利用邻硝基苯酚-甘油-硫酸分子荧光探针检测葡萄糖1
利用邻硝基苯酚—甘油—硫酸分子荧光探针检测葡萄糖
孙亚琴 王召意
（陇东学院化学系化学教育（1）班）
摘要：本文利用葡萄糖与邻硝基苯酚的氧化还原反应，生成葡萄糖酸和邻氨基苯酚结合丙三醇在硫酸的作用下生成羟基喹啉，增加了荧光强度。定性的对葡萄糖进行了荧光分析的测定。提出了一种快速、简捷、灵敏度比较高的测定葡萄糖的新方法。 方法的线性范围为8～100μg/L，检测限为4μg /L，结果满意。
关键词： 葡萄糖 邻硝基苯酚—丙三醇—硫酸的体系 荧光分析
1 引 言
众所周知，体液中葡萄糖的高低是标志着人体健康状况的重要指标，尤其是糖尿病人的血液葡萄糖监控。葡萄糖浓度的突然升高与降低都预示着一种异常情况的发生。许多葡萄测定的电化学和光化学方法已经被报道并应用于不同样品的分析。虽然检测手段不同，但几乎全部方法都是采用了一个相同的反应机理，即葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下被O2氧化为葡萄糖酸并释放出H2O2，然后通过检测O2浓度的降低或H2O2浓度的升高来间接测定葡萄 糖。不仅酶的活性与反应温度密切相关，而且米氏常数决定了工作曲线范围。几乎所有的样品都要经过不同程度的稀释后才能予以测定。虽然聚氨基甲酸乙酯和有机硅修饰的多孔膜的使用可大大扩展工作曲线的范围，但寻求一种简单直接的测定方法一直是人们努力的目标。
本文利用邻硝基苯酚—甘油—硫酸分子荧光探针可以检测到葡萄糖的存在，随着葡萄糖的增加导致整个系统荧光的增强，可以对葡萄糖进行测定。
2 实 验 部 分
2.1试剂和仪器
试剂：葡萄糖（1μg/ml;称取0.01g葡萄糖溶于100ml二次蒸馏水中，然后稀释100倍）;硝基苯酚（1×10-4mol/L；称取0.145g邻硝基苯酚溶于无水乙醇中,然后稀释100倍）;丙三醇(分析纯);硫酸(1mol/L);无水乙醇(分析纯)
仪器：日本岛津公司的荧光分光光度计(型号:RF5000;编号:03040428)；电子天平（型号：BP221S；分类号：03060116）
2.2实验原理
OH
NO2
2
C6H12O6
OH
NH2
C6H12O7
CH2OH
2OH
2.3实验步骤
首先取0.01g葡萄糖溶解在100ml二次蒸馏水中，取其1ml稀释100倍，再称取0.145g 邻硝基苯酚溶于100ml的无水乙醇中，使其浓度为10-7mol/L，取1ml葡萄糖溶液加入1ml
邻硝基苯酚，使其反映2—3小时后，再加入2ml的丙三醇，再量取1mol/L的硫酸，振荡，充分反应后，放置4～5小时后进行荧光测定，以邻硝基苯酚—丙三醇—硫酸体系为对照实验,于λex=329.6nm,λem=436.8nm,直接读取荧光强度。比较空白实验与反应后试剂的荧光 强度系数。
3 结 果 与 讨 论
3.1激发与发射光谱
(图1 激发光谱图) （图2 发射光谱图）
本实验的光谱图如上图所示
该葡萄糖试剂的激发λex=329.6nm,发射λem=436.8nm。
3.2试剂浓度的选择
经实验发现，最佳试剂浓度为8～100 μg/L,实验均采用40 μg/L。
3.3影响
本文测定体系是基于以下反应
OH
NO2
OH
NH2
C6H12O6
OH
NH2
C6H12O7
2OH
2OH
影响因素包括酸度、各物质（葡萄糖、邻硝基苯酚、丙三醇和硫酸）的用量和实验温度，经过多次测定，得到初步条件为：酸度在pH=1左右，温度为室温若酸度过高，不利于本实验进行。各物质的用量的体积比为葡萄糖:邻硝基苯酚:丙三醇:硫酸=1:1:2:6
3.4结论
本实验讨论的是荧光探针法测定葡萄糖的分析方法。此法比胶束增敏的辣根过氧化物酶催化荧光反应、固定化酶的流动荧光法测定葡萄糖的方法简便、快速、灵敏度较高。
参考文献
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Glucose Determination Based on Fluorescence Reaction By
o-nitrophenol-glycerol-sulfuric acid Reaction System
Yaqin Sun,Zhaoyi Wang
( Department of Chemistry, Longdong University, Qingyang,Gansu, 745000 )
Abstract: This passage uses the oxidation-reduction reaction of glucose with o-nitrophenol,the reaction can produce gluconic and o-aminophenol, then o-aminophenol reacts with glycerol under the system of sulfuric acid, the result is hydroxyquinoline. The effects of fluorescent reaction can be effects at the same time. It also can be used to determinate glucose. This new method is quick, cheap and easily arailable. The linear range of determined is 8-100μg/L and a detection limit of 4μg/L. The result is satisfactory.
Keywords: Glucose, o-nitrophenol-glycerol-sulfuric acid Reaction System, Fluorescence analysis.