鸡胚中和试验试验方案
07-03
鸡胚中和试验试验方案
试验原理：中和试验是应用抗体使相应抗原(毒素或病毒) 的毒性或传染性消失的试验。本实验通过先测定鸡胚半数致死量，确定病毒的毒力效价，应用病毒的毒力效价测定血清的中和滴度，即中和指数。
仪器及试剂：
打孔器，孵化箱，移液器，注射器，培养箱，恒温水浴锅，冰箱，石蜡，生理盐水，病毒液，血清等。
试验方法：
一．鸡胚半数致死量的测定（LD50）：
1.9日龄鸡胚分为11组，每组5只鸡胚，其中一组作为对照组。
2. 将病毒液按10-1~10-10做倍比稀释。
3. 分别将倍比稀释的病毒液经尿囊腔接种到鸡胚中，每只注射0.2ml ，对照组注射等量的生理盐水。
4. 逐日观察每组鸡胚的死亡数，并作记录。
5. 按Reed 和Muench 氏法计算鸡胚半数致死量LD50。
二．鸡胚中和试验
1. 通过对鸡胚半数致死量的测定，选择病毒液的稀释度，用灭菌生理盐水将病毒稀释成每0.1ml 含有100个LD50。
2. 血清处理，对血清56℃水浴加温灭活，并作10倍倍比稀释，1010-1~10-10。
3. 将病毒液分别于稀释血清等量混合，于37℃感作1h 。
4. 对鸡胚分组，分为12组，每组5只鸡胚，实验组10组，正常对照组，以及病毒对照组（100个LD50）。
5. 对实验组每个稀释度接种5只鸡胚，每只0.2ml 。正常对照组注射0.2ml 生理盐水。病毒对照组接种0.2ml 含有100个LD50的病毒液。
6. 置于37℃孵化箱孵育144h ，弃去24h 内死亡的鸡胚，此后每6h 照蛋一次，及时将死亡鸡胚取出，至144h 将鸡胚全部取出，并放置4℃保存。
7. 逐日观察每组鸡胚的死亡数，并作记录。
8. 按Reed 和Muench 氏法计算中和指数。