指标,并不能完全反映黄芪的质量。因此,我们选择了2种中国药典[9]规定的黄芪药材:蒙古黄芪(AstragalusmongnolicusFisch.)和膜荚黄芪(AstragalusmembranacensFisch.)进行皂苷类、黄酮类与多糖类含量的测定,探讨评价黄芪质量的综合性指标。1 皂苷类物质的测定1.1 仪器与试药
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1.1.1 仪器HP1100液相色谱仪;HP化学工作站(美国惠普);PL-ELS1000蒸发光散射检测器(Poly-merLaboratories)。
1.1.2 试药 对照品黄芪甲苷购自中国药品生物制品检定所;蒙古黄芪由内蒙瑞安生态基地提供,膜荚黄芪购自上海市药材公司,由上海市中药质量监督检验室鉴定;乙腈为色谱纯;甲醇、正丁醇为分析纯;水为重蒸去离子水。1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件 色谱柱:InertsilODS-3(4.6×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(35∶65);流速:1.0mL/min;柱温:室温;ELS参数为蒸发温度:100°C,雾化温度:80°C,出口温度:60°C;载气流速:
1.5mL/min。
1.2.2 标准曲线的绘制 精密称取黄芪甲苷对照品1.86mg,用甲醇溶解并定容至2mL,0.45μm微
孔滤膜过滤。依次吸取滤液5,10,15,20,25μL分别按上述色谱条件进行分析,测定峰面积。以对照品含量(μg)为横坐标(X),对照品峰面积(A)为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得回归方程,相关系数及线性范围分别为:Y=1.706X+2.778,r=0.9999,4.582μg～22.913μg。
1.2.3 样品溶液的提取与制备、精密度实验、稳定性实验、重复性实验和回收率实验详见文献[10]。1.2.4 供试样品测定 测定蒙古黄芪与膜荚黄芪甲苷的含量,结果见表1,色谱图见图1
。
A标准品HPLC
图
B样品HPLC图
Fig.1 ContentofAstragalosideⅣinRadixAstragali
Tab1 ContentofAstragalosideⅣ,totalflavonoid,10-hy-droxy-3,9-dimethoxypeterocarpanandtotalpolysaccharideinAstragalusmongnolicusandAstragalusmembranacens
Sample
AstragalosideⅣ(mg/g)Totalflavonoid(mg/g)
10-hydroxy-3,9-dime-N333
Astragalusmongnolicus0.710±0.03045±4.243
Astragalusmembranacens1.186±0.02446±1.414
250mm,5μm);流动相:甲醇-水(2∶1);检测波长:
280nm;流速:0.8mL/min;柱温:室温。2.2.2 标准曲线的绘制 精密称取10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷对照品0.80mg,用甲醇溶解并定容至1mL,0.45μm微孔滤膜过滤。依次吸取滤液5,10,15,20,25μL分别按上述色谱条件进行分析,测定峰面积。以对照品含量(μg)为横坐标(X),对照品峰面积(A)为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得回归方程,相关系数及线性范围分别为:
Y=1157.267X+4.482,r=0.9999,4μg～20μg。2.2.3 总黄酮的测定、样品溶液的提取与制备、精密度实验和回收率实验详见文献。2.2.4 供试样品测定 测定蒙古黄芪与膜荚黄芪中总黄酮和10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷的含量,结果见表1,色谱图见图2。3 糖类物质的测定3.1 仪器与试药
3.1.1 仪器 DU640核酸蛋白分析仪(美国贝克曼)
[3]
thoxypeterocarpan(μg/g)Totalpolysaccharide(mg/g)3
19.955±0.81384.640±3.06973.310±0.96248.800±1.245
2 黄酮类物质的测定2.1 仪器与试药
2.1.1 仪器 HP1100液相色谱仪:DAD二极管阵列检测器;HP化学工作站(美国惠普)。
2.1.2 试药 对照品10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷由本所植化室宋纯清教授赠送;蒙古黄芪由内蒙瑞安生态基地提供,膜荚黄芪购自上海市药材公司,由上海市中药质量监督检验室鉴定;甲醇为色谱纯;乙酸乙酯为分析纯;水为重蒸去离子水。2.2 方法与结果
2.2.1 色谱条件 色谱柱:InertsilODS-3(4.6×
第23卷 第10期ChineseTraditionalPatentMedicineVol.23 No.10
3.1.2 试药 对照品DEXTRAN(分子量10,400)购自美国SIGMA公司;透析袋(8,000-10,000D)
购自华美公司;甲醇、硫酸、苯酚为分析纯;水为重蒸去离子水
。
A标准品HPLC
图B样品HPLC图
Fig.2 Contentof10-hydroxy-3,9-dimethoxypeterocarpaninRadixAstragali
3.2 方法与结果
3.2.1 测定条件 硫酸-苯酚法量,检测波长:487nm。
3.2.2 标准曲线的绘制 精密称取DEXTRAN对照品5.00mg,用水溶解并定容至50mL。依次吸取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8,2.0mL分别按上述测定条件进行分析,测定光吸收值。以对照品含量(μg)为横坐标(X),对照品光吸收值(A)为纵坐标(Y),得DEXTRAN回归方程,相关系数及线形范围分别为:
Y=149.309X-1.732,r=0.999,20μg～200μg。
3.2.3 样品溶液的提取与制备 样品干燥粉末1.00g,加50mL甲醇回流2h,回收甲醇,残渣干燥后加水煎煮3次,每次30min,合并3次煎煮液,抽滤,滤液用重蒸去离子水透析36h,定容至100mL。3.2.4 稳定性实验 样品(膜荚黄芪)溶液显色后,分别于0.5,1,2,4,6h放置后测定其吸收值,发现在2h至6h内吸收值变化不明显,RSD=0.47%,故比色测定最好在2h后进行。
3.2.5 回收率实验 精密称取1.00g膜荚黄芪样品5份,分别精密加入DEXTRAN对照品100mg,按样品溶液制备法制备,在上述测定条件下进行分析,计算总多糖平均回收率为95.06%,RSD=0.95%。
3.2.6 供试品样品测定 测定蒙古黄芪与膜荚黄芪中总多糖的含量,结果见表1。4 讨论
4.1 比较表1的实验结果,可以发现蒙古黄芪的总多糖含量高于膜荚黄芪,黄芪甲苷的含量低于膜荚
[11]
黄芪。而黄酮类化合物更为复杂,蒙古黄芪的总黄
测定总多糖含
酮的含量与膜荚黄芪相近,但其中一种含量较高的成分:10-羟基3,9-二甲氧基紫檀烷的含量明显低于膜荚黄芪。由于目前未见10-羟基-3,9-二甲氧基紫
檀烷的相关药效学报道,因此尚不能对其在两种黄芪中的含量差异做出具体的质量评价。但从以上结果可以看出,中药材质量标准的确定是一项复杂的工作,仅以一种有效成分的含量有时难以全面反映中药材的质量,即使是药典上承认的两种黄芪在以上几种有效成分含量上也有一定的差异。因此,根据药材的不同药效作用选取相关的有效成分进行比较,确定其质量,是一种较好的方法。
4.2 中药材质量标准的最终制定应从形态、解剖、化学、药效和分子标记等多方面进行比较,才能客观、综合、精确、有效地进行评价。
参考文献:
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比色法测定山楂中总黄酮的含量
孙立立1, 谢鸿霞1, 孙敬勇1, 杨书斌1, 于文强2
(1.山东省中医药研究所,济南250014;2.山东省交通医院,济南250031)
关键词:山楂;总黄酮;比色法;金丝桃苷
摘要:目的:建立以金丝桃苷为对照品的山楂黄酮含量测定方法和含量限度标准。方法:采用比色法,对全国十个地区的山里红和山楂中的总黄酮进行了测定。结果:各地样品中总黄酮含量在0.84～3.62%,与HPLC法测定的金丝桃苷含量基本呈正相关。结论:所建立的山楂总黄酮测定方法操作简便,结果准确,重复性好,可作为山楂含量测定方法。山楂中总黄酮含量限度暂定为:山楂细粉于60°C干燥6h,含总黄酮以金丝桃苷计,应不低于1.0%。中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2001)10-0748-03
DeterminationofFlavonoidsinFructusCrataegibyColorimetry
SUNLi-li1, XIEHong-xia1, SUNJing-yong1, YANGShu-bin1, YUWen-qiang2
(1.ShandongInstituteofTraditionalChineseMedicineandMeteriaMedica,Jinan250014,China;2.ShandongJaotongHospital,Jinan250031,China)
Keywords:FructusCrataegi;flavonoid;colorimetry;hyperoside
Abstract:Objective:ToestablishanewmethodandlimitofdetectionforFlavonoidscontentinFructusCratae-gi.Methods:FlavonoidsinFructusCrataegiin10regionswasdeterminedbycolorimetry.Results:ContentofFlavonoidsinsamplesselectedfrom10regionsranged0.84%～3.62%.ContentofhyperosidebycolorimetryiscorrelativetothatbyHPLC.Conclusion:Themethodissimple,quickandreproducible.FlavonoidcontentinFructusCrataegiwasdesignednolessthan1.0%,extractionmustbeperformedunder60°Canddriedtocon-stantweightfor6hours.
黄酮类是山楂降血压、降血脂、增加冠脉流量、抗心律失常的有效成分
[1]
析纯。金丝桃苷(自制,纯度为99.26%)。山楂样品为全国各省市收集市售样品,经鉴定为山里红CrataeguspinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.或山楂CrataeguspinnatifidaBge.的干燥成熟果实切制
的饮片。
2 比色原理和最大吸收波长的选择
山楂中含有多种黄酮类化合物,其黄酮母核所含的游离羟基,在适当的介质条件下能与金属铝离子形成络合物而显色。显色后的对照品溶液和供试品溶液的吸收光谱见图1。表明二者均在502nm处有最大吸收,因此测定波长选择500nm。最大吸收
,是评价山楂质量的重要,但山楂中黄酮的主要
依据。以芦丁(rutin)作为对照品的山楂中总黄酮的含量测定方法已有报道
[2,3]
[4]成分为金丝桃苷(hyperoside),以其为对照品测定
山楂中总黄酮的含量测定方法未见报道。为此,以金丝桃苷为指标性成分,进行了测定山楂中总黄酮含量的方法学研究。1 仪器试剂与样品
UV-265FW可见一紫外分光光度计(岛津),80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)。所用试剂均为分
收稿日期:2000-12-12
基金项目:“九五”国家重点科技攻关计划(96-903-02-03)
作者简介:孙立立(1953～),女,山东省济南市人,副研究员,从事中药研究工作。电话:(0531)2968470×3025