运动生物化学实验
实验一 实验基本技能操作
一. 实验目的 1. 了解实验室的一般规则;
2. 学习实验中常用玻璃器皿的洗涤、干燥方法;
3. 了解运动生化常用仪器名称、用途、操作方法
及注意事项;
4. 掌握移液管的使用及注意事项。
二、 基本技能 (一)玻璃器皿的洗涤、干燥(略)
(二) 移液管的使用
(三)采指血技术
(四)S22PC 分光光度计的使用
(五)离心机的使用
(二) 移液管的使用
1. 首先选择与所取量相近的移液管(注:常用移液管规格为0.5ml 、1ml 、2ml 、5ml 、10ml) ;
2.左手持移液管,右手持洗耳球,移液管下端置于液面以下适中部位;
3. 眼睛平视移液管液面, 吸取所需液体,以持移 液管手的食指指腹快速封住移液管的上口,并将液量调整到所需刻度;
4.将移液管移至目的容器中,放开食指,放出所移取的溶液。
(三)采指血技术 1. 用75%酒精棉球消毒无名指末端指腹, 然后用干棉球擦干手指。
2. 用一次性采血针,垂直刺破已消毒的指端(深约2~3mm ,动作要快、准、狠) ;
3. 挤出第一滴血,并用干棉球擦去,然后,用一次性吸血管吸取第二滴血至20μl 刻度线以上一点,用干棉球擦去吸血管外壁多余血液,调整血液至20μl 刻度线。
4. 取血后用干棉球压针孔,直到出血停止 (四)S22PC 分光光度计的使用
1. 检查电源插头, 打开电源开关, 预热20分钟;
2. 调节波长旋钮,使波长移到所需之处;
3. 将比色杯放入样品池的比色杯架中, 盖上样品池盖;
4. 按模式键, 使仪器处于透射比调整状态. 将参比试样或空白管推入光路,进行调零和调满度:
5. 测试样品光密度值:按模式键,使仪器处于吸光度检测状态,将待测试样推入光路, 显示所测样品的OD 值.
(五)离心机的使用
1. 插上电源插头前确认离心机的开关处于关闭状态, 检查转速调节旋钮是否归零;
2. 打开离心机盖,按对称平衡的原则放置样品离心管;
3. 打开电源开关, 先定时, 再慢慢调节转速。
4. 离心完毕, 先将转速归零, 开盖取出样品管,再将开关关闭, 最后切断电源.
实验二 尿蛋白的定量测定
(双缩脲法)
实验目的
1 加深对尿蛋白的认识及其测试的意义
2 掌握双缩脲法测定尿蛋白的原理和操作方法
3 学习使用离心机,掌握分光光度计的使用
正常成年人尿中蛋白质含量很少,其浓度在10m g %以下,日排出总量不超过150m g 。 运动员安静状态下尿蛋白质含量与一般人没有差异。
采样时间:运动后15分钟,因为这时尿蛋白达最高值,20分钟尿蛋白开始下降,4小时内基本恢复,时间延长说明机能下降。
• 两个差异:个体差异和项目差异
• 年龄:
• 环境:
• 训练与比赛:
实验原理:蛋白质是含氮的有机高分子化合物,分子中含有多个与双缩脲分子相似的结构(肽键),在碱性硫酸铜溶液中,蛋白质与铜离子等络合生成紫色的络合物,其颜色深浅与蛋白质浓度成正比,故用比色法测定其含量。
测定管(离心管)
5m l 尿液
0. 15N 硫酸2. 5m l
1. 5%钨酸钠2. 5m l
混匀后离心5分钟(3000转/分)
倾去上清液, 加生理盐水1m l , 搅拌
加双缩脲试剂4m l
混合后放置20-30分钟
540n m 比色, 空白调零读取测定管吸光度值(O D 测)
实验结果:
计算公式:
尿蛋白(m g %)= O D 测/O D 标χ50
其中测得O D 标为0. 131
结果与分析:
1、尿蛋白与运动量及负荷强度的关系。
2、在正常生理条件下,尿蛋白含量为10m g %以下,
大运动量训练后尿蛋白含量会高于10m g %。
3、结果大于零而小于10m g %,说明生理条件正常,或运动量合适。
4、测定结果大于10m g %,分析近期运动强度和负荷量的情况
5、结果为零可能有如下因素:离心之后不小心将蛋白质沉淀倒掉;操作过程中没有及时摇匀,蛋白质沉淀没有溶解;加入生理盐水等过多,将蛋白质稀释;加钨酸钠溶液后静置时间不够,蛋白质没有充分沉淀下来;加双缩脲试剂后放置时间太短,反应没有完全进行。
6、结果过高,或出现混浊,可能是尿液中磷酸盐、草酸盐等过多,在尿液呈酸性或碱性时结晶析出。