基础有机化学实验实验报告二
菠 菜 色 素 的 提 取 和 色 素 分 离 (Extraction of pigments from spinach and chromagraphic isolation)
一．实验目的：
1. 学会薄层层析法对于有机物进行分离 2. 学会柱层析法对于有机物进行分离 3. 使用紫外光谱对于特定有机物进行分析
二．实验原理： 原理：色谱法
CH 2R
H 3C
N
H 3C
N
CH 2CH 3
CH 3
CH 2CH 2
CO 2CH 3
CH 3
CH 3
CH 3
CH 3
H 3C
3
C CH 3
叶绿素a （R=CH3） 叶绿素b （R=CHO）
H 3C
CH 3
CH 3
R
H 3C
CH 3
R
3
CH 3
CH 3
β-胡萝卜素（R=H） 叶黄素（R=OH）
CH 2OH
维生素A
相对极性的大小为：叶绿素a 〉叶绿素b 〉叶黄素 〉胡萝卜素 由于甲醇的极性在它们之间，正好可以溶解叶黄素而不能溶解其他的三者，因此实际样品中只能洗脱出三个，按照洗脱剂极性从小到大的顺序出来的为胡萝卜素，叶绿素a ，叶绿素b 。
三．主要试剂及产物的物理常数：
四．主要试剂用量及规格：
硅胶G 中性氧化铝 95%甲醇 石油醚（沸程60－90℃） 丙酮 乙酸乙酯 菠菜叶
五．实验仪器装置：
旋转蒸发装置 柱色谱装置 柱色谱中的填充物从下至上分别为脱脂棉，石英砂、氧化铝、石英砂。
六．实验步骤及现象：
七．产品性状、外观、物理常数：
叶绿素a ：在3：1：1正丁醇-乙醇-水的溶液中呈现蓝绿色
叶绿素b ：在3：1：1正丁醇-乙醇-水的溶液中呈现黄绿色 胡萝卜素：在9：1石油醚-丙酮溶液中呈现橙黄色
叶黄素在甲醇溶液中与其他成分混合，为黄绿色，本身为黄色
八．薄层爬板分析：
板a 和板b 的最大区别在于叶绿素a 和叶绿素b 在不同极性的展开剂中分离速率明显不同 a 的展开剂是石油醚-丙酮（8：2），极性较小，而叶绿素a 和叶绿素b 的极性较大，所以，“不太爬得动”，组分三由于有醇的存在，所以其叶绿素a 和叶绿素b 移动的速度明显比组分一中的叶绿素a 和叶绿素b 快。 b 的展开剂是石油醚-乙酸乙酯（6：4），极性较大，所以其组分一和组分三中的叶绿素a 和叶绿素b 的比移值都明显比板a 中的大，也是由于醇的影响，组分三的叶绿素a 和叶绿素b 的移动速度要比组分一中的快，但差别已没有板a 中那么大。
胡萝卜素由于极性小，在两中展开剂中都有很大的比移值，在板a 和板b 中没有明显区别
4.8cm
1. 代表提取液R f =0.93752. 代表胡萝卜素
3. 代表叶绿素a 和叶绿素b
18mm R f =0.3758mm R f =0.167
5mm
48mm
板a （石油醚-丙酮=8：2）
4.8cm
1. 代表提取液2. 代表胡萝卜素
3. 代表叶绿素a 和叶绿素b
35mm R f =0.729
24mm
23.5mm R f =0.4896
16mm
板b （石油醚-乙酸乙酯=6：4）
最后，还想说一点柱层析中的装样品问题，原则是样品的浓度越大越好，只要恰好溶解色素就可以，这样可以使用层析的时候所有的组分的起点都能最大限度地相同。这需要在实践中多加练习和思考。