葡萄自然发酵过程中酵母菌的研究
第ｌＯ卷
２０
ｌ
第２期
中国食品学报
ＪｏｕｍａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ７１１ｅｃｈｎｏｌ（ｇｙ
Ｖ０１．１０Ｎｏ．２Ａｐｒ．２
０
ｌ０
０年４月
葡萄自然发酵过程中酵母菌的研究
程
雷１
李梓１王军１’２’
北京１０００８３）
（１东北林业大学林学院林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨１５００１４０）（２中国农业大学食品科学与营养工程学院葡萄与葡萄酒研究中心
摘要目的：筛选性状优良的野生酿酒酵母．对葡萄自然发酵过程中的酵母菌进行分离鉴定，探讨葡萄自然发
酵期间酵母茵群的变化。方法：利用ＷＬ培养基，对分离自吉林松源的“双红”、“双优”、“赤霞珠”和“黑塞比尔”４个葡萄品种自然发酵液的２４５株酵母进行初步鏊定。并对其中的１２０株进行分子鉴定。结果：矛ｊ用ＷＬ培养基
可将２４５株酵母分为６个营养类型．结合酵母茵菌株５．８Ｓ—Ｉ髑区域的ＲＦＬＰ分析，４个葡萄品种的自然发酵液
中共有５种酵母，分别是葡萄汁有孢汉逊酵母（日彻ｓｅｎ泌ｐｏｍ唧卿ｍ）、酿酒酵母（Ｓ口ｃｃｋｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅ口曲ｉ钟）、粘红酵母（Ｒ＾Ｄｄ咖兀‘ｋ∥比ｆ讥括）、陆生伊萨酵母（，ｓｓ眦ＩＩｌｅ以记据ｒｒｊｆｃＤ缸）和假丝酵母属的（轫记池ｓｏｒ６∞口。结论：自
然发酵过程中酵母菌群的比例是不断变化的。“双优”品种的自然发酵液中可能存在性状优良的野生酿酒酵母。
关键词葡萄；酵母；自然发酵；ＷＬ培养基；５．８Ｓ—ｒｒｓ区域ＲＦＬＰ分析
文章编号ｌ００９－７８４８（２０ｌＯ）０２—０１３ｌ埘
葡萄酒的酿造过程是利用酵母菌将葡萄内的大部分糖转化为酒精和ＣＯ：，同时生成甘油、高级醇、酯类、醛类等代谢产物，直接影响葡萄酒的色泽、香气及口感。也决定了葡萄酒的质量和风格。葡萄品种和质量一旦确定。要获得能够充分反映葡萄品种特色和优良品质的葡萄酒．所选酵母至关重要，可以说酵母菌是葡萄酒品质的灵魂【Ⅷ。由于长期的自然选择作用．山葡萄酵母已经逐渐适应了当地的气候、土壤和葡萄品种，所以也就形成了适应当地葡萄的菌系１３Ｊ。
分离自葡萄自然发酵的酵母一直是野生优良葡萄酒酵母的重要来源。自上世纪９０年代，国外有许多针对葡萄自然发酵过程中酵母菌群变化的研究。１９９３年Ｓｃｈｎｔｚ等【４】研究了“内比奥罗”自然发酵过程中酵母菌种类的变化。Ｃｏｎｓｔａｎｔ一、Ｔｏｒｉｊａ（ｑ和Ｂｅｌｔｒａｎ【７Ｊ指出葡萄自然发酵过程中的酵母菌种类是不断变化的。近年国内的相关研究增多，焦红茹【剐、苏龙【９１、刘爱国【彻、王泽举…】和刘树文１１２Ｊ分别研究了不同葡萄自然过程中酵母菌群的变化情况。
我国气候多样化的特点造就了丰富的葡萄酒酵母资源，然而对其的研究还处于起步阶段。
本文通过鉴定分离自葡萄自然发酵过程中的酵母，分析其菌群变化，进而开发适合东北葡萄产区酿酒酵母资源。传统的酵母菌分类主要依据形态学和生理生化特点。由于受环境因素的影响，某些酵母菌属、种在形态学及生理生化特性方面的差异极不显著，采用传统方法对它们进行分类相当困难．而通过分子手段对酵母菌进行鉴定的准确性很高Ｉ瑚。本文将葡萄自然发酵各个时期的酵母进行分离，根据其在ＷＬ培养基上的菌落颜色及形态进行初步分类，有代表性地选取酵母菌的纯培养．通过５．８析进行分子鉴定。
ＳｒＤＮＡ—ＩＴ
Ｓ区域的ＲＦＬＰ分
１材料和方法
１．１
材料
１．１．１原料４个葡萄品种一双红、双优、黑塞比尔、赤霞珠，采自吉林省松源市。
１．１．２培养基酵母菌菌株的分离采用ＹＥＰＤ培养基，其组成为：酵母浸粉ｌ％，蛋白胨２％，葡萄糖
收稿日期：２００９一１０一ｌｌ
作者简介：程雷，男，１９８４年出生，硕士通讯作者：王军
２％，琼脂２％。为抑制细菌生长，在培养基中加入
０．１
ｇ，Ｌ氯霉素。分离后酵母菌的保存采用ＹＰＤ培
１３２
中国食品学报
２０１０年第２期
养基，其组成是将ＹＥＰＤ培养基中的氯霉素去掉。酵母菌菌株的初步鉴定采用ＷＬ培养基．其组成为：酵母浸粉４．０９，Ｌ，胰蛋白胨５．０９，Ｌ，葡萄糖
５０．０
ｇ，Ｌ，磷酸二氢钾０．５５∥Ｌ，氯化钾０．４２５以，
氯化钙Ｏ．１２５ｇ，Ｌ，硫酸镁０．１２５∥Ｌ，氯化铁Ｏ．００２５∥Ｌ，硫酸锰Ｏ．００２５∥Ｌ，琼脂２０．０∥Ｌ，溴甲酚绿
２２．Ｏ
ｍ∥Ｌ。１．１．３
主要试剂
引物（ＩｒＩ’ｓ１／Ｉ鸭４），上海生工生
物工程技术服务有限公司合成；Ｔａｑ酶、ｄＮ’ｒＰ、肌口
Ｉ、觑ＩＩＩ、Ⅳｉ矿Ｉ，购自宝生物工程（大连）有限公
司。
１．１．４主要设备与仪器恒温培养箱、恒温水浴锅、一２０ｃＣ和４℃冰箱、３７℃和６５℃烘箱、离心机：ＰＣＲ扩增仪、电泳仪、凝胶成像系统。１．２试验方法
１．２．１单菌落分离将采集的葡萄除梗、破碎，葡萄醪转人预先灭菌的容器．自然发酵。发酵过程用比重计进行监测。分别在发酵的前期、中期、后期取样。梯度稀释后涂平板（ＹＥＰＤ培养基），于２８℃培养３ｄ．然后随机选取２０个有代表特征的菌落，保存备用ｆ１４１。
１．２．２酵母菌菌株的初步分类将保存的菌种活化，划线接种于ＷＬ营养培养基，置于２８℃恒温培养箱中培养５ｄ后观察，照相记录菌落颜色和形态。根据菌落的形态、颜色将所分离的菌株进行初步分类【ｌ习。
１．２．３
酵母菌ＤＮＡ的提取
采用石英砂破壁法
提取酵母菌ＤＮＡＩⅧ。根据ＷＬ营养培养基初步聚类结果．在每个葡萄品种发酵的前、中、后期各随机挑选１０株菌株，接种于ＹＰＤ斜面上，２５℃下培养１—３
ｄ。
１．２．４
酵母菌５．８
Ｓ
ｒＤＮＡ—ＩＴＳ区域的ＰＣＲ扩增
ＰＣＲ扩增所用引物为ＩＴＳｌ（５７一ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧ—
ＡＡＣＣＴＧＣＧＧ一３７）和ＩＴＳ４（５’一ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴ
ＴＧＡＴＡＴＧＣ一３７）。ＰＣＲ反应体系（５０斗Ｌ）：ｄｄＨ２０
３４．７¨Ｌ。１０×ＰＣＲ
ｂｕｆｆｂｒ（ＴａｑｂｕｆｋｒｗｉｔｈＫＣｌ）５
斗Ｌ，２５瑚ｌｍｏｌ几ＭｇＣｌ２
３“Ｌ，１０ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓｌ
斗Ｌ，１０“ｍｏｌ，ＬＩＴＳｌ
２．５斗Ｌ，１０¨ｍｏｌ，Ｌ
ＩＴＳ４
２．５
斗Ｌ，Ｔａｑ酶１．５Ｕ，酵母菌ＤＮＡ模板１斗ＬＩｍ。ＰＣＲ扩增反应程序：９５℃预变性５ｒｎｉｎ：９５℃变性ｌＩＩＩｉｎ，５２℃退火２ｍｉｎ，７２℃延伸２ｔｌｌｉｎ，３５个循环；
最后于７２℃延长１０ｍｉｎ。所得扩增产物用ｌ％琼脂糖凝胶检测，扩增产物大小应在３５０—９００ｂｐ之间。
１．２．５
ＰＣＲ扩增产物的限制性酶切
①酶切反应体系３０斗Ｌ，其中Ｂｕｆｆｅｒ２“Ｌ，限
制性核酸内切酶（舶吐Ｉ、日∞ＩＩＩ、日ｉ∥Ｉ）１０
Ｕ，
ＰＣＲ产物１０斗Ｌ，ｄｄＨ２０补充体系至３０“Ｌ。
（参３７℃酶切３
ｈ。
（耋）每管加入２肛Ｌｏ．１ｍｏｌ／Ｌ
ＥＤＴＡ（ｐＨ８．ｏ），
混匀。以停止反应，置于冰箱中保存。
④酶切产物用６％聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，
控制电压２８０一３００Ｖ，功率恒定在３５Ｗ。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约１ｃｍ时，停止电泳，银染后扫描。
２结果与分析
２．１
ＷＬ培养基分类
ＷＬ营养培养基是用来监测饮料发酵过程中
的微生物类群的。Ｃａｖａｚｚａ等研究表明旧，葡萄酒自然发酵过程中出现的大多数典型的酵母菌种均可用ＷＬ营养培养基区分（基于菌落颜色及菌落形态）。根据在ＷＬ营养培养基上培养５ｄ形成菌落的颜色和形态。将分离到的２４５株酵母菌共分为６类。分类结果见表ｌ。
２．２
酵母菌５。８ＳｒＤＮＡ—ｌＴＳ区域的ＰＣＲ扩增
结果
根据ＷＬ营养培养基的初步分类，每个葡萄品种按自然发酵前、中、后３个时期，各取酵母菌１０株。共１２０株。使用引物Ｉｒｌｌｓｌ和ＩｒＩ’ｓ４对其
ｒＤＮＡ—ＩＴｓ区基因进行ＰＣＲ扩增．部分扩增
结果如图１所示。
如图ｌ所示，酵母菌菌株的ＰＣＲ扩增结果为５个类型：Ｉ类：ＰＣＲ产物长度５００ｂｐ，与数据库中假丝酵母一致，菌株编号为３、１１、１５、１８；ＩＩ类：ＰＣＲ产物长度４５０ｂｐ，菌株编号为２、４、１４；ＩＩＩ类：ＰＣＲ产物长度６４０ｂｐ，与数据库中红酵母一致，菌株编号１；ＩＶ类：ＰＣＲ产物长度８８０ｂｐ，与数据库中酿酒酵母一致，菌株编号为６、７、１３、１７；Ｖ类：ＰＣＲ产物长度７５０ｂｐ，与数据库中葡萄汁有孢汉逊酵母一致，菌株编号为５、８、９、１０、１２、１６。
５．８Ｓ
第ｌｏ卷第２期葡萄自然发酵过程中酵母茵的研究
１３３
ＩⅡｌⅡＩＶＶＶＩ
中央奶油色、边缘淡绿色奶油色红色
奶油色带淡绿色深绿色
中央深绿色、边缘淡绿色
平坦、光滑、不透明
平坦、表面干燥、边缘呈放射状、面粉状
假丝酵母属
未提及
红酵母属酿酒酵母
球形突起、表面光滑、黏稠、黄油状
球形突起、表面光滑、不透明、奶油状
平坦、表面光滑、不透明、黄油状
平坦、光滑、不透明、黄油状
葡萄汁有孢汉逊酵母
未提及
注：ＭＩ：１００ｂｐ
图１
Ｆｉｇ．１
Ｒｅｓｕｌｔ
ＤＮＡ剧ｄｅｒ；Ｍ２：ＤＬ２０【）【）Ｍａｒｋｅｒｓ。
所选酵母菌株的５．８ＳｒＤＮＡ—ｌＴＳ区基因ＰＣＲ扩增结果
ｏｆ山ｅＰＣＲ—ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｉｎ
５．８ＳｒＤＮＡ
ｒｅｇｉｏｎ０ｆ８ｅｌｅｃｔｅｄｙｅ嬲ｔｓ
２．３５．８Ｓ
ｒＤＮＡ—ＩＴＳ区域ＰＣＲ扩增产物的段，即４３０ｂｐ和２１０ｂｐ；经饿∥Ｉ酶切，有３个片段，即３４０、２２５和７５ｂｐ。ＩＶ类：６号、７号、１３号和１７号菌株的ＰＣＲ产物经硎谊Ｉ酶切，有３个片段，即３８５、３６５和１２０ｂｐ；经Ⅳ嬲ＩＩＩ酶切，有４个片段，即３２０、２３０、１８０和１５０ｂｐ；经日ｉ矿Ｉ酶切，有２个片段，即３６５ｂｐ和１５５ｂｐ。Ｖ类：５号、８号、９号、１０号、１２号和１６号菌株ＰＣＲ产物经Ｈ阮Ｉ酶切，有３个片段，即３２０、３１０和１０５
ＲＦＬＰ分析
ＰＣＲ扩增产物用限制性内切酶（硎ｌ口Ｉ、如
ＩＩＩ、日ｉ矿Ｉ）进行酶切分析，部分筛选菌株的酶切结果如图２所示。
如图２所示，经内切酶（＾阮口Ｉ、Ⅳ凹ＩＩＩ、日ｉ矿Ｉ）酶切后。１８株代表菌株共有５种酶切类型。Ｉ类：
３号、１１号、１５号和１８号菌株的ＰＣＲ产物经舶口
Ｉ酶切，有３个片段，即２１５、１００和８０ｂｐ；经日础ＩＩＩ酶切，有２个片段，即３００ｂｐ和９０ｂｐ；经历矿Ｉ酶切，有３个片段，即２７０、１２０和１１０ｂｐ。ＩＩ类：２号、４号和１４号菌株的ＰＣＲ产物经日舰Ｉ酶切，有４个片段，即１３０、ｌｏｏ、９０和４５
ｂｐ；经融
ＩＩＩ酶切，有１个片段，即７５０ｂｐ；经ＨｉｎｆＩ酶切，有３个片段，即３５０、２００和１８０ｂｐ。ＲＦＬＰ分析结果与这５种酵母菌在数据库中所描述的相关信息一致１１８ｌ。
结合５．８
Ｓ
ｂｐ；经如ＩＩＩ
ｒＤＮＡ—Ｉ髑区基因ＰＣＲ扩增结果
酶切，有２个片段，即２９０ｂｐ和１２５ｂｐ；经饿矿Ｉ酶切，有２个片段，即２４０ｂｐ和１０５ｂｐ。ＩＩＩ类：ｌ
及其限制性内切酶（Ｈ托Ｉ、日钟ＩＩＩ、Ｈｉ∥Ｉ）酶切片
段的ＲＦＬＰ分析。可将１８株代表菌株分为５类，详
见表２。
号菌株的ＰＣＲ产物经舶口Ｉ酶切，有３个片段，
即３２０、２４０和８０
ｂｐ；经舭ＩＩＩ酶切，有２个片
中国食品学报
２０１０《苹２期
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第ｌｏ卷第２期葡萄自然发酵过程中酵母菌的研究
１３５
２．４不同葡萄自然发酵过程中酵母菌菌群分析
将分离自不同葡萄自然发酵过程中的２４５株酵母，按照其５．８
Ｓ
ＲＦＬＰ分析结果，分析４个葡萄品种自然发酵过程中５种酵母占酵母总数的比例，结果见图３。
ｒＤＮＡ—ＩＴＳ区基因ＰＣＲ的
堡
丑
嚣ｇ辍确舒髓姐
圈３４个葡萄品种自然发酵过程中的酵母菌群
Ｆｉｇ．３
Ｙｅ础ｎｏｒａ
ｄｕｒｉｎｇ
ｓｐｏｎ胁ｅｏｕＢｆｅⅡ眦ｎ协ｏｎ
ｏｆ４
ｄｉ艉陀ｎｔ
ｇｒａｐｅ
Ｖ“ｅｔｉｅ８
由图３可以看出。不同品种葡萄自然发酵过程中。在发酵前期，葡萄汁有孢汉逊酵母均占主导地位。而在“双优”的发酵前期，葡萄汁有孢汉逊酵母占到１００％。在自然发酵前期，“双优”中未分离到假丝酵母属的ｃ．ｓｏｒ６∞口，“双红”中虽有假丝酵母属的ｃ．ｓＤｒ６０ｓｏ。但其所占比例很小；在自然发酵中期，酵母种群的构成变复杂，含有本试验所分离鉴定的５种酵母，其中粘红酵母分离于“双红”的发酵中期，陆生伊萨酵母分离于“双红”、“赤霞珠”和“黑塞比尔”３个品种，同时葡萄汁有孢汉逊酵母所占比例变小，失去主导地位；发酵后期，酿酒酵母成为优势菌群，其它酵母所占比例均减少，
而“双优”的发酵后期酿酒酵母成为单一优势菌群。
３讨论
本试验中共分离到各类酵母２４５株。其中酿酒酵母１１６株。为筛选适合东北山葡萄发酵的野生酿酒酵母以及驯化试验提供了基础。
对于酵母菌的鉴定。传统方法是依据形态学、生理学试验和生物生化特征来鉴定和分类。１９９２年Ｃａｖａｚｚａ等发现．ＷＬ营养培养基可以区分葡萄酒自然发酵过程中出现的大多数典型的酵母菌
种。薛军侠等Ｉｌ研在对“赤霞珠”自然发酵过程中酿
１３６
中国食品学报
２０１０年第２期
酒酵母的筛选研究中指出ＷＬ营养培养基对酿酒酵母的筛选准确度可达到１００％。由于受到环境因素的影响．某些酵母菌属、种在形态学及生理生化特性方面差异极不显著，采用传统方法对其分类十分困难。近十几年来，随着遗传学、免疫学、酶学及分子生物学等学科的发展。人们不断把分子生物技术和计算机技术引入到酵母菌分类中．为其提供新的分类依据。１９９８年魏艳敏等例通过分析
等㈣指出有孢汉逊酵母、伊萨酵母和假丝酵母在发酵初期占主导地位；而随着发酵的进行逐渐被酿酒酵母所代替。此外，王泽举…】和刘树文【１２】都指出自然发酵过程中酒精耐性较高的酿酒酵母逐渐占据优势，并最终完成发酵。本试验中通过分析４个葡萄品种自然发酵过程中酵母菌菌群的变化，揭示发酵初期葡萄汁有孢汉逊酵母为优势菌群，陆生伊萨酵母和假丝酵母属的Ｃ５Ｄｒ６∞口少量存在．未分离到酿酒酵母。这与原料葡萄上野生酵母群的构成比例有关。据Ｉｓａｋ报道，假丝酵母和葡萄汁有孢汉逊酵母在葡萄皮表面所占比例在５０％一７５％。而在健康、未破损的葡萄表面，酿酒酵母所占的比例很小伫哪。随着发酵的进行，酿酒酵母在菌群中所占比例不断提高，酒精度不断提高，葡萄汁有孢汉逊酵母、陆生伊萨酵母和假丝酵母的生长受到抑制．它们在菌群中所占比例逐渐下降。至自然发酵后期。酿酒酵母在菌群中占有绝对优
同工酶结构的相似性。将果蝇红酵母（月＾Ｄ幽￡Ｄｎ比
ｐ以ｉｍ彻伽）从深红酵母（尺＾Ｄ如ｔｏｍ缸Ⅲ６ｍ）中单列出来。２０００年自逢彦等｛２ｌ】等将脉冲电泳核型分析应用于酿酒酵母菌分类。目前，使用较多的酵母菌鉴定方法有ＲＥＦＰ、ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ等阎。
通过ＷＬ营养培养基的初步鉴定，将分离到的酵母分为６类，与通过５．８ＳｒＤＮＡ—Ｉ鸭区域ＰＣＲ扩增产物ＲＦＬＰ分析所分的５类酵母进行对比．证实ＷＬ营养培养基对酿酒酵母鉴定的准确度确实可达到１００％。但由于菌落颜色的差异，ＷＬ营养培养基对葡萄汁有孢汉逊酵母的鉴定存在误差。此外，ＷＬ营养培养基对红酵母和假丝酵母不能鉴定到种，对伊萨酵母不能鉴定。实验证明ＷＬ营养培养基可以区分大多数葡萄自然发酵过程中出现的酵母。
有关自然发酵过程中酵母菌群的构成。Ｍａｒｏ
参
势ｌ嬲ｌ。其中从“双优”自然发酵过程中仅分离到葡
萄汁有孢汉逊酵母和酿酒酵母，到发酵后期酿酒酵母成为唯一优势菌群。推测“双优”的自然发酵液中存在能快速启动发酵且发酵力强的野生酿酒酵母。本实验还表明。同一产区的山葡萄和欧亚种葡萄自然发酵过程中的菌群变化基本一致。
考文
献
【１１于清琴，李保国，张颖超，等．单酵母发酵与多酵母共酵对宝石一卡本内特红葡萄酒品质的影响初报叨．中外葡萄与
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Ｍ，Ｇａｆｎｅｒ
Ｊ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｙｅ聃ｔｄｉｖｅ聘时ｄｕｒｉｎｇｓｐｏｎ乞阴ｅｏｕｓ如ｄｉｎｄｕｃｅｄａｌｃｏｈｏｌｉｃｆｅ彻ｅｎｔａｔｉｏｎｓ叨．Ｊｏｕｍａｌｏｆ
ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｍｂｉｏｌｏｌ；ｙ。２００８．７５（６）：５５ｌ一５５８．
Ｍ，ＰｏｂｌｅｔＭ，ＡｍｌａＬ，ｅｔａ１．Ａｎａｌｙｓｉｓ
０ｆ
【５】ｃｏｎｓｔ明ｔｆ
ｌｊｓｈｅｄ
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ａｌｃｏｈｏｌｉｃ
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ｗｊｎｅ啊团．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｍｄ
Ｒｏｚ色ｓ
Ｎ，
Ｐｏｂｌｅｔ
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ａ１．Ｙｅ鼬ｔｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｄｙｎａｍｉｃｓｉｎｓｐｏｎｔ锄ｅｏｕｓ
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Ｖ帅ｋｅｕｗｅｎｈｏｅｋ，２００ｌ，７９（３）：３４５—
【７】ＢｅｌｔｍｎＧ。７Ｉ’ｏ喇ａＭＪ，Ｎｏｖｏ
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Ｍ。ｅｔａ１．Ａｎａｌｙｓｉ８
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ｙｅ鹬ｔｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｄｕ＾ｎｇａｌｃｏｈｏｌｉｃ
ｆｅ册ｅｎｔａｔｉｏｎ：Ａ
ｓｉｘ
ｙｅ盯ｆｏＵｏｗ—
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葡萄自然发酵过程中酵母菌的研究
１３７
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Ｆ，ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆｏｆ
Ｍｉｃｍｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，１６９（５）：３８７—３９２．
ｙｅ鹪ｔｓｂｙＲＦＬＰａｎａｌｙｓｉ８ｏｆｔｌｌｅ５．８５ｒＲＮＡｇｅｎｅ
ａｎｄ
【１８】Ｚ甜ｚｏ∞ＢＥ，ＢｅＵｏｃｈＣ，ＵｎＪｂｕｍ
ｔｌＩｅ３３７．
ｔｗＤ
ｒｉｂｏ∞ｍａｌｉｎｔｅｍａｌ臼阻ｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐ北ｅ硌【Ｊ】．ＩｎｔｅｍａｔｉｏｎａｌＪｏｕｍａｌ０ｆＳｙ８ｔｅｍｔｉｃ
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葡萄自然发酵过程中酵母菌的研究
作者：作者单位：
程雷， 李梓， 王军， Cheng Lei， Li Zi， Wang Jun
程雷,李梓,Cheng Lei,Li Zi(东北林业大学,林学院,林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室,哈尔滨,150040)， 王军,Wang Jun(东北林业大学,林学院,林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室,哈尔滨,150040;中国农业大学,食品科学与营养工程学院,葡萄与葡萄酒研究中心,北京,100083)
中国食品学报
JOURNAL OF CHINESE INSTITUTE OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY2010,10(2)2次
刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
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引证文献(2条)
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