二极管阵列检测器在液相色谱测定苏丹红Ⅰ中的应用
【论著】
二极管阵列检测器在液相色谱测定苏丹红Ⅰ中的应用
李平,陈澍,付松
[摘要]目的 探讨二极管阵列检测器对样品中苏丹红I定性鉴别手段,建立高效液相色谱测定辣椒
制品中苏丹红I的定量分析方法。方法 通过二极管阵列检测器中比例色谱、峰纯度和谱库相似性检验进行综合定性鉴定,C18色谱柱分离测定样品中苏丹红I的含量。结果 对样品色谱峰各点光谱图相对峰顶点光谱图的比例色谱图和峰纯度图均为平顶峰;样品色谱峰的光谱图中所有吸收值与标准苏丹红Ⅰ的光谱图拟合相似指数>019995;苏丹红Ⅰ在0125~5μg/ml,最低检测浓度为0105μg/g;样品的平均回收率为9814%。结论 丹红I进行的多指标定性鉴别,中心验证表明,方法定性准确。对40I满意。
[关键词] 苏丹红I;;[中图分类号]A[] 1006-4028(2005)02-132-03
ofDiodeArrayDetectorforDeterminingSudan
ⅠbyHigh-performanceLiquidChromatography
LiPing,ChenShu,FuSong1CenterforDiseaseControlandPreventionofSichuanProvince,Chengdu610031,China1
AbstractObjective TolookforthemeansofqualitativedistinctionforSudanⅠinsamplesbydiodearraydetectoranddevelopanaccuratequantitativemethodfordeterminingSudanⅠinhotchilliandrelatedprod2uctswithHPLC1MethodThecompositivelyqualitativedistinctionwithproportionalchromatography,peakpurityandsimilaritytestonthespectralibrarywasperformedbydiodearraydetector1TheC18col2umnwasusedtoseparateanddeterminethecontentsofSudanⅠinsamples1ResultBothofcurvesfromthegraphsofproportionalchromatographyandpeakpurityobtainedbythatmadecomparisonsbetweenthespectrogramofeverypointsfromthecurvesofchromatographicpeakofsamplesandthespectrogramoftoppointfromthecurvesofsamepeakwereflatpeaks1Thefittingsimilaritycoefficientsbetweenallab2sorbancevaluesofthespectrogramfromthecurveofthechromatographicpeakofsamplesandthespectro2gramfromthatofSudanⅠweremorethan0199951ThecontentsofSudanⅠweregoodlinearforthein2strumentrespondsinrangefrom0125to5μg/ml1ThelowestdetectableconcentrationofSudanIwas0105μg/g1Theaveragerecoveryratioofsampleswas9814%1ConclusionThemulticriteriaqualitativedistinctionofSudanⅠinsampleswasperformedbydiodearraydetector,andthusthequalitativeerrorsfromsimplexretentiontimewereeliminated1PositivesampleswerevalidatedinthreeCDClabrespective2ly,ourmethodwasconfirmedasanaccurateoneforqualitativedistinction1Bothofqualitativeandquan2tificationresultsobtainedfromthefortybatchofdifferentkindsofhotchilliandrelatedproductsweresat2isfactory1
KeywordsSudanⅠ;Diodearraydetector;Determination)是人工合成的油溶性染料, 苏丹红Ⅰ(SudanⅠ
常用于工业染色。国外研究表明,苏丹红Ⅰ在动物
四川省疾病预防控制中心 (四川 成都 610031)
作者简介:李平,女,大学本科,主任技师,卫生检验。
实验中有致癌作用。我国在1996年颁布的食品添加剂卫生标准(GB2760)中明文禁止将苏丹红用于食品生产。
食品中违规使用苏丹红Ⅰ主要在辣椒制品中。四川是辣椒消费大省,建立苏丹红Ⅰ的检验和识别
方法,对维护食品安全,保证人民健康有积极作用。关于苏丹红Ⅰ的检测方法,国外有多篇报道[1~3],国内的报道不多[4]。为了配合对苏丹红Ⅰ的专项整治行动,国家质检总局与标准化管理委员会于2005-03-29紧急颁布了国标方法《食品中苏丹红染料的检测方法—高效液相色谱法》(GB/T19681—2005)[5]。该方法为了排除干扰、提高灵敏度,采用了固相萃取的样品前处理方法。引进由国家质检总局推荐的欧州委员会的检测方法,结合本单位仪器特性,对原方法梯度洗脱和流动相进行了改进。在加快分离速度和增加对苏丹红Ⅰ的专属响应的基础上,重点通过二极管阵列检测器中比例色谱、峰纯度和谱库相似性检验进行综合定性鉴定。在保持方法简单、快速的基础上,进一步提高了定性的准确性,并成功应用于多种辣椒制品中苏丹红Ⅰ的测定。1 材料与方法111 原理 苏丹红Ⅰ的萘酚[Benzene1)-2-],分子式C16H12N2O,化学
N
N
相色谱,在流动相为乙腈+1412%乙酸(90+10)的C18柱中与其他组分分离,于测定波长480nm,二极管阵列检测器以保留时间、峰纯度和计算机谱库相似性检索对色谱峰准确定性,以峰面积定量。112 主要仪器和试剂 LC—10ADvp高效液相色谱仪(日本岛津);SPD—M10Avp二极管阵列检测器;苏丹红Ⅰ(北京化学试剂研究所);乙腈(色谱纯);0145μm孔径滤膜;2ml注射器;超声波振荡器。
标准贮备液:准确称取50100mg苏丹红Ⅰ,乙腈溶解后定容至10010ml。此液含苏丹红Ⅰ015mg/ml。
标准应用液:取贮备液1100ml,乙腈稀释定容至100ml。此液含苏丹红Ⅰ5μg/ml。2 苏丹红I
结构式见右。能溶于醚、
苯和CS2等有机溶剂和浓硫酸,不溶于水和碱性溶液。样品中的苏丹红Ⅰ经乙腈提取过滤后,进入液
25,10ml乙腈用超,取上清m孔径滤膜头,装入自动进样小瓶,在色谱工作条件为流动相:乙腈+1412%乙酸=90+10;流速110ml/min;C18柱5μ
m,150×416mm;柱温3000℃;SPD—M10Avp二极管阵列检测器;检测范围430nm~530nm;波长480nm下进行测量,同时作标准工作曲线。标准、样品色谱峰见图1峰面积定量。
图1 苏丹红色谱图
3 结果与讨论
311 样品提取液的选择 资料[4]报道甲醇溶液可用于食品中苏丹红Ⅰ的样品提取。经比较试验,同一样品在同一提取条件下,苏丹红Ⅰ在甲醇与乙腈提取液中的出峰位置重合,但甲醇提取液的杂质峰较多,且样品中苏丹红含量提取效率不如乙腈高,故
试验选用乙腈作提取液。312 样品的定性鉴别 液相色谱分析的定性方法常采用绝对或相对保留时间判定,但这种定性较粗略。经典方法需要收集柱后流出液,进一步用红外光谱、
核磁共振或质谱分析。二级管阵列检测器由于可在色谱分离期间迅速提供被测组分的扫描图,对指定位置实时记录色谱和光谱信息,计算最大吸收波长,对用保留值规律及光谱特征吸收曲线进行综合定性分析提供了方便。其功能不仅可作色谱峰纯度检验,也可随色谱峰的流出自动采集峰顶光谱图,与计算机谱库贮存的标准光谱图作对比检索。31211 谱库相似性检索 将样品色谱峰光谱图的所有吸收值与标准苏丹红Ⅰ的光谱图用最小二乘拟合系数计算进行相似指数的比较,样品1、2、3的相
似指数分别为019998、019999、019996(图2)。根
据匹配因子为1000表示光谱完全一致,900以上代表光谱相似。故可判断样品中的色谱峰与标准苏丹红Ⅰ峰非常匹配,应为同一物质
。
图2 样品与标准品的相似性比较
31212 峰纯度检验 峰纯度是判定色谱峰内是否包4 小结
含多个组分的指标。色谱峰不同部位的光谱归一化是最常用的峰纯度检测方法。根据同一物质在不同
λλ波长λ1和λ2的摩尔吸光系数比值(A1/A2)应为常数的原理,本文利用样品色谱峰各点光谱图相对峰顶点光谱图,通过计算机连续计算吸收比值得到其比例色谱图和峰纯度图均为平顶峰,显示样品峰内各点的光谱与峰顶点光谱的摩尔吸光系数的比值为一常数,表明用本法提取的样品中苏丹红Ⅰ为纯物质。
313 标准曲线线性范围 取标准应用液配制成010、0125、015、110、210、510μg/ml的标准系列,按
本方法操作简单,3份阳性样品分别经中国疾病
预防控制中心营养所、北京市疾病预防控制中心、成都市疾病预防控制中心复检,定性准确;对40份各类辣椒制品的测定结果令人满意。5 参考文献
[1]CalbianiF,CareriM,ElviriL,etal1Accuratemassmea2
surementsfortheconfirmationofSudanazo-dyesinhotchilliproductsbycapillaryliquidchromatography-electro2spraytandemquadrupoleorthogonal-accelerationtomeofflightmassspectrometry[J]1JChromatogrA,2004,
1085(1-2):127-1351
[2]TateoF,BononiM1FastdeterminationofSudanIby
HPLC/APCI-MSinhotchilli,spices,andoven-bakedfoods[J]1JAgricFoodChem,2004,52(4):655-6581[3]MazzettiM,FascioliR,MazzonciniI,etal1Determinaionof
1-phenylazo-2-naphthol(SudanI)inchillipowderandin
chilli-containingfoodproductsbyGPCclean-upandHPLCwithLC/MSconfirmation[J]1FoodAdditContam,2004,21(10):935-9411
[4]喻凌寒,牟德海,李光宪,等1HPLC-DAD法测定辣椒
实验方法进样10μl测定。以峰面积和标准浓度作线性回归,回归方程为:Y=360512X+81173。苏丹红Ⅰ在0125~5μg/ml范围内有良好的线性关系(r=01999996),其样品最低检测浓度是0105μg/g。314 精密度试验 对含量为110μg/ml的苏丹红I
标准溶液重复5次测定的RSD为0150%,用同一含苏丹红Ⅰ的辣椒样品,称取5份按实验方法提取分离后测定,其RSD为1123%。
315 样品加标回收 分别对阳性和阴性样品(n=4)
各加015μg苏丹红标准后测定,其回收率范围在9216%~104%,平均回收率为9814%。
及其制品中苏丹红Ⅰ的含量[J]1光谱实验室,2004,21
(6):1131-11331
[5]国家质量监督检验检疫总局,国家标准化管理委员会1
GB/T19681—2005食品中苏丹红染料的检测方法—高效液相色谱法[S]120051
(收稿日期:2005-04-14)