培养基的配制过程
培养基的配制过程
计算用量:200ml固体培养基 10g/L 蛋白胨 . 3g/L 牛肉膏 .5g/L NaCl .2% 琼脂粉 称量:托盘天平
溶解:自来水
调pH :自然pH
灭菌:
一般培养基, 121 0C, 15-30min:20min ;
含糖培养基: 112 0C, 15-30min;
易产生沉淀的物质:分别灭菌后再混合
倒平板
灭菌
待灭菌物品的包
装锅、加
加盖 (对角线均匀拧旋
升温、排气(放大气5min
横温121℃、20min
切断电源、冷
开锅取
倒平板
◆ 融化的琼脂培养基, 冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)
平板划线的基本程序
灭菌接种(杀灭接种环沾染的细菌,以免污染标)
沾取菌
接
灭菌接种(杀灭接种环沾染的细菌,以免污染环境)
平板涂布的基本程
灭菌过的移液
吸取菌液0.1ml 滴在培养皿中
用灭菌的涂布棒均匀涂布:
将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动, 使之分布均匀,
然后改变方向沿另一垂直来回推动,平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。
三角铁扒
具体操作步骤:
⏹ (1)加入适量自来水于灭菌锅中(至水位线)。
⏹ (2)放入需要灭菌的东西。
注意:不要摆得太挤,以免影响蒸汽流通和灭菌效果。
⏹ (3)加盖旋紧螺旋,使蒸汽锅密闭不漏气(对角线均匀拧旋)
⏹ (4)打开放气阀,打开电源,自开始产生大气后5分钟(此时蒸汽锅内的冷空气
由排气阀排尽),关紧放气阀,让温度随蒸汽压力上升而上升,当达所需压力时(即温度上升到121℃),控制热源维持所需时间(20分钟),然后停止加热,让其自然冷却。
注意:应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前,必须将锅内的冷空气完全排尽。
(5)待压力降至0磅时,打开排气阀,再打开锅盖,取出灭菌物。
注意:压力未降至0磅时,切勿打开锅盖,否则突然降压,招致培养基沸腾,沾湿棉塞,甚至冲出管外。