不溶性微粒检查法中国药品检验标准操作规范(2010)

不溶性微粒检查法

不溶性微粒检查法（《中国药典》2010年版二部附录Ⅸ C）系在可见异物检查符合规定后，用以检查静脉注射剂（溶液型注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液）及供静脉注射用无菌原料药中不溶性微粒的大小及数量。

《中国药典》规定了两种检查方法即光阻法和显微计数法。当光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。

第一法 光阻法

1 简述

光阻法是当一定体积的供试液通过一窄小的检测区时，与液体流向垂直的入射光，由于被供试液中的微粒阻挡而减弱，因此由传感器输出的信号降低，这种信号变化与微粒的截面积大小相关，再根据通过检测区供试液的体积，计算出每1ml供试液中含10µm以上（≥10µm）及含25µm以上（≥25µm）的不溶性微粒数。

2 实验环境、仪器与用具

2.1 实验环境 实验操作环境应不得引入外来微粒，测定前的操作在层流净化台中进行。玻璃仪器和其他所需的用品均应洁净、无微粒。本法所用微粒检查用水（或其他适宜溶剂），使用前须经不大于1.0μm的微孔滤膜滤过。

2.2 仪器装置 光阻法不溶性微粒测定仪通常包括定量取样器、传感器和数据处理器三部分。测量粒径范围为2~100μm，检测微粒浓度为0~10000个/ml。不溶性微粒测定仪器应定期校正与检定（至少每6个月校正一次），并符合规定。

3 操作法（应在符合2.1项条件下进行）

3.1 供试品检查前的准备

3.1.1 取50ml微粒检查用水（或其他溶剂），经微孔滤膜（一般孔径为0.45μm）滤过，置于洁净的适宜容器中，旋转使可能存在的微粒均匀，静置待气泡消失。按光阻法项下的检查法检查，每10ml中含10μm以上（≥10μm）的不溶性微粒应在10粒以下，含 25μm以上（≥25μm）的不溶性微粒应在2粒以下。否则表明微粒检查用水（或其他溶剂）、玻璃仪器或实验环境不适于进行微粒检查，应重新进行处理，检测符合规定后方可进行供试品检查。

3.1.2 供试品应事先除去外包装，并用净化水将容器外壁冲洗干净，置适宜实验环境中备用。

3.2 检查法

3.2.1 标示装量为25ml或25ml以上的静脉用注射液或注射用浓溶液 除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，先倒出部分供试品溶液冲洗开启口及取样杯，再将供试品溶液倒入取样杯中，静置2min或适当时间脱气，置于取样器上（或将供试品直接置于取样器上）。开启搅拌，使溶液混匀（避免气泡产生），依法测定至少3次，每次取样应不少于5ml，记录数据；另取至少2个供试品，同法测定。每个供试品第一次数据不计，取后续测定结果的平均值计算。

3.2.2 标示装量为25ml以下的静脉用注射液或注射用浓溶液 除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，静置2min或适当时间脱气，小心开启容器，直接将供试品容器置于取样器上，开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免气泡产生），由仪器直接抽取适量溶液（以不吸入气泡为限），测定并记录数据；另取至少3个供试品，同法测定。第一个供试品的数据不计，取后续测定结果的平均值计算。 也可采用适宜的方法，在层流净化台上小心合并至少3个供试品的内容物（使总体积不少于25ml），置于取样杯中，静置2min或适当时间脱气，置于取样器上，开启搅拌，使溶

液混匀（避免气泡产生），依法测定至少4次，每次取样应不少于5ml。第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，根据取样体积与每个容器的标示装量体积，计算每个容器所含的微粒数。

3.2.1和3.2.2项下的注射用浓溶液如黏度太大，不便直接测定时，可经适当稀释，依法测定。

3.2.3 静脉注射用无菌粉末 除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，小心开启瓶盖，精密加入适量微粒检查用水（或适宜的溶剂），小心盖上瓶盖，缓缓振摇使内容物溶解，静置2 min或适当时间脱气，小心开启容器，直接将供试品容器置于取样器上，开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免气泡产生），由仪器直接抽取适量溶液（以不吸入气泡为限），测定并记录数据；另取至少3个供试品，同法测定。第一个供试品的数据不计，取后续测定结果的平均值计算。

也可采用适宜的方法，取至少3个供试品，在层流净化台上用水将容器外壁洗净，小心开启瓶盖，分别精密加入适量微粒检查用水（或适宜的溶剂），缓缓振摇使内容物溶解，小心合并容器中的溶液（使总体积不少于25ml），置于取样杯中，静置2 min或适当时间脱气，置于取样器上。开启搅拌，使溶液混匀（避免气泡产生），依法测定至少4 次，每次取样应不少于5ml。第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，计算每个容器所含的微粒数。

3.2.4 供注射用无菌原料药 按品种项下规定，取供试品适量（相当于单个制剂的最大规格量），置取样杯或适宜的容器中，精密加入适量微粒检查用水（或适宜的溶剂），缓缓振摇使内容物溶解，静置2 min或适当时间脱气，小心开启容器，将供试品容器置于取样器上，开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免气泡产生），由仪器直接抽取适量溶液（以不吸入气泡为限），测定并记录数据；另取至少3份供试品，同法测定。第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，计算每份所含的微粒数。

4 记录与计算 记录应包括所用仪器型号、样品包装情况、检测数量以及注射用无菌粉末和供注射用无菌原料药的溶解情况等，根据微粒测定仪数据处理器打印出相应的数据，计算出供试品每1ml（或每个容器或每份样品）中所含10µm以上（≥10µm）及含25µm以上（≥25µm）的不溶性微粒数。

5 注意事项

5.1 光阻法不适于黏度过高和易析出结晶的制剂，如乳剂、胶体溶液、混悬液、脂肪乳、甘露醇注射液等，也不适用于进入传感器时容易产生气泡的制剂（如碳酸盐缓冲液制成的制剂）。对于一些溶解性差得样品，样品在管道中与水相混时，可能会在局部析出沉淀，这不仅会使检查结果偏高，也可能造成管路堵塞，出现该种情况时应考虑采用显微计数法。

5.2 供试品的检查数量 为确保检查结果具有统计学意义，除另有规定外，一般应取供试品3瓶（支）以上进行不溶性微粒检查。在多支样品的测定过程中，应尽量保持操作一致性（如容器翻转次数、取样方式、除气泡方式、搅拌速度等），以确保测定结果的可靠性。

5.3 对于小容量注射液，可以采用直接取样法测定，也可以采用多支内容物合并法测定。直接取样法可考察多支样品检查结果的重现性，体现各容器间的差异。当选用直接取样发测定时，为避免供试品溶液与仪器管路中的水在相溶过程中可能产生的气泡、乳光等导致测定数据偏高的现象，应将前几个容器的测定数据弃去，使供试品溶液充满管路，然后读取后续容器的测定数据作为供试品的测定结果，在小容量注射液直接取样的检测过程中，一定要避免吸入气泡。一旦吸入气泡，应使用微粒检测用水或其它适宜溶剂对管路进行充分清洗，直至气泡消失。当采用合并法取样时，其关键步骤在于安瓿的打开和内容物的取出。玻璃安瓿是小容量注射剂的主要包装形式，虽然通常都为易折安瓿，但在实际操作中很多安瓿并不“易折”，尽管用砂轮割锯安瓿会大量增加微粒，但有时却是开启安瓿时的必要操作步骤。实

际操作中如果在割锯之后直接掰开，会大量引入微粒。经实验比较，认为在保证开启安瓿的情况下应尽量减少划痕的长度和力度，掰开前增加用水清洗的操作过程。安瓿打开后，大量微粒集中于玻璃断口处，经实验比较，认为用干净注射器抽取转移的方法可以减少瓶口碎屑的干扰。此外，采用较粗的针头抽取溶液，可减少气泡的产生。

5.4 注射用无菌粉末一般先用微粒检查用水或适宜溶剂溶解后，再采用直接取样法或合并取样法测定。在某些品种（如头孢替唑钠、头孢曲松钠等）的检测中发现，同一批样品采用不同体积的溶剂溶解后，微粒测定结果差异较大，这可能与药物性质等因素有关。经试验研究，这些品种在某一个浓度范围内，不溶性微粒数与主药浓度成线性关系；故这些品种一般在正文项下均规定了不溶性微粒测试溶液的浓度，应依法操作。

5.5 当光阻法测定结果不符合规定时，应采用显微计数法进行复验，并以显微计数法为判断依据。

6 结果与判定

6.1 标示装量为100ml或100ml以上的静脉用注射液 除另有规定外，每1ml 中含10µm以上（≥10µm）的微粒不得过25 粒，含25µm以上（≥25µm）的微粒不得过3 粒，判为符合规定。

6.2 标示装量为100ml以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末、注射用浓溶液及供注射用无菌原料 除另有规定外，每个供试品容器（份）中含10µm以上（≥10µm）的微粒不得过6000粒，含25µm以上（≥25µm）的微粒不得过600粒，判为符合规定。

第二法 显微计数法

1 简述

显微计数法是将一定体积的供试液滤过，使所含不溶性微粒截留在微孔滤膜上，在100倍显微镜下，用经标定的目镜测微尺分别测定其最长直径在10μm以上（≥10μm）和25μm以上（≥25μm）的微粒，根据过滤面积上得微粒总数，计算出被检供试液每1ml（或每个容器）中含不溶性微粒的数量。

2 实验环境、仪器和用具

2.1 实验环境 实验操作所处环境应不得引入外来微粒，可以在超净室、层流净化台或符合要求的洁净实验室中进行。玻璃仪器在和其他所需的用品都应洁净。本法所用微粒检查用水（或其他适宜溶剂），使用前须经不大于1.0μm的微孔滤膜滤过。

2.2 显微镜 双筒大视野显微镜，目镜内附标定的测微尺（每格5~10μm）。坐标轴前后、左右移动范围均应大于30mm，显微镜装置内附有光线投射角度、光强度均可调节的照明装置。检测时放大100倍。

2.3 镜台测微尺（用于目镜测微尺的标定）。

2.4 微孔滤膜 白色，孔径0.45μm、直径25mm或13mm，一面印有间隔3mm的格栅；膜上如有10μm以上（≥10μm）的不溶性微粒，应在5粒以下，并不得有25μm以上（≥25μm）的微粒，必要时，可用微粒检查用水冲洗使符合要求。

2.5 直径25mm（或13mm）夹式定量滤器。

2.6 平皿。

2.7 平头无齿镊子。

2.8 计数码器。

3 操作方法（应在符合2.1项下条件进行）

3.1 供试品检查前的准备

3.1.1 取50ml微粒检查用水（或其他溶剂），经微孔滤膜（一般孔径为0.45μm）滤过，置于洁净的适宜容器中，旋转使可能存在的微粒均匀，静置待气泡消失。按显微计数法项下的检查法检查，每50ml中含10μm以上（≥10μm）的不溶性微粒应在20粒以下，含 25μm以上（≥25μm）的不溶性微粒应在5粒以下。否则表明微粒检查用水（或其他溶剂）、玻璃仪器或实验环境不适于进行微粒检查，应重新进行处理，检测符合规定后方可进行供试品检查。

3.1.2 用水冲洗平皿，再用净化水反复冲洗，沥干，置实验环境中备用。

3.1.3 在净化台上，将滤器用净化水冲洗至洁净，用平头无齿镊子夹取2.4项下符合要求的测定用微孔滤膜置滤器托架上，用滤器夹固定滤器，倒置，反复用净化水冲洗滤器内壁，沥干后安装在抽滤瓶上备用。

3.1.4 待检样品应事先除去外包装，并用净化水将容器外壁冲洗干净，置适宜实验环境中备用。

3.2 检查法

3.2.1 标示装量为25ml或25ml以上的静脉用注射液或注射用浓溶液 除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，在层流净化台上小心翻转20次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，用适宜的方法抽取或量取供试品溶液25ml，沿滤器内壁缓缓注入经预处理的滤器（滤膜直径25mm）中。静置1min，缓缓抽滤至滤膜近干，再用微粒检查用水25ml，沿滤器内壁缓缓注入，洗涤并抽滤至滤膜近干，然后用平头镊子将滤膜移置平皿上（必要时，可涂抹极薄层的甘油使滤膜平整），微启盖子使滤膜适当干燥后，将平皿闭合，置显微镜载物台上。调好入射光，放大100 倍进行显微测量，调节显微镜至滤膜格栅清晰，移动坐标轴，分别测定有效滤过面积上最长粒径大于10μm和25μm的微粒数。另取至少两个供试品，同法测定，计算测定结果的平均值。

3.2.2 标示装量为25ml以下的静脉用注射液或注射用浓溶液 除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，在层流净化台上小心翻转20 次，使混合均匀，立即小心开启容器，用适宜的方法直接抽取每个容器中的全部溶液，沿滤器内壁缓缓注入经预处理的滤器（滤膜直径13mm）中，照上述3.2.1同法测定。

3.2.3 静脉注射用无菌粉末及供注射用无菌原料药 除另有规定外，照光阻法中检查法的3.2.3或3.2.4制备供试品溶液，同上述3.2.1操作测定。

4 记录与计算

4.1 记录 记录应包括所用仪器型号；供试品包装情况，检测数量；测定用滤膜处理前后微粒水平，微粒检查用水来源或制备情况与所含微粒数。

4.2 计算 用手揿计数码器分别统计滤膜上直径10µm以上（≥10µm）的微粒数，以及直径25µm以上（≥25µm）的微粒数，计算，即得每1ml供试品溶液（或每个容器或每份供试品）中所含10µm以上（≥10µm）及含25µm以上（≥25µm）的不溶性微粒数。

5 注意事项

5.1 各种形状的微粒应以实测到的最长粒径计算，重叠微粒和聚合胶体微粒均以单个微粒计数；结晶析出不属于检测范围，故不应计算。

5.2 必要时可另取微粒检查用水（或其他溶剂）25ml照3.2.1项下自“沿滤器内壁缓缓注入，洗涤并抽滤至滤膜近干”起，依法操作，此项空白试验仅可视作对操作环境、实验用具的认证，所得数据不必在供试品检查结果中扣除，但对检测结果的正确与否有密切关系。此项试验必须检测全滤膜，达到3.1.1的要求后方可进行样品检测。

5.3 本法不适用于乳液型和混合型注射剂，对于黏度过高者，光阻法和本法均无法测定时，可用适宜的溶剂经适量稀释后测定。

5.4 供试品的检查数量：为确保检查结果具有统计学意义，除另有规定外，一般应取

供试品3瓶（支）以上进行不溶性微粒检查。

6 结果与判定

6.1 标示装量为100ml或100ml以上的静脉用注射液 除另有规定外，每1ml 中含10μm以上（≥10µm）的微粒不得过12粒，含25μm以上（≥25µm）的微粒不得过2粒，判为符合规定。

6.2 标示装量为100ml以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末、注射用浓溶液及供注射用无菌原料 除另有规定外，每个供试品容器（份）中含10μm以上（≥10µm）的微粒不得过3000粒，含25μm以上（≥25µm）的微粒不得过300粒，判为符合规定。