血液中氯乙酸的离子色谱测定方法研究_杨晓忠

∗410∗中国职业医学 2010年10月第37卷第5期 Ch i n O ccup M ed , O ctober , 2010, V o. l 37, N o . 5

文章编号:1000-6486(2010) 05-0410-03

监测检验方法!

血液中氯乙酸的离子色谱测定方法研究

Deter m ination o f ch loroacetic acid in hu m an blood w ith ion chro m atography

杨晓忠, 谢玉璇, 越飞, 吴邦华, 刘建华

YANG X iao zhong , X I E Yu xuan , YUE Fe, i WU Bang hua , LI U Jian hua

摘要:目的 建立血液中氯乙酸的离子色谱测定方法。方法 血液样品经乙腈沉淀蛋白质离心, 经SPE Ag 柱和SPE H 柱除氯后再经0 22 m 滤头过滤, 滤液注进离子色谱仪进行氯乙酸的定性和定量分析。结果 样品溶液中氯乙酸的线性范围为0 5~20 0mg /L;相关系数(r ) 为0 9983; 检出限为0 3m g /L; 若取0 2m l 血液样品进行测定, 则最低检出质量浓度为4 5m g /L;相对标准偏差为1 4%~2 7%; 样品加标回收率为91 0%~102 9%; 样品在4∀下至少可保存5d 。结论 此法灵敏度高, 选择性好, 干扰少, 是检测血液中氯乙酸的理想方法。 关键词:离子色谱法; 血液; 氯乙酸

中图分类号:R135. 1; R115 文献标识码:A 测定职业接触者血液中氯乙酸(Chloroaceti c acid) 的水平, 能了解工人接触氯乙酸的程度, 对保护劳动者身体健康有非常重要意义。氯乙酸也是1, 2 二氯乙烷的代谢产物[1], 检测血液中的氯乙酸水平对研究1, 2 二氯乙烷致脑水肿有积极作用。氯乙酸的定量分析方法较多, 曾报道过差示滴定法、离子交换层析法、纸色谱法、纸上电泳法、薄层层析法、极谱法、气相色谱法、化学分析及高效液相色谱法等[2-4]。用离子色谱法测定水、空气中微量氯乙酸的方法也有报道

[5-6]

1 3 试剂

#实验用水:电导率

1 4 1 原理 血液样品经乙腈沉淀蛋白质及SPE A g 柱和SPE H 柱除氯后再经0 22 m 过滤头过滤, A S14A 色谱柱分离, 电导检测器检测, 保留时间定性, 峰面积定量。

1 4 2 实验步骤 #样品的采集及保存:抽取静脉血1m , l 装于有抗凝剂的塑料标本管中, 在4∀冰箱中保存。∃样品处理:吸取0 2m l 血液样品, 加1m l 纯水, 用乙腈沉淀蛋白质, 待蛋白质沉降后吸取上清液过SPE A g 柱和SPE H 柱, 再经0 22 m 过滤头过滤。滤液待测。%氯乙酸标准曲线的制备:取1只100m l 容量瓶, 加入0 50m l 氯乙酸标准贮备液, 加水至100 0m , l 配成0 5mg /L氯乙酸标准。再取7只25m l 容量瓶, 分别加入0、0 50、1 00、1 50、2 00、2 50、5 00m l 氯乙酸标准贮备液, 各加水至25 0m , l 配成0、2 0、4 0、6 0、8 0、10 0、20 0mg /L氯乙酸标准系列。按照仪器的操作条件, 将离子色谱仪调节至最佳测定条件, 淋洗液流速为0 8m l/min , 进样25 , l 分别测定标准系列, 每个浓度测定3次, 以峰面积对相应的氯乙酸质量浓度(m g /L) 绘制标准曲线。&样品测定:用测定标准系列的操作条件测定样品溶液和样品空白对照溶液。测得的样品峰面积值减去样品空白对照峰面积值后, 由标准曲线得氯乙酸的质量浓度(m g /L) 。∋计算:按以下公式计算血液中氯乙酸的质量浓度:C =v m /V(C 为血液中氯乙酸的质量浓度, mg /L;v 为样品处理后的体积, m ; l m 为测得样品溶液中氯乙酸, g , m l )

。目前国内血液中

氯乙酸的离子色谱测定方法未见报道。本文采用吸取0 2m l 血液样品, 然后加入1 0m l 纯水, 再用乙腈沉淀蛋白质[7], 待蛋白质沉降后吸取上清液过SPE A g 柱和SPE H 柱, 再经0 22 m 过滤头过滤, 经色谱柱分离, 电导检测器检测, 保留时间定性, 峰面积定量。此法灵敏度高, 选择性好, 干扰少, 取得满意结果。现将方法报告如下。1 材料和方法1 1 仪器

#0 22 m 有机相针式过滤器; ∃具塞比色管, 10m ; l %超声波清洗器; &SPE A g 柱和SPE H 柱(天津市富集科技有限公司); ∋D I ONEX I CS2500离子色谱仪, Chrom elen 色谱工作站, ED 50电化学检测器。1 2 仪器的操作条件

#色谱柱:Ionpac A S14A (4mm (250mm ) 阴离子色谱柱; Ionpac AG14A (4mm (50mm ) 阴离子保护柱; ∃抑制器:A SRS ULTRA; %检测器:电导检测器; &淋洗液:8mmo l/L碳酸钠(N a 2CO 3) 和1mm o l/L碳酸氢钠(N a HCO 3) 混合液; ∋淋洗液流速:0 8m l/mi n 。

基金项目:广东省医学科研基金项目(A2008066) 作者单位:广东省职业病防治院, 广东广州510300

作者简介:杨晓忠(1964 ), 男, 大学本科, 主任技师, 主要从事理化

中国职业医学 2010年10月第37卷第5期 Ch i n O ccup M ed , O ctober , 2010, V o. l 37, N o . 5

表3 精密度实验 (m g /L)

氯乙酸样品高质量浓度中质量浓度低质量浓度

样品数666

范 围181. 2~196. 2116. 9~121. 443. 1~45. 6

x +s 192. 8+5. 29118. 5+1. 6444. 4+1. 08

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2 结果

2 1 色谱条件的优化

根据氯乙酸的色谱分离效果, 选用A S14A 柱分离, 以8m ol/LN a 2CO 3和1mo l/LN a H CO 3混合液为淋洗液的分离效果较好。固定淋洗液浓度, 改变柱温和检测温度, 考察氯乙酸的保留时间、分离度和柱效。氯乙酸在30~45∀时保留时间基本不变, 柱温30∀及以上分离度及柱效能达到要求, 见表1。但当温度大于45∀时, 氯乙酸色谱峰的对称性变差, 因此选择在30∀进行分离测定。

表1 分离度及柱效受温度影响的情况

影响对象分离度柱效/Pl ates

25∀1. 434205

30∀1. 534328

35∀1. 734634

40∀1. 864903

45∀2. 005206

氯乙酸 空白对照 低质量浓度 中质量浓度 高质量浓度

RSD /%2. 71. 42. 4

2 5 回收实验

取10 0m l 血液样品各8份, 分成4组, 每组取6个样品, 其中1组作为空白对照, 其余3组分别加入1000m g /L氯乙酸标准溶液0 15、0 90、1 50m l 配制成低、中、高3种浓度的模拟血液样品。按分析步骤测定。从表4结果可知, 回收率在91 0%~102 9%之间, 符合方法学的要求[8]。

表4 回收实验 (mg /L)

样品数

6666

测定均值

回收率/%

-91. 0101. 8102. 9

固定淋洗液浓度和温度, 改变流速, 观察流速对保留时间、分离度及柱效的影响, 结果见表2。结果表明, 流速增大, 保留时间减少, 柱效和分离度降低, 考虑到样品中氯离子含量较大, 流速1 2m l/min 以上保留时间间隔小易受到氯离子的影响, 而采用0 3、0 5m l/mi n 的流速时分析时间过长, 因此本法选用0 8m l/m i n 的流速进行测定。

表2 分离度及柱效受流速影响的情况

流速(m l/mi n )

0. 30. 50. 81. 01. 21. 51. 82. 0

分离度1. 911. 811. 701. 621. 561. 561. 471. 50

柱效/Pl ates [***********][1**********]994

保留时间/mi n

21. 38711. 5838. 0206. 3775. 3234. 2833. 6003. 270

2. 6 样品贮存稳定性实验

用氯乙酸标准溶液配制成3种浓度的模拟血液样品, 分成3组, 每组8份, 并将样品于4∀下保存。分别于第1、3、5、7天进行测定, 见表5。实验结果表明, 样品在4∀下至少可保存5d 。

表5 样品贮存稳定性实验 (x , m g /L)

组 别第1组第2组第3组

第1天15. 993. 9156. 6

第3天17. 794. 2162. 2

第5天15. 990. 8159. 2

第7天15. 878. 3125. 0

2. 7 除氯及干扰实验

影响血液中氯乙酸测定的最主要的干扰物质为氯离子, 氯离子质量浓度为98~108mm ol/L。将血液样品用乙腈沉淀蛋白质后, 吸取上清液过SPE A g 柱和SPE H 柱, 以除去血液中过多的氯, 从而排除了干扰。通过调节淋洗液的浓度及流速至最佳分离条件, 在此条件下, 其他阴离子(如:F -、C l -、NO 2-、NO -PO 2-S O 2-。3、4、4) 不干扰测定, 见图1

2 2 样品前处理方法的优化

选用甲醇、乙腈对血液样品进行除蛋白实验, 结果显示, 乙腈除蛋白效果较好, 且样品中氯乙酸回收率为91 0%~102 9%, 能达到方法学的要求。因此选用乙腈作为样品除蛋白剂。

2 3 线性范围及检出限

分别配成0、0 5、2 0、4 0、6 0、8 0、10 0、20 0mg /L氯乙酸标准溶液, 按分析步骤制备标准曲线, 在0 5~20 0m g /L氯乙酸时符合比耳定律。回归方程y =0 0526x -0 0222, 相关系数(r ) =0 9983。检出限为0 3m g /L。若采集0 2m l 血液样品进行测定, 则最低检出质量浓度为4 5m g /L。2. 4 精密度实验

用氯乙酸标准溶液配制3种浓度的模拟血液样品, 分别为高、中、低3种浓度, 按分析步骤, 连续测定6次。从表3结果可知, 相对标准偏差(RSD ) 为1 4%~2 7%, 符合方法学的

[8]

1:氟; 2:氯; 3:亚硝酸盐:4:氯乙酸; 5:硝酸盐; 6:磷酸盐; 7:硫酸盐

图1 氯乙酸色谱分离图

2. 8 样品测定

, 质量

。

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浓度为26 2mg /L。血液及标准溶液的离子色谱图见图2

。

3 结论

血液中氯乙酸用乙腈沉淀蛋白质后, 用离子色谱法测定血液中氯乙酸, 此法灵敏度高, 选择性好, 干扰少, 操作简单。方法的线性范围、检出限、回收率和RSD 均符合方法学的要求。是血液中氯乙酸测定的理想分析方法。

参考文献:

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[8] 中华人民共和国卫生部. GBZ /T210. 5 2008职业卫生标准制定

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图2 氯乙酸标准溶液(a) 和血液样品(b) 的离子色谱图(收稿日期:2010-02-08 修回日期:2010-05-28)

(上接第409页)

是半年报告职业病病例数时5月份的病例数就与本中心5月份的月报数据不一致, 这样即分不清责任所在, 也给职业病统计造成了困难。

3. 4 各种报告卡填写不完整、不规范

目前国家要求进行的职业卫生网络直报报告卡包括, 尘肺病报告卡−、, 职业病报告卡−、, 农药中毒报告卡−、, 有毒有害作业工人健康监护卡−和, 作业场所职业病危害因素监测卡−等。各种报告卡均要填写用人单位的组织机构代码, 由于目前职业卫生监测实行委托监测, 个别用人单位不配合提供相关信息, 容易导致报告卡填写内容不完整。4 建议

4. 1 完善网络直报监管机制, 杜绝迟报、漏报现象

国家应尽快出台相应的职业卫生网络直报监管机制, 明确各级监管部门的职责, 从制度上完善网络直报程序, 并可把突击检查、日常漏报调查作为网络直报常规工作, 以此保证网络直报的及时性和全面性。此外, 建立奖惩制度, 对报告及时、漏报率低的责任报告单位和责任报告人予以奖励, 对迟报、漏报现象严重的报告单位和报告人提出批评, 情节严重的予以一定的惩罚。

4. 2 不断完善报告卡内容, 提高网络直报数据的价值

职业卫生网络直报是近年来开展的一项工作, 各种不足难, 一收集存在的问题和不足, 集中进行改进和完善, 使职业卫生网络直报真正成为集数据收集、统计、分析为一体的实用性报告系统。

4. 3 严格控制各种报告卡的删除程序

各种已经上报了的报告卡, 特别是职业病和尘肺病报告卡, 需要删除时应该经过一些条件限制, 如增加报告卡删除申请等相关审卡机构同意后方可删除, 这样既有利于报告卡的管理, 又有利于数据统计处理的一致性。4. 4 加强培训教育, 规范网络直报内容

各责任报告单位应定期开展职业卫生法律法规和网络直报相关知识的培训学习, 并在质量考核中抽查、强化各直报人员的法律意识, 增强其责任感[4]。此外, 对网络直报内容的填写方法进行统一, 规范填写内容。需要各用人单位配合的项目应在委托时加以说明, 积极取得各用人单位的理解和配合。

参考文献:

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