中华普通外科杂志

·５５８·中华普通外科杂志２０１４年７月第２９卷第７期　ＣｈｉｎＪＧｅｎＳｕｒｇ，Ｊｕｌｙ２０１４，Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．７　　一校样

·论著·

Ｃａｖｅｏｌｉｎ１与胰腺癌ＥＭＴ及转移关系的研究

黄陈　张坤东　吴卫东　江　曹俊　裘正军

　　【摘要】　目的

研究细胞窖蛋白１（ｃａｖｅｏｌｉｎ１，Ｃａｖ１）在胰腺癌上皮间质转化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ

免疫荧光技术、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检

ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥＭＴ）和转移中的作用及其相关机制。方法

测Ｃａｖ１及ＥＭＴ分子标记物Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ，ｃａｔｅｎｉｎ，ｖｉｍｅｎｔｉｎ，Ｎｃａｄｈｅｒｉｎ在高转移胰腺癌细胞系β（Ｌ３７，Ｐａｎｃ０２Ｈ７）及低转移胰腺癌细胞系（ＣＯＬＯ３５７，Ｐａｎｃ０２）中的表达，倒置相差显微镜观察上述胰腺癌细胞形态。Ｃａｖ１及相应的空载体质粒转染ＣＯＬＯ３５７细胞，检测Ｃａｖ１及ＥＭＴ分子标记物的表达，并观察细胞形态变化。结果

高转移胰腺癌细胞（Ｌ３７，Ｐａｎｃ０２Ｈ７）Ｃａｖ１及间质细胞标记物

高表达，Ｃ

ＯＬＯ３５

７，Ｐａｎｃ０２）Ｃａｖ１及上皮细胞标记物高表达，间质细胞标记物低表达。Ｃａｖ１质粒转染ＣＯＬＯ３５７细胞后，Ｃａｖ１表达上调，Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ表达ｉｍｅｎｔｉｎ表达升高，且ＣＯＬＯ３５７结论降低而ｖ

升高与胰腺癌ＥＭＴ及转移密切相关。

【关键词】胰腺肿瘤；　窖蛋白１；　肿瘤转移；　上皮间质转化

Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｖｅｏｌｉｎ１ａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒＨｕａｎｇＣｈｅｎ，ＺｈａｎｇＫｕｎｄｏｎｇ，ＷｕＷｅｉｄｏｎｇ，ＪｉａｎｇＴａｏ，ＣａｏＪｕｎ，ＱｉｕＺｈｅｎｇｊｕｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００８０，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＨｕａｎｇＣｈｅｎ，Ｅｍａｉｌ：ｒｉｃｈａｒｄｈｃ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｖｅｏｌｉｎ１（Ｃａｖ１）ａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）ｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅＣａｖ１

（Ｌ３７，Ｐａｎｃ０２Ｈ７）ａｎｄｐｏｏｒｌｙｐｒｏｔｅｉｎａｎｄＥＭＴｍａｒｋｅｒｓｉｎｈｉｇｈｌｙｍｅｔａｓｔａｔｉｃｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ

（ＣＯＬＯ３５７，Ｐａｎｃ０２）ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄｍｅｔａｓｔａｔｉｃｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ

ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｐｈａｓｅｃｏｎｔｒａｓｔｐｈｏｔｏｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓ．ＴｈｅｐｌａｓｍｉｄｓｐｃＤＮＡ３．１ｃａｖｅｏｌｉｎ１ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｖｅｃｔｏｒｐｃＤＮＡ３．１ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＣＯＬＯ３５７ｃｅｌｌｓｂｙＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｖ１ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｅｃａｄｈｅｒｉｎａｎｄｖｉｍｅｎｔｉｎｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＣＯＬＯｌｓｏｂｓｅｒｖｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＬ３７ａｎｄＰａｎｃ０２Ｈ７ｃｅｌｌｓｈａｄｓｔｒｏｎｇｐｏｓｉｔｉｖｅＣａｖ１ｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｍａｒｋｅｒ（ｖｉｍｅｎｔｉｎ，Ｎｃａｄｈｅｒｉｎ）ａｎｄｌｏｗｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍａｒｋｅｒ（Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ，ｃａｔｅｎｉｎ），ｗｈｅｒｅａｓＣＯＬＯ３５７ａｎｄＰａｎｃ０２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈｔｙｐｉｃａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌβｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗｅｒｅｗｅａｋｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎＣａｖ１ｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｏｆｌｏｗｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖｉｍｅｎｔｉｎ，ＮｃａｄｈｅｒｉｎＥｃａｄｈｅｒｉｎ，βｃａｔｅｎｉｎ．ＩｎＣａｖ１ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＣＯＬＯ３５７ｃｅｌｌｓｖｉｍｅｎｔｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｒｅａｓＥｃａｄｈｅｒｉｎｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎｔｙｐｉｃａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｈａｎｇｅｓｏｆＥＭＴ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＯｖｅｒｅｃａｖｅｏｌｉｎ１ｉｓｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｎｅｏｐｌａｓｍｓ；　Ｃａｖｅｏｌｉｎ１；　Ｎｅｏｐｌａｓｍｍｅｔａｓｔａｓｉｓ；　Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ

胰腺癌细胞中Ｃａｖ１表达

　　胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤，早期

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００７６３１Ｘ．２０１４．０７．

基金项目：国家自然科学基金项目（８１１０１８４４，８１２１０１０８０２７）；２０１２０４０）；上海市浦江人才计划项目上海市人才发展资金项目（

１３ＰＪＤ０２４）；上海市卫生局新优青人才计划（ＸＹＱ２０１３０９２）（

作者单位：２０００８０上海交通大学附属第一人民医院普外科，上海市胰腺疾病重点实验室，上海交通大学胰腺癌诊治中心

Ｅｍａｉｌ：ｒｉｃｈａｒｄｈｃ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ通信作者：黄陈，

容易发生侵袭和转移。Ｃａｖ１是细胞膜上ｃａｖｅｏｌｉｎ的主要结构蛋白，参与调节信号转导、跨膜转运和脂质稳态等过程。近期研究表明Ｃａｖ１在多种肿瘤发生发展过程中具有重要作用。然而Ｃａｖ１在胰腺癌ＥＭＴ和转移中的作用及其机制尚不明确。本研究采用免疫荧光技术和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测不同转移能

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力的胰腺癌细胞系中Ｃａｖ１和ＥＭＴ分子标记物的表达情况，并研究其相互关系，探讨Ｃａｖ１在胰腺癌ＥＭＴ和转移中的作用及其机制。

材料与方法

一、材料

胰腺癌细胞系Ｌ３７，Ｐａｎｃ０２Ｈ７，ＣＯＬＯ３５７，Ｐａｎｃ０２由美国安德森癌症中心提供，以上细胞系在含１０％ＦＢＳ、丙酮酸钠、非必需氨基酸、Ｌ谷氨酰胺、ＭＥＭ培养基中培养。Ｃａｖ１，Ｅ维生素的Ｄ

Ｃａｖ１、Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ，ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达情况。转染前１～２ｄ，ＣＯＬＯ３５７细胞以接种于６孔板内，于３７℃，５％ＣＯ待细胞长至孔底８０％～２饱和湿度下培养，ｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ９０％时开始转染。转染方法依据Ｌ使用说明书进行。

结

果

一、Ｃａｖ１在高转移、低转移胰腺癌细胞系中的表达

高转移胰腺癌细胞系（Ｌ３７，Ｐａｎｃ０２Ｈ７）中ｃａｄｈｅｒｉｎ，ｖｉｍｅｎｔｉｎ一抗购自ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司，Ｎｃａｄｈｅｒｉｎ，βｃａｔｅｎｉｎ一抗购自ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司，二抗、标准化内参ＧＡＰＤＨ抗体、ＲＩＰＡ细胞裂解液及电化学发光试剂盒来自ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司。Ｃａｖ１表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ｃａｖｅｏｌｉｎ１及相应的空载体质粒ｐｃＤＮＡ３．１来自美国安德森癌症中心提供，ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ脂质体购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。

二、方法

１．免疫荧光：细胞爬片，２４ｈ后吸取上清，ＰＢＳ冲洗标本３次，４０ｇ