双水相萃取
双水相萃取
一 实训目的掌握双水相萃取的原理
及方法。
学习双水相萃取相图的制作。 二 实训原理
双水相萃取法(aqueous two-phase extraction )是利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。高聚物 PEG 和盐(硫酸铵)形成的 互不相溶的两相,倒入牛奶中,蛋白质富集在一相中。 三 实训仪器和药品
试管,离心机,天平,离心管,三角瓶,滴定管,聚乙二醇 2000 (PEG2000),硫酸铵,牛奶。 四 实训步骤
1 PEG2000-硫酸铵双水相体系相图的测定(1) 取 10%PEG2000 溶液 10mL 于三角瓶中;
(2)用 40%硫酸铵溶液装入滴定管中滴定至三角瓶中溶液出现浑浊,记录硫
酸铵消耗的体积。加入 1mL 水使溶液澄清,继续用硫酸铵滴定至浑浊,重复 7~8 次,记录每次硫酸铵消耗的体积,计算每次出现浑浊时体
(3)以硫酸铵的浓度(W/V)为横坐标,PEG 浓度(W/V)为纵坐标,绘制出
PEG2000-硫酸铵双水相体系相图。
2 PEG2000-硫酸铵双水相体系的配制
自行在相图中双水相区选择一个点,根据该点的 PEG2000 浓度和硫酸铵浓度,分别量取适量的 10%PEG2000 溶液和硫酸溶液,混合均匀后以 2500rpm/min 离心 5min 后分相,得到双水相体系(总量约 3mL )。
3 利用 PEG2000-硫酸铵双水相体系萃取分离牛奶中的蛋白质
取 1mL 牛奶装入上述双水相体系中,搅拌均匀,于 2500rpm/min 离心 5min ,静置分层,分别量取上下相的体积。
萃取完成后,如果牛奶中的蛋白质不能被萃取到上相,则证明所选的
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PEG2000 与硫酸铵浓度不对,应重新选择。
五 结果与讨论 1 如果正确地绘制相图。
2 如何根据相图配制双水相体系,并对混合物进行分离。
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