人早孕胎盘滋养层细胞的原代培养
中国微生态学杂志2011年8月第23卷第8期
376X （2011）08-0761-03文章编号：1005-
761
【综
述】
人早孕胎盘滋养层细胞的原代培养
12
张名均，张德纯
（1．重庆市九龙坡区第一人民医院，重庆400050；2．重庆医科大学病原生物学教研室，重庆400016）
【关键词】早孕胎盘；滋养层细胞；原代培养
【中图分类号】R329．2
【文献标识码】A
众所周知，滋养层细胞在人胚胎的植入及胎儿的形成中起着至关重要的作用，滋养层细胞功能、状态的任何改变都与妊娠的疾病密切相关，甚至影响到胎儿的正常发育。滋养层细胞的生长发育到底受哪些因素的影响和限制是我们最关心
的问题，
由于对于滋养层细胞的研究不可能做人体的在体实验，故滋养层细胞的体外培养就有举足轻重的地位。如何才能高效、
快速获得高纯度、足够数量和体内滋养层细胞结构和功能一致的体外滋养层细胞是目前急需解决的问题。本文就
人早孕胎盘滋养层细胞的原代培养作一综述。1
滋养层细胞的形态和功能
人早孕滋养层细胞在受精后4d 开始形成，细胞呈不规则的多边形，核大、卵圆形，位于胞质近中央，细胞为上皮样细胞形状，呈片状铺展生长。按分化程度和功能分类可分为：未分化的单个核滋养层细胞前体即细胞滋养层细胞，可作为滋养层细胞的“干细胞”，可进一步分化为侵袭性的滋养层细胞和合体滋养层细胞。细胞滋养层细胞在早孕期增殖能力很强，随着孕期的推进细胞滋养层细胞的增殖能力会下降。而侵袭性滋养层细胞可迁入子宫肌层和子宫螺旋体动脉帮助胎盘的定植定位。如果侵袭性滋养层细胞发生功能障碍，迁入过度会引起绒癌等疾病，迁入定植能力下降会引起胎儿流产。合体滋养层细胞主要参与胎儿与母体的物质交换，随着孕期的推进，合体滋养层细胞的增殖能力会增强。如果合体滋养
层细胞的增殖能力下降或凋亡过度，
都会造成胎儿的营养不良或植入障碍，影响胎儿的发育或导致流产。因此研究影响滋养层细胞的增殖和凋亡的因素是保证胎儿健康发育和预防
流产的有力措施。目前体外培养的绒毛膜滋养层细胞基本是细胞滋养层细胞，合体滋养层细胞只占38%［1］
。
2体外滋养层细胞的培养方法
目前国内外报道的滋养层细胞的原代培养主要包括组织
块法和酶消化法。2．1
绒毛组织贴块法无菌绒毛反复漂洗并去除中轴结缔组织后，剪碎，糊状组织碎片直接贴于培养瓶上，加培养液进
行培养。组织块法优点是：操作简便易行，步骤少，不易受外界微生物的污染，成功率高。缺点是：原代细胞生长周期长，约需20d ，在生长过程中无法保证滋养层细胞的功能状态，且容易混杂成纤维细胞、蜕膜细胞、子宫基质细胞等细胞。最近也有不少学者对组织块法进行改良也得到较好的效果。李幼飞等
［2］
联合酶消化和组织块法得到较好效果，事实上就是缩
收稿日期】2011-04-29
作者简介】张名均（1970-），女，博士研究生，从事病原微生物学研究，
Email ：123abc_zhang@163．com ；张德纯，通讯作者，Email ：zhangdechun46@163．com
短酶消化时间，
减少酶消化对滋养层细胞的损伤，然而通过酶消化又能使组织块更加细小，消化某些间质细胞，提高了成功率，达85．7%，纯度达90%，同时还缩短了培养时间，简化了步骤。2．2
酶消化法糊状组织碎片加入适量的酶消化后，离心取沉淀，用培养液配制成一定浓度后平铺于培养瓶中进行培养。
常用的酶主要是胰酶，另外还有胶原酶和DNA 酶，这些酶起到分散细胞，使细胞更能在培养瓶中单层平铺排列，有利于滋养层细胞的片状生长。不同的学者采用酶的浓度、种类、作用时间各不相同，得到滋养层细胞的产量和纯度也各不相同。但在实验中发现，酶消化法存在以下的优缺点。优点：由于细胞分散，生长速度快，在短时间内生长成片，可以很快得到大量活细胞，原代细胞产量高。由于通过消化间质细胞，其他的杂质细胞减少，纯度相对组织块法要高。缺点：该法要通过反复的消化、离心，步骤繁琐，容易受外界的污染。由于酶的质量不统一，故消化的时间和酶的浓度也无法统一，不同的学者获得的滋养层细胞的产量和纯度有很大的差异。FTANK 等
［3］
道，消化过程和离心过程对细胞均有不同程度的损伤。可导致形成大量无核或单核的合体滋养细胞碎片。因此体外培养的滋养层细胞的功能和结构可能受到影响。3滋养层细胞的分离
无论是组织块法或酶消化法，体外培养的滋养层细胞都含有血管内皮细胞、成纤维细胞、及血细胞等细胞杂质。怎样才能排除间质细胞等其它细胞成分而保留所需成分是培养成功的关键。目前国内外学者采用的方法有以下几种：BSA 梯度法、Percoll 密度梯度离心法、淋巴细胞分离液分离法、免疫
亲和层析法、
免疫磁珠纯化法、流式细胞仪分选法、差速细胞贴壁法等。不同的方法得到的分离纯度不同，其各有优缺点，
当然其应用范围也各不相同。3．1
BSA 梯度法［4］
原理：将经低温酶消化好的胚胎组织缓
慢加入到小牛血清白蛋白（BSA ）连续密度梯度液中，在重力
的作用下，滋养层细胞会集中于管底而得到纯化，然后在限制
性的培养液中进行培养。优点：由于是低温酶消化，可减少消化液对滋养层细胞的破坏；另外在限制性培养液中培养，可以
刺激滋养层细胞的生长而抑制其他细胞的生长。缺点：限制性培养液配制比较复杂；培养液中加入的成分对于滋养层细胞的功能和结构是否有影响，要根据后续的研究的目的来决定，
不是一层不变的，因此很难统一限制性培养液的成分。应用：目前应用较少，在此基础上改良的较多。3．2
Percoll 密度梯度离心法［5］
原理：利用滋养层细胞的密
度是一个定植，在Percoll 连续密度梯度液中会聚集在相应的
密度液中，
吸取该层的滋养层细胞进行培养。自从KLIMAN 等确立滋养层细胞的密度在Percoll 中所处的密度值为1．48
1．62g /L，国内一些学者将Percoll 连续密度梯度简化两层
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