血清总蛋白测定 原理 步骤
血清总蛋白测定 原理 步骤
目的： 掌握血清蛋白质测定的方法。
原理： 血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH- CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
器材
分光光度计
试剂
1.6mol/L NaOH溶液称取NaOH240g，溶于新鲜制备的蒸馏水约800ml中，定容至1L，贮于有盖塑料瓶中。
2.双缩脲试剂 称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O)3g溶于新鲜制备的蒸馏水500ml中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H406·4H2O，用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g。待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
3.60～70g/L蛋白质标准液可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。
操作
取试管3支，混匀，置25℃30min或37℃ 10min，在波长540mm处比色，用空白管调零，测各管吸光度。
参考范围
正常成人参考范围为60～80g/L。长久卧床者约低3～5g/L，60岁以上约低2g/L，新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月缓慢上升，大约1年后达成人水平。
注意事项
1.黄疸血清，严重溶血，葡萄糖，酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰，故用标本空白管来消除。但如标本空白管吸光度太高，可影响测定的准确度。
2.高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离心管，各加待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试管倒立于滤纸上吸去残余液体。向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述相同的其他操作和计算。
评价
1.双缩脲显色反应仅和蛋白质中肽键数成正比关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系，各种蛋白质的显色程度基本相同。
2.本法重复性好，RCV为4%，CCV为3.9%；线性范围为0～140g/L；本法干扰少，并且大多可以避免；使用单一的稳定试剂，操作简便、快速，既适于手工操作，也便于自动化分析，已被推荐为测定血清总蛋白的参考方法。
3.唯一的缺点是灵敏度较低，比酚试剂法低约100倍。但本法的检出限为0.2～
1.7g/L，这相当于70g/L的血清3～24μl，已能满足临床生化检验的需要。
4.本法是临床测定血清总蛋白质首选最方便、最实用的常规方法。
5.临床上常见的血清蛋白定量法主要有双缩脲法、临床折射计法、染料结合法、BCA法和免疫比浊法。
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最主要的是肝细胞受损，肝功能出现障碍，肝脏合成蛋白质减少，白蛋白由肝脏合成，是正常人体血清总蛋白中的主要蛋白质成分。白蛋白在维持血液胶体渗透压、体内代谢物质运输。下降明显，造成总蛋白血清蛋白质是血清固体成分中含量最多的一类物质。低。一般是因为肝炎引起的；
其次，蛋白质丢失，如严重大面积烧伤烧伤一般是指由热力（包括热液、蒸汽、高温气体、火焰、灼热金属液体或固体等）所引起的组织损害。主要是指皮肤和/或黏膜的损害，严重者也可伤及其下组织。此外由于电能、化学物质、放射线等所致的组织损害及临床过程类似于热力烧伤，临床上均将其归于烧伤一类。也有将热液、蒸汽所致之热力损伤称为烫伤，火焰、电流等引起者称为烧伤。、大量血浆渗出、大出血；肾病综合征肾病综合征（nephrotic syndrome，NS）它不是一独立性疾病，而是肾小球疾病中的一组临床症候群。时，尿液中蛋白质长期被丢失；溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎是一种原因不明的慢性结肠炎，病变主要限于结肠的粘膜，表现为炎症或溃疡，多累及直肠和远端结肠，但可向近端扩展，以至遍及整个结肠。时，可随粪便排出一定量的蛋白质。
最后，营养不良广义的营养不良(malnutrition)应包括营养不足或缺乏以及营养过剩两方面，现只对前者进行论述。营养不良常继发于一些医学和外科的原因，如慢性腹泻、短肠综合征和吸收不良性疾病。营养不良的非医学原因是贫穷食物短缺。缺乏营养知识，家长忽视科学喂养方法。在发达国家营养不良的病人通常可以通过治疗原发病、提供适当的膳食，对家长进行教育和仔细的随访而治疗。但在许多第三世界国家，营养不良是儿童死亡的主要原因。在营养不良、社会习惯、环境和急、慢性感染之间存在着复杂的交互影响，以至治疗是非常困难，并不是单单提供适当的食物即可解决。或消耗增加，如长期食物中蛋白质含量不足或慢性肠道疾患所致吸收不良，患有慢性消耗性疾病如结核病、恶性肿瘤、肝硬化肝硬化是一种常见的慢性肝病，是由一种或多种病因长期或反复作用，引起肝脏弥漫性损害。临床上早期由于肝脏功能代偿较强，可无明显症状;后期则有多系统受累，以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并常出现消化道出血、肝性脑病、继发感染、癌变等严重并发症。等。
对于肝炎和肝硬化肝硬化是一种常见的慢性肝病，是由一种或多种病因长期或反复作用，引起肝脏弥漫性损害。临床上早期由于肝脏功能代偿较强，可无明显症状;后期则有多系统受累，以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并常出现消化道出血、肝性脑病、继发感染、癌变等严重并发症。引起的总蛋白血清蛋白质是血清固体成分中含量最多的一类物质。低，则应尽快治疗，才能将危害降低到最小