口腔生物学重点

第一章 口腔微生物学（4T ）

1. 生态系及其建立的中心原则。（p1）

生态系定义：生物之间、生物与其环境之间的相互关系称为生态系（ ecosystem ） 生态系建立的中心原则——是生物体对其赖以生存环境有影响，

例如：最先定植的菌种为先锋菌，先锋菌定植后改变了环境，给后继定制的细菌创造了定植的条件，，是只能存活于新的环境中。（先锋菌~定植~环境改变~12h后二次细菌定植~达到动态平衡形成新的生态系）（环境变化—物种影响—适者生存—环境变化）

不适者淘汰

2. 正常菌丛对机体的双重作用。（p2）

（有益）在一定环境中，当机体与正常菌丛之间保持着相互平衡的状态时，正常菌丛显示对宿主起着有益的作用；

（有害）但当环境中的某些因素干扰了这个平衡状态时，如放射线照射，过量激素的应用，抗生素的长期使用等而导致菌群失调，这就为正常菌群提供了显示其有害作用的机会，这些原来无致病性的或毒力很弱的细菌，遂成为机会致病菌而引起内源性感染疾病，如：长期服用抗生素所致的葡萄球菌假膜肠炎，口腔中的念珠菌病。

3. 口腔生态系的决定因素。（p2）

口腔生态系决定因素定义：决定不同微生物能在不同口腔生态系中生存的因素称为（一）物理化学因素

一般细菌可在-5℃ ~55℃ 环境中生存

口腔食品温度变化幅度± 60º 嗜冷菌 45 ℃ 嗜温菌 25 ~ 37 ℃

绝对需氧菌Obligate aerobes 兼性厌氧菌facultative anaerobes

绝对厌氧菌Obligate anaerobes 耐氧厌氧菌aerotolerant anaerobes

微嗜氧菌microaerophiles

pH 值

口腔pH 以唾液为代表5.0~8.0

e ．营养物质的利用

唾液 龈沟液 血素(hemin) 牙龈卟啉菌生长

酶类 透明质酸酶，蛋白酶等

（二） 宿主因素（唾液和龈沟液）

a ． 抗体 唾液中主要为sIgA 龈沟液中主要为IgG

b ． 蛋白质 糖蛋白 粘蛋白 富脯蛋白 富酪蛋白 过氧化物酶 乳铁蛋白

溶菌酶

（唾液功能：润滑 维持口腔粘膜完整性 软组织修复 维持生态平衡 凝集作

用 抗菌作用）

（三） 细菌因素

a ． 细菌附着（钙桥学说，识别系统学说）

1. 粘附(attachment)

2. 细菌间作用 聚集（aggregation ） 共聚集（co-aggregation ）

b ．细菌间作用

（四）宿主可控制因素

饮食习惯：糖消耗频率、量、消耗方式

口腔卫生：机械去除及自身口腔卫生

4. 与口腔疾病相关的两种主要菌种的生物学特征和致病性。

口腔菌属：葡萄球菌属(Staphylococcus) 口腔球菌属(Stomatococcus)

链球菌属(Streptococcus) 奈瑟球菌属(Neisseria)

韦荣球菌属(Veillonella) 放线菌属(Actinomyces)

消化球菌属(Peptococcus)和消化链球菌属(Peptostreptococcus)

优杆菌属(Eubacterium) 丙酸杆菌属(Propionibacterium)

举例：

变形链球菌群

（1）生物学特性：直径0.6～1.0μm，G +球菌，链状排列，属微需氧菌或兼性厌氧菌，人类口腔为变链菌和远缘链球菌。

（2）致病性：A 、胞壁表面物质利于细菌粘附；B 、菌群产酶在糖代谢中起主导作用；C 、菌群产酸可使釉质脱矿。因此认为是主要致龋菌。

血链球菌：

（1）生物学特性:直径0.8～1.2μm，球形G +球菌，呈长链状排列，多为α溶血型，能产生过氧化氢

（2）致病性：取初定植在牙菌斑中先锋菌，能利用蔗糖合成胞外多糖，对细菌生态连续起重要作用。

第二章 口腔生物化学（4T ）

1. 唾液的诊断作用（简述）。（p54）

A.1-诊断口腔疾病：复发性腮腺炎、龋病、牙周病

2-全身性疾病：Sjogren 、糖尿病、乙肝、甲肝、HIV 、口腔癌、细菌性阴道病、乳腺癌 3-药物监测：酒精、咖啡因、苯丙胺、鸦片类

4-测定激素水平：类固醇激素分析

5-体内环境毒物：汞、铅中毒

2. 试述菌斑—牙面矿物质转换与PH 的关系。（p69）

（菌斑与牙面间矿物质转换是在菌斑液中进行的

菌斑矿物质高于唾液

1、菌斑是一种离子屏障，阻挡离子扩散

2、菌斑中矿物质与蛋白质结合

3、菌斑细菌可结合一些离子

4、菌斑中矿物质多以磷酸盐形式存在

如：羟磷灰石、氟磷灰石，PH 值可调节磷酸盐存在形式）

A ．菌斑pH 与龋病

ph 降低——》牙釉质溶解上升

ph 上升——》牙釉质溶解下降

——在菌斑釉质界面，随着PH 的变化不断进行磷灰石溶解，再沉积，如：长期的PH 值低状态，即长期受到酸的攻击，则溶解再沉积不再完全可逆，导致钙、磷流失，最后表层破坏，细菌入侵最后形成龋病。

B. 菌斑pH 与牙结石

菌斑内磷灰石晶体的溶解性变化可归纳为：

正常——》稳定

ph 降低——》磷灰石溶解上升

ph 上升——》磷灰石溶解下降

牙石形成机制尚不清楚，唾液和龈沟液矿物质是菌斑无机物的主要来源，菌斑基质可浓缩唾液的钙磷，在高PH 时形成磷酸钙晶体，导致菌斑钙化，形成牙石，分为龈上牙石，龈下牙石。

3. 试述氟对牙齿发育的影响。（p75）

A. 氟在生物矿化中的作用(增加晶体结构的稳定性)

降低牙釉质的溶解性

增加晶体结构的稳定性

改善牙的形态发育

增强釉质晶体的防龋能力

促进牙釉质再矿化

影响发育期釉质晶体的矿化

B. 氟对釉质晶体形成影响:

1、影响基质蛋白的合成、分泌

2、阻碍釉原蛋白的移除

3、干扰釉质晶体矿化

氟本身可加速钙离子向釉质晶体沉积，但过量的氟，使局部釉质晶体出现过度矿化, 在过度矿化区周围，钙离子显著降低，基质矿化停滞，晶体形态异常。而且过度矿化不可逆转。不能形成正常釉柱，排列方向异常.

4. 试述口腔生物化学研究中钙测定方法及原则。(p77)

A. 方法：

1．MTB （甲基麝香草酚蓝法）

原理：甲基麝香草酚蓝与钙形成深蓝色甲基麝香草酚蓝钙复合物，可用比色计直接测定 (在试剂中加入8-羟基奎宁以去除镁的干扰，同时试剂中加入少量的EDTA 作掩蔽剂，消除试验器皿和试剂中的镁污染。

试剂（显色基础液、MTB 试剂、反应液、钙标准存储液、钙标准应用液）

测定步骤

5．葡萄糖代谢的四种途径比较：

第三章 口腔疾病分子生物学(6T)（重点——基因表达这部分）

1. 聚合酶链反应（PCR ）的原理是什么？（p104）

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）是体外扩增DNA 序列的技术。

原理：

DNA 的合成是以一股DNA 单链为模板，在引物（primer ）的存在下，DNA 多聚酶沿模板以5’—3’方向延伸引物的过程。

PCR 是利用DNA 合成的原理，合成两个与靶DNA 两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA 的重复合成。PCR 扩增包括三个步骤：

1、 DNA 变性 ：通过加热使靶DNA 双链解离成两条单链。

2、 引物与靶DNA 退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至

靶DNA 两条链的3’末端。

3、 引物延伸： 在DNA 聚合酶催化下，引物沿着靶DNA 3’末端向 5’末端延伸。

2. 哪些基因突变可引起釉质发育不全和牙本质发育不全？ （p109）

釉质发育不全：AMEL 基因。ENAM 基因，MMP20 KLK4。

牙本质发育不全：DPP 与DSP ，DSPP （牙本质涎磷蛋白基因）：牙本质基质蛋白（DMP1）骨涎蛋白（BSP ）骨钙素 多组织非特异性蛋白（PGs 、OPN ）

3. 乳光牙本质的致病基因情况（p125）

牙本质发育不全（DGI ）

DGI-I ：全身广泛的I 型胶原突变

DGI-Ⅱ：传统所指遗传性乳光牙本质

DGI-Ⅲ：特殊遗传乳光牙本质

Ⅱ 型牙本质发育不全，为独立发生在牙本质的发育异常，患牙表现为不透明的灰兰色，表层釉质由于缺乏内层牙本质支持，易折断脱落，牙本质也很快磨损，牙冠变短，髓腔变窄或闭塞，X 线显示根管变窄或消失，易发根折或根尖周炎。是染色体

附近DSPP 基因突变引起的，这种病变可同时伴有渐进性高频耳聋。 4q21

4. 牙本质有机成分中胶原和非胶原蛋白的特点是什么？（p112）

牙本质有机物分类

1）

IgG ，白蛋白，a2HS 糖蛋白······

A ． 胶原

由成牙本质细胞分泌，新分泌的胶原为未矿化蛋白，紧贴成牙本质细胞层，随着细胞不断分泌基质，成牙本质细胞不断后退，数小时后胶原已距牙本质细胞层约10~15чm.并开始矿化。因此牙本制裁的形成过程就是新生牙本质不断形成、不断矿化过程。在新生牙本质基质中Ⅰ型胶原纤维以Ⅳ型为核心交联成网状，纤维间隙较大，为基质矿化提供所需的支架和空间。胶原在牙本质形成中的另一个作用是在牙本质基质矿化前沿与牙本质非胶原蛋折结合，形成大分子多聚体，改变分子的表面构型，有利于板状羟磷灰石的形成和生长。

B ． a. 牙本质非胶原蛋白

1、牙本质磷蛋白(DPP)特性

（1）高度磷酸化（2）强阴离子特性（3）对钙有高度亲和力

（4）促进和抑制矿化双重作用（5）对Ⅰ型胶原有高度亲和力

（6）合成后可快速聚于矿化前沿

2. 牙本质涎蛋白（DSP ）

（1）、分子量53KD 的糖蛋白

（2）、存在于成牙本质细胞及牙本质中

（3）、在前釉细胞中有短暂表达

（4）、能促进羟磷灰石晶体生长

（5）、可能与牙胚发育的信号传递及调节有关

5. 名词解释

Southern hybrilization（southern 杂交）(P104)

是指先用凝胶电泳分离经限制性核酸内切酶消化的DNA 片段，然后在原位将DNA

片段转移至固相基质如硝酸纤维素膜上，经变性及干烤固定，用核酸探针进行杂交，经放射自显影显示杂交效果。

southern 杂交最大优点：

能根据杂交带的位置判断待测样品中与探针杂交的DNA 片段的分子量。

6. 谈谈你对Dolly 的看法（补充材料）

D. 多莉成功的理论意义:

①多莉的诞生证明高度分化成熟的哺乳动物乳腺细胞，仍具有全能性，还能像胚胎细胞一样完整地保存遗传信息，这些遗传信息在母体发育过程中并没有发生不可回复的改变，还能完全恢复到早期胚胎细胞状态。最终仍能发育成与供体成体完全相同的个体。以往的遗传学认为，哺乳动物体细胞的功能是高度分化了的，不可能重新发育成新个体。与这一理论相反，多莉终于被克隆出来了。它的诞生推翻了形成了上百年的上述理论，实现了遗传学的重大突破

②成功地找到了供体核与受体卵细胞质更加相容的方法。过去对高度分化细胞的核移植不能成功的原因，是供体核与受体卵细胞周期的不兼容性，因而发生染色体异常、细胞核可能发生额外的DNA 复制和早熟染色体聚合成非整倍体或者发生异常。克隆多莉的实验解决了高度分化了的体细胞核移植成功的关键性技术

③以往用于基因移植的方法比较原始的，仅能插入一个基因并且很不精确。而克隆多莉方法可使移植的细胞在成为核供体之前诱发精确的遗传变化，又能精确地植入基因。然后选择技术帮助准确地挑选出那些产生令人满意变化的母细胞来作为核供体，这样就能用同一个体的许多细胞繁殖出遗传表现完全相同的动物个体。

E. 克隆技术成功的实践意义:

①应用克隆技术，繁殖优良物种。常规育种周期长还无法保证100％的纯度；用克隆这种无性繁殖，就能从同一个体中复制出大量完全相同的纯正品种，且花时少、选育的品种性状稳定，不再分离。

②建造动物药厂，制造药物蛋白。利用转基因技术将药物蛋白基因转移到动物中并使之在乳腺中表达，产生含有药物蛋白的乳汁，并利用克隆技术繁殖这种转基因动物，大量制造药物蛋白。

③建立实验动物模型，探索人类发病规律。

④克隆异种纯系动物，提供移植器官。采用克隆技术，可先把人体相关基因转移到纯系猪中，再用克隆技术把带有人类基因的特种猪大量繁殖产生大量适用器官，且能同时改变器官的细胞表面携带人体蛋白和糖分特性，当猪的器官植入病人体内时，免疫排异反应减弱，成功率提高，用起来也更加安全。

⑤拯救濒危动物，保护生态平衡。克隆技术的应用可望人为地调节自然动物群体的兴衰，使之达到平衡发展。

F. 如果出论述题，可自己发挥增加一些关于克隆的负面评论，例如：对伦理学的阻碍

第四章 口腔免疫学（9T ）（重点——p129---134）

1. 唾液中非特异防御物质主要有哪些？其作用是什么？（p129）

A ． 非特异性物质：粘蛋白、溶菌酶、唾液过氧化物酶、富组蛋白等。

B ． 粘蛋白（mucin ）

产生： 颌下腺 小唾液腺

舌下腺 粘液细胞

作用： 抗干燥

防损伤

抵御微生物

粘蛋白有两种：

一是高分子量的MG Ⅰ。与口腔粘膜紧密联结，能捕捉唾液防御物质，如SIGA ，构成一种屏障，抵御毒素（如免疫缺陷病毒、疱疹病毒）、水解酶酸及致癌物穿通。因此可保护粘膜，免受某些病毒感染。

一是低分子量的MG Ⅱ，可阻止某些细菌定植，同时可与MGI 参与牙面获得性膜的形成。

C ．溶菌酶 (Lysozyme)

溶菌酶是一种低分子量蛋白质，存在于多种组织细胞、血清、泪液、鼻腔

液、唾液及龈沟液等外分泌液中。通过水解G+菌胞壁中的糖苷键，导致细菌溶解。可以杀灭口腔常见的G+、G-菌，如葡萄球菌，奈瑟菌等。还可以不依赖酶解活性杀伤口腔真菌。

D ．富组蛋白 Histidim-rich proteins HRPS HRPs ：是一组由唾液腺上皮细胞产

生的碱性富含组氨酸的螺旋多肽

， 对白念和变链有杀伤作用

富脯蛋白 Proline-rich proteins PRPS PRPs ：有抑制牙龈卟啉单胞菌蛋白酶作用，

改变微生物粘附

E. 唾液过氧化物酶：是由唾液腺上皮细胞产生的亚铁血红素酶，与唾液中过氧化氢和硫氰

酸盐构成有效的抗菌系统。利用细菌产生的H2O2将SCN-氧化成OSCN-

（次硫氰酸盐）

通过次硫氰酸盐起作用

1、氧化细菌蛋白的巯基抑制细菌生长

2、增加细菌对其他抗菌成分的敏感性

3、 增强氟化物对变链菌的抗菌活性

4. 减少H 2O 2对粘膜的损伤作用

F ．乳铁蛋白(Lactoferrin)

产生：浆液细胞 中性粒细胞

作用：抗菌

2. 口腔非特异免疫系统的组成和作用

A ．非特异免疫系统：又称天然免疫或固有免疫。是人类在漫长进化过程中获得的一种遗传特性，是人一生下来就具有能力。

包括： 组织屏障（皮肤和黏膜系统、血脑屏障、胎盘屏障等）；

固有免疫细胞（吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等）；

固有免疫分子（补体、细胞因子、酶类物质等）。

B ．发挥保护功能的几道屏障首先是外围屏障。皮肤粘膜是机体第一道防线，包括：

皮肤粘膜的机械阻挡作用和附属物（如纤毛）的清除作用；皮肤粘膜分泌物（如汗腺分泌的乳酸、胃粘膜分泌的胃酸等）的杀菌作用；体表和与外界相通的腔道中寄居的正常微生物丛对入侵微生物的拮抗作用等。其次是内部屏障。抗原物质一旦突破第一道防线进入机体后，即遭到机体内部屏障的清除，包括：淋巴和单核吞噬细胞系统屏障；正常体液中的一些非特异性杀菌物质；血脑屏障和胎盘屏障等。

淋巴和单核吞噬细胞系统是机体的第二道防线。微生物进入机体组织以后，多数

沿组织细胞间隙的淋巴液经淋巴管到达淋巴结，但淋巴结内的巨噬细胞会消灭它们，阻止它们在机体内扩散，这就是淋巴屏障作用。如果微生物数量大，毒力强，就有可能冲破淋巴屏障，进入血液循环，扩散到组织器官中去。这时，它们会受到单核吞噬细胞系统屏障的阻挡。这是一类大的吞噬细胞。机体内还有一类较小的吞噬细胞，其中主要的是中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。它们不属于单核吞噬细胞系统，但与单核吞噬细胞系统一样，分布于全身，对入侵的微生物和大分子物质有吞噬、消化和消除的作用。在正常体液中的一些非特异性杀菌物质，如补体、调理素、溶菌酶、干扰素、乙型溶素、吞噬细胞杀菌素等，也与淋巴和单核吞噬细胞系统屏障一样，是机体的第二道防线，有助于消灭入侵的微生物

血脑屏障主要是由软脑膜、脉络膜和脑毛细管组成，可以阻止微生物等侵入脑脊

髓和脑膜内，从而保护中枢神经系统不受损害。血脑屏障随个体发育而逐渐成熟，婴幼儿容易发生脑脊髓膜炎和脑炎，就是血脑屏障发育不完善的缘故。胎盘屏障是由母体子宫内膜的基蜕膜和胎儿绒毛膜滋养层细胞共同组成的。这个屏障既不妨碍母子间的物质交换，又能防止母体内的病原微生物入侵胎儿，从而保护胎儿的正常发育。

3. 口腔免疫反应的特点（p133）

1、有菌环境

2、与粘膜完整性密切相关（口腔的健康与粘膜和皮肤，尤其是口腔粘膜的完整性密切相关，它构成了阻挡细菌分侵的物理屏障，不仅使口腔，也使机体免遭细菌的入侵 ）

3、口腔分泌液有重要作用（

4、免疫应答以局部为主

5、在牙髓及根尖周病变以控制局部为主

4. 特异性SigA 的形成过程及其生物学特性是什么？(p130)？？？

SIgA 分子结构

SIgA 双聚体分子

SC 分子：由唾液腺导管上皮和腺泡上皮细胞合成的分泌成分

能增加SIgA 分子稳定性，还能帮助SIgA 通过腺上皮或粘膜表面

J 链分子：是由浆细胞合成的，当Ig 分泌时将两个IgA 单体连接成IgA 双聚体类型 α1 α2来源：

肠相关淋巴样组织的浆细胞

SIgA 装配：

1、浆细胞合成H 链、L 链、J 链

2、J 链将两个IgA 连接成双聚体IgA

3、双聚体IgA 通过固有层间隙到达上皮细胞间隙

4、SC 与之结合成小泡，经胞饮作用摄入胞内

5、结合为稳定的S IgA分子

6、经胞吐作用排入口腔

SIgA 功能：（p131）

粘膜免疫

抗原调节，免疫排除

口腔耐受

介导抗原分泌

5. 免疫防龋的概念和分类（p136）

（一）自动免疫：人工接种方法给机体输入抗原，刺激机体产生免疫应答，增强抗病力，是当前龋病免疫的主要方法

（二） 被动免疫：给机体输入其他个体产生免疫效应物质，非自身产生，易被清除，持

6. 牙周病的免疫学发病原理（p142）

现已公认，牙周病是牙周病原菌和宿主免疫防御长期相互作用所致，中性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞在此过程中起着重要作用.

简而言之：

急性相炎细胞—中性粒细胞

保护作用，控制龈沟内牙周微生态

慢性相炎细胞—淋巴细胞和巨噬细胞

破坏作用—切断和隔离局部感染，避免 引起全身感染和威胁生命

7. 口腔颌面部肿瘤的生物治疗及新进展（p149）

生物治疗（BMR ）：目的：调整失调免疫状态，控制肿瘤生长

生物治疗—生物反应调节剂，是一种新兴的免疫学治疗手段，包括：免疫兴奋剂、免疫加强

剂、免疫调节剂。 可以作用于单核-巨噬细胞、T 细胞、NK 细胞

目前研究热点：

（IL-2、IFN 、TNF 等生物调节剂开发

LAK 和DNL 等过继性免疫治疗及基因治疗

单克隆抗体及肿瘤疫苗应用）

1. 细胞因子抗癌机制（1、对肿瘤细胞毒性作用2、激发宿主抗癌免疫作用3、调节细胞的生

长和分化4、作用于肿瘤营养血管5、促进骨髓造血功能）

2. 过继性免疫治疗—IL-2（可获得大量高活性抗肿瘤细胞，可强化抗癌细胞群对肿瘤杀伤）

3. 单克隆药物—美罗华（ 治疗头颈部非霍奇金淋巴瘤CD20）

4. 肿瘤疫苗（指将自体或异体肿瘤细胞经过物理、化学、生物或基因工程处理后，再对患者

行免疫接种，以激发患者机体对肿瘤的特异性免疫反应，达到消除肿瘤目的。

1、肿瘤细胞疫苗 －－将肿瘤细胞经钴60处理后消除其生长能力，保留其免疫原性，再接种患者，产生免疫应答。

2、肿瘤基因工程疫苗 －－ 将目的基因通过基因转染导入受体细胞制备而成，目前目的基因有：IL-2、IL-6、TNF 等

3、肽疫苗和核酸疫苗－－由癌基因和抑癌基因突变肽制备的肽疫苗

4、抗独特性抗体疫苗－－具有模拟抗原及免疫调节的双重作用，主要针对恶黑、B 细胞淋巴瘤

5、安柯瑞—重组人5型腺病毒注射液 －－是我国第一个拥有知识产权新型肿瘤生物治疗药，能特异识别肿瘤细胞，并在肿瘤细胞中复制、释放，最终导致癌细胞裂解，达到对肿瘤的连续杀伤作用；同时还可调动机体的免疫系统以杀伤肿瘤。主要针对头颈部肿瘤、非小细胞肺癌、软骨肉瘤）

8. 口腔颌面组织移植的新进展（p154）

A ．牙移植：自体牙移植；同种异体牙移植（牙根吸收？）

原因：

根周炎症及牙骨质脱矿

机体免疫应答

致敏淋巴细胞引起免疫反应

牙根进一步脱矿，加剧免疫反应，导致牙根吸收

B ．骨移植：自体骨移植

单纯游离骨移植

成形性松质骨移植

带肌蒂骨移植

血管吻合游离骨移植

同种异体骨移植

异种异体骨移植

免疫反应出现在同种异体骨移植，到目前为止，这种方法仍然是不成功的

同种异体移植的免疫反应主要以T 细胞依赖细胞免疫反应为主。由于HLA 分型及配型应用，术后免疫反应较少出现。 原因：

1、由于HAL 分型及配型，提高的骨移植成功率。

2、此种骨移植大多为颗粒型组织，可为机体吸收，在人体时间不长，引起免疫反应小。

3、经冰冻处理后，组织的免疫原性大大降低，但仍能刺激机体产生新的骨组织。

C ．面部软组织的异体移植：2005年11月世界首例狗咬伤患者面部移植在法国完成，2006年4月我国西安面部异体移植成功。

自体组织移植

同种异体面部复合组织移植

免疫排斥

伦理

9.Oral non-specific immune system（笔记）？？？

非特异性免疫：又称天然免疫或固有免疫。是人类在漫长进化过程中获得的一种遗传特性，是人一生下来就具有能力。

包括：组织屏障（皮肤和黏膜系统、血脑屏障、胎盘屏障等）；

固有免疫细胞（吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等）；

固有免疫分子（补体、细胞因子、酶类物质等）。

口腔非特异性免疫系统：

粘蛋白 乳铁蛋白 过氧化物酶

溶菌酶 细胞因子

第五章 口腔骨组织生物学（10T ）（重点——整章 生长因子）

1. 简述成骨细胞与破骨细胞的关系(p168)

a. 成骨细胞参与破骨细胞在骨表面附着的调节

b. 成骨细胞合成破骨细胞骨吸收刺激因子：

c. c ．成骨细胞参与破骨细胞分化成熟的调节：

2. Describe the functions of BMPs（骨形成蛋白类）（p163）

骨形成蛋白类(BMPs) 是转化生长因子β( TGF －β) 家族的成员, 属于二硫键交联的生长和分化因子。骨形成蛋白－2 (BMP－2) 是其中的一种, 对骨组织形成、生长和修复有促进作用, 是已知的所有生长因子中对骨的形成作用最强的生长因子

BMP 目前已知的唯一可以独立在体内异位成骨的生长因子

BMP-2、BMP-4在牵引成骨初期表达增强

BMP-7在牵引期呈下降趋势

3. Osteoblast （成骨细胞）在骨改建中的作用（p164）

1、合成膜结合型碱性磷酸酶

--与骨基质矿化有关

2、合成骨基质分子

--Ⅰ型胶原

--非胶原蛋白

4. PG 在骨吸收、骨生成中的作用（p169）

PG 与骨吸收关系：

1、促进破骨细胞产生和骨组织改建

2、是机械力引起细胞代谢变化的重要介质

3、是其他细胞激肽、生长因子引起骨吸收的中间介质

PG 与骨形成关系：

PG 受体存在于成骨细胞表面

其作用与浓度有关

低浓度—促进成骨细胞DNA 合成、细胞复制

高浓度—抑制细胞分化

促进快速扩弓后骨组织沉积

5. 简述力在骨改建中的作用（p172）

一、 机械力对组织细胞生物学行为影响：负重可增加骨密度，失重使骨密度降低

二、 机械力对细胞骨架作用：

三、 机械力引起骨吸收

四、机械力致基因表达改变：

6. 体外培养成骨细胞的获得及鉴定方法（p179）

获得： 1、直接从骨组织中分离 保留活体组织特点；包含多种细胞

2、利用已建立的成骨细胞株 细胞表型特点及骨生成能力低

体外培养成骨细胞鉴定：

1、生化鉴定

2、形态学观察

3、骨形成能力鉴定

7. 从临床角度骨牵张成骨术分为哪五个阶段？每个阶段有何生物学特点？（p175）

1、 骨切开术

骨组织分成两段或数段

骨完整性及连续性中断

生物学变化——成骨细胞聚集断端形成血痂

2、 间歇期或潜伏期

血管断裂，形成血肿

骨断端出现细胞坏死

新生血管长入

血凝块被成纤维细胞、胶原、毛细血管替代

成骨细胞前体在血管周围聚集

成纤维细胞形成纤维样组织

3、 牵张期

与骨折愈合比较

表现为：

生长刺激：刺激生物活性物质释放，增加成纤维细胞的平殖和生物合成

塑形刺激：改变成纤维细胞形态，发生极化，形成胶原，并沿施力方向排列

牵张第2周，成骨细胞聚集明显，排列整齐，分泌

类骨质。血管可见断裂，血细胞渗出，编织骨 形成

2周末，类骨质开始矿化

纤维组织—膜内成骨

软骨组织—软骨内成骨

4、 固定期

指停止牵张至去除牵引器这段期间

成骨细胞仍然可呈双层或多层排列，排列未见按施力方向排列，继续分泌骨基质，组织

间隙已无血细胞

新生骨继续钙化，直至成熟骨

5、改建期

骨组织行使功能，以完成新骨改建

骨皮质及骨髓腔恢复，哈佛系统形成，完全改建完成约需1年

8. 骨改建的调节因子（p171）

1. 血小板衍生的生长因子：

2. 肿瘤坏死因子

3. 干扰素：

4.IL （白细胞介素）：。

5. 牙周韧带细胞的调节因子：

6. 转化生长因子-β1

7. 胰岛素样生长因子对骨组织的作用：

8. 成纤维细胞生长因子对骨组织的作用：

9. 牵张成骨与骨折愈合的比较（相同—都断了；不同—一个有外力，一个无外力）

相同——都断了，骨组织分成两段或数段

骨完整性及连续性中断

不同——牵张成骨经历五个阶段，每个阶段施以不同的处理，是有外力的，

骨折愈合是没有外力的。

（结合本章第七题）

10. 颅面骨组织变化研究的主要方法（p177）

一、生长发育预测：1、X 线头影测量分析

2、手腕骨X 线片，

3、颈椎X 线影像分析，

二、临床指标检测：1、血液生化指标

2、X 线片

3、龈沟液炎性介质分析（重量、体积，放射免疫法，酶联免疫法）

三、各种骨细胞培养：（一）骨髓细胞培养

（二）成牙本质细胞培养

（三）各种骨细胞体外培养

四、离体状态骨吸收评价：（一）器官培养观察45Ca 释放方法

（二）骨颗粒检测法

（三）骨吸收陷窝检测

第六章 口腔细胞培养及其应用（7T ）

1. 细胞培养取材有哪些基本要点（要求）（p188）

取材的基本注意事项有以下几点：

（1） 取材部位准确（

（2） 严格无菌操作

（3） 尽快培养

（4） 减小损伤（尽量采用锐器对组织进行剪切分离，避免撕扯，以减小对组织细胞的损伤）

（5） 避免干燥（在修剪时可将组织浸泡于培养液中）

（6） 制备标本（以便准确鉴别培养组织的来源，制备组织学与电镜标本）

2. 体外细胞培养微生物污染有哪些主要途径？如何预防？（p189）

微生物污染途径：

空气：主要途径—场所

器材：严格消毒

操作：无菌观念

试剂：用前检查

组织标本：取材

3. 口腔鳞癌细胞体外培养生物学特性有哪些？（p199）

为多角形上皮样细胞，镶嵌状排列，核大，圆形，核浆比高，核仁清，5~6个，核分裂

象多，细胞成堆生长，无接触抑制—明显恶性细胞特征。细胞贴壁率高，增殖迅速，裸鼠移植率高，具有鳞癌组织学特点，电镜下见胞质内含张力原纤维，细胞间可见桥粒及半桥粒，证明为上皮来源。细胞增殖迅速，裸鼠移植成瘤率很高，瘤组织具有鳞癌组织学特点，与原发灶组织学相符。

4. 细胞培养的外界环境（p184）

（1）无污染环境：

因此无任何污染和及时清除代谢物是细胞体处生存的基本条件

（2） 基质：除造血细胞、腹水细胞等细胞外，绝大多数细胞需要附着在适宜底物上才能生长

（3）气体环境和氢离子浓度

CO2: 5%

大多数细胞适宜PH 为7.2～7.4；

（4）液相环境：a 水和平衡盐溶液

b 天然培养 基：

c 合成培养基：

d 无血清培养基：

（5）温度维持：细胞增殖生长必须有适宜温度，般情况下温度为36.5±0.5度，细胞对高温

更敏感，细胞在 4度仍可生存，若加入保护剂，可长期在液氮中保存。然在41～43度中将多数死亡。

（6）渗透压：渗透压对细胞来说有一定耐受性，按培养基说明书其基本渗透压可保证。

5。传代培养的过程（p183）

传代培养：细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。

初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。反复传代就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代

右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。 10～50次左

6．How to differential a cell as a odontoblast （成牙本质细胞） histologically ？ 在组织学上，如何鉴别成牙本质细胞？（p192）？？

分析：结合组织病理学课本回答的，鉴于成牙本质细胞的所在部位，主要鉴别其与牙髓细胞（成纤维细胞、组织细胞和未分化间充质细胞）

A ．成牙本质细胞特点：

成牙本质细胞体是位于牙髓周围紧接前期牙本质排列成的一层细胞，细胞呈柱状，核卵圆形，位于细胞的基底部，细胞顶端有一细长的突起深入牙本质小管内。

在光学显微镜下，此细胞层似有3~5层成牙本质细胞构成，这是由于成牙本质细胞排列紧密而造成的假象。在整个牙髓中，成牙本质细胞的形状并不完全一致，在冠部为较高的柱状细胞，反映了细胞的高活性状态；在牙根中部逐渐变为立方形细胞；接近根尖部的成牙本质细胞为扁平状，呈现相对休止状态。

B. 牙髓细胞：

其细胞成分包括成纤维细胞、组织细胞、未分化的间充质细胞、血管淋巴管组织的多种细胞。

至于体外培养的牙髓组织细胞是来源于牙髓组织中的成纤维细胞还是未分化的间充质细胞，目前还不很明确，多数学者将其统称为牙髓细胞。

a ．细胞形态学特点：牙髓细胞呈梭形，有突起，核圆形，居于细胞中央。细胞较少时排列疏松，伸展充分，呈多角形。细胞较多时排列紧密，电镜观察胞浆内有丰富的粗面内质网及线粒体，有大量分泌颗粒，细胞周边有分泌泡，胞核不规则，部分偏极。

b ．免疫组织化学染色：体外培养的牙髓细胞波形丝蛋白（vimentin ）表达阳性，角蛋白（keratin ）、神经丝蛋白(neurofilament protein) 、结蛋白(desmin)、胶质细胞原纤维 酸性蛋白表达阴性.

表明牙髓细胞来源于间质细胞或中胚层来源细胞。

C ． 分述一下各种牙髓细胞的组织学特点：（组病书上）

a ．成纤维细胞（fibroblast ）：是牙髓中的主要细胞。细胞呈星形，有胞浆突起互相连接，核染色深，胞浆淡染、均匀。电镜下有丰富的粗面内质网和线粒体以及发达的高尔基复合体等，这说明它有活跃的合成胶原的功能。牙髓成纤维细胞的形态往往反应了牙髓组织的功能和活性。随着年龄的老化，牙髓成纤维细胞数量减少，形态呈扁平梭形，细胞器减少，表现为合成和分泌功能下降。近年的研究表明，幼稚的成纤维细胞受到某些刺激后可分化为成牙本质细胞。

b ．组织细胞：通常位于小学馆及毛细血管周围。组织细胞或吞噬细胞的形态不规则，有短而钝的突起，胞核小而圆，染色深。在活体染色法中，可见其胞浆内储有染料颗粒。在非活动时期很难与成纤维细胞相鉴别，在炎症时，胞浆内有颗粒及空泡，胞核增大，有明显的核仁。

c ．未分化的间充质细胞：通常位于小血管及毛细血管周围。比成纤维细胞小，但形态相似，有不明显的胞浆突。在受到刺激时，它可分化成结缔组织中任何一种类型的细胞。在炎症中它可形成巨噬细胞。当成牙本质细胞消失时，它可移向牙本质壁，分化为成牙本质细胞，形成修复性牙本质。在正常胚胎发育阶段，成牙本质细胞必须由内釉上皮或上皮根鞘诱导产生，而发育完成的牙，后两种上皮均不存在，因此新的成牙本质细胞分化的诱导机制尚不明了。

7．简述体外培养牙髓细胞和牙周膜细胞的免疫组化染色特点。（p191）

A ．牙髓细胞：

体外培养的牙髓细胞波形丝蛋白（vimentin ）表达阳性，角蛋白（keratin ）、神经丝蛋白(neurofilament protein) 、结蛋白(desmin)、胶质细胞原纤维酸性蛋白表达阴性.

表明牙髓细胞来源于间质细胞或中胚层来源细胞。

B. 牙周膜细胞：

体外培养的牙周膜细胞波形丝蛋白表达阳性，角蛋白、神经丝蛋白、结蛋白、胶质细胞 原纤维酸性蛋白表达阴性，表明牙周膜细胞为间质细胞或中胚层来源细胞。