对HPLC法有关物质系统适用性建立的体会和建议

D r ug Standards o f Chi na 2010, V ol 11N o 5中国药品标准2010年第11卷第5期323

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对HPLC 法有关物质系统适用性建立的体会和建议

陈 英(广东省药品检验所, 广州

510180)

中图分类号:921 2 文献标识码:A 文章编号:1009-3656(2010) -5-323-2

Suggestion on the Syste m Suitability Test of HPLC in Related Substances

, Chen Y i n g (GuangdongIn stit u te for Drug C on t rol

G uangzhou 510180)

有关物质是包括化学反应的前体、中间体、副产物和降解产物等影响药品纯度的物质。有关物质的分析方法应专属、灵敏。有关物质的检查应尽量采用现代分离分析手段, 使主成分与相关杂质和降解产物均能分开

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1 1 如何寻找测试分离度的化合物

关于如何寻找测试分离度的化合物, 笔者有如

下体会。

1 1 1 如果杂质明确, 且杂质对照品可获得, 则配制主成分与杂质对照品的混合溶液, 进样测试分离度。如 中国药典 2005年版二部品种盐酸曲马多、卡托普利、甲硝唑等。1 1 2 如果不易获得杂质对照品, 但供试品经过一定条件的破坏, 可获得确定的杂质, 则可将供试品不完全定向破坏获得杂质和供试品的混合溶液, 作为系统适用性测试溶液试验供试品与杂质的分离度。头孢类化合物的有关物质测定中使用特定条件的破坏产物作系统适用性的分离度测试较为多见, 但化学合成药品种较少使用。通过对供试品定向破坏产生杂质溶液用于分离度测试, 是较为经济有效的一个方法, 笔者认为值得推广应用。我所在 中国药典 2010年版二部新增品种盐酸赛洛唑啉的有关物质起草中, 利用盐酸赛洛唑啉在碱性条件下, 可定向降解产生杂质A, 用其碱破坏溶液(含主成分和破坏后的降解产物杂质A) 作系统适用性试验的分离度测试。

1 1 3 如果杂质对照品不易获得, 供试品在破坏条件下也无法获得较为确定的杂质, 则可采用供试品的结构相似物、同系物等, 如 中国药典 2005年版二部品种醋酸地塞米松、氢化可的松等少量肾上腺皮质激素品种。结构相似物或同系物之间有较接近的理化性质, 有时往往本身就是供试品的中间体杂质, 用来作为系统适用性的分离度测试也值得推广。1 2 如何配制分离度测试溶液才能有效反映在有关物质检测浓度时的分离度

寻找到合适的化合物用于测试分离度后, 如何合理配制分离测试溶液的浓度是影响系统适用性的关

。 中国药典 2005年版二部有关

物质检查中, 主要采用TLC 和HPLC 法测定。

然而, 我国药典收载的无论是TLC 还是H PLC 的有关物质检查, 在系统适用性试验中, 均存在较大的不足。在H PLC 有关物质检查中, 系统适用性绝大部分只规定主成分色谱峰的理论板数的, 对主成分与杂质是否有效分离(即分离度) 没有明确规定, 有些即使有分离度要求, 但存在分离度试验的供试品溶液浓度不合理的现象; 对检测灵敏度的要求, 仅适用于早期的色谱积分仪, 不适用于现在普遍使用的色谱工作站实际使用情况, 等等。

HPLC 法色谱系统适用性通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子四个指标, 笔者在本文中重点从方法的分离效能和灵敏度两方面, 简述我们在起草标准和日常检验中的对HPLC 法有关物质检查系统适用性的一些体会。1 分离效能

主成分与有关杂质能否有效分离, 是一个方法用于有关物质检查的必要条件。目前, 中国药典 2005年版二部绝大部分品种采用不加校正因子的主成分自身对照法, 色谱系统适用性中往往只规定理论板数而没有规定分离度。在实验中常会发现, 分离度比理论板数更具实用意义, 我所在 中国药典 2010年版品种的起草修订过程中也尤为关注系统适用性中分离度的确定, 尽量将分离度列入系统适用性试验中。

确定分离度, 必须面临两个问题:如何寻找测试分离度的化合物; 如何配制分离度测试溶液。

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, 女, ::81886382。

中国药品标准2010年第11卷第5期 324D r ug Sta ndards o f Chi na 2010, V ol 11N o 5

键。 中国药典 2005年版二部有少量品种, 虽有配

制分离度测试混合溶液, 但都是低浓度的被测物与杂质的混合溶液, 其分离度不能合理真实反映高浓度供试品溶液中含少量杂质时的分离度。如 中国药典 2005年版二部品种盐酸曲马多, 用每1mL 中含盐酸曲马多20 g 和顺式盐酸曲马多6 g 的混合溶液测试分离度应符合规定(即不小于1 5), 实践中, 分离度测试溶液的分离度满足了要求, 但测试高浓度的供试品溶液时, 杂质往往被包入主成分色谱峰内。有人提

[3]

议用含1%杂质量的被测物浓度测试分离度, 当然较科学客观, 但对一些高毒性低限量的杂质, 含量甚至小于0 1%也需控制, 上述提议也有一定局限, 因此, 笔者建议, 可用含标准单个杂质限度量的被测物浓度测试分离度验证系统适用性, 即如果标准规定单个杂质限量为0 5%, 则用含0 5%杂质量的被测物浓度测试; 限度为0 3%, 则用含0 3%杂质量的被测物浓度, 等等。2 灵敏度

分离的杂质能否有效检出的关键是仪器的灵敏度。现版国家药品标准对仪器灵敏度的要求, 是将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液, 作为对照溶液, 进样, 调节检测灵敏度, 使主成分峰为满量程的10%~25%或其峰面积能准确积分。但现在普遍使用的色谱工作站, 具有调节色谱图纵坐标标尺的功能。在实际工作中, 不会有人仅通过调节纵坐标的标尺使主成分峰为满量程的10%~25%, 而并没有真正去调节检测灵敏度。显然, 这种做法不符合药典的要求。对于略低于限度对照的杂质, 可能会因仪器灵敏度不足而无法检出, 此时, 即使调节

图谱的纵坐标, 也不可能显示那些无法检出的杂质, 相当于使用一个放大镜看图谱, 只能看到图谱上能被检出的杂质, 如果有若干略低于限度对照的杂质未被检出, 则调节标尺也不可能看到, 这就可使测得的有关物质总和低于样品中的实际杂质含量。故此, 笔者建议, 对灵敏度的要求, 分两种情况:2 1 有杂质对照品时, 可用外标法控制已知杂质, 直接将杂质对照品配制成标准规定的限度浓度, 进样测试, 仪器灵敏度应能保证限度浓度的杂质检出即可。2 2 用自身对照法控制未知杂质时, 灵敏度试验建议的作法是:配制一份低于限度的自身对照溶液(建议浓度为限度自身对照溶液的10%~20%), 比如, 杂质限度规定为0 5%, 可配制一份0 1%的自身对照溶液, 定量注入液相色谱仪, 规定仪器能有效检出(应能满足定量检测的要求), 否则可通过调大仪器灵敏度、增大进样量或提高浓度等进行调整。灵敏度测试溶液的浓度选择原则一般应低于标准中单一杂质的限度浓度, 但必须能满足定量检测, 并尽量大于检测限。笔者起草修订多个2010年版药典品种, 均尝试采用这种方式进行仪器灵敏度的调整控制, 取得较好的效果。参考文献

[1] 国家药典委员会 中国药典 2005年版 二部[S] 化学工

业出版社, 2005:附录 F

[2] 国家药典委员会 中国药典 2005年版 二部[S] 化学工

业出版社, 2005:附录 D

[3] 谢沐风 如何建立高效液相色谱法测定有关物质的方法[J]

中国医药工业杂志, 2007, 38(1):45-48

中国药典 中容量法测定装量若干问题的商榷

覃志高(广西壮族自治区南宁食品药品检验所, 南宁

530001)

中图分类号:921 2 文献标识码:A 文章编号:1009-3656(2010) -5-324-3

D iscussion about so m e P roble m s i n Dete m ination of Loadi n g Capacity by CapacityM ethod in ChP

Q i n Zh-i gao (GuangxiInstit u te for Foo d and Drug Conrtol ,

Nann i ng 530001)

装量检查是药品质量控制必不可少的一项内容。 中国药典 2005年版二部附录I B 注射剂

[1]

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