分子生物学作业及答案

《分子生物学》期末考试

一． 名词解释

1．增色效应

答：当DNA 从双螺旋结构变为单链的无规则卷曲状态时，它在260nm 处的吸收便增加，这叫“增色效应”。

2．核酶

答：指具有催化活性的RNA，其作用底物是RNA，主要参与RNA的加工成熟。

3． DNA半不连续复制

答：指DNA复制时，前导链上DNA的合成是连续的，后随链上是不连续的，故称为半不连续复制。

4． 操纵子

答：在转录水平上控制基因表达的协调单位，包括启动子（P）、操纵基因（O）和在功能上相关的几个结构基因。

5．增强子

答：指真核生物的一段DNA序列，不具有方向性，距离结构基因可远可近（甚至可以位于内含子）。它与某些蛋白质因子结合后，通常能够增强启动子的转录活性，有时也可以抑制转录。

6．核小体

答：是贪色提的基本结构单位，由DNA和组蛋白构成。

7．核糖体

答：是细胞中的一种细胞器，由一大一小两个亚基结合形成[2]，主要成分是相互缠绕的RNA和蛋白质。

8．启动子

答：指结构基因的转录起始位点附近的一段DNA序列，它结合RNA聚合酶（真核生物还需要结合其他蛋白质因子）后能够开放基因转录。

9．终止子

答：是一段位于基因或操纵组末端的DNA片段,可中断转录作用。

10． DNA克隆

答：在体外将DNA插入载体分子，构成重组DNA分子，然后将其分子导入原先

没有这类分子的宿主细胞内并能够持续稳定的繁殖。

二．请选择正确的选项

1． 以下哪个是核蛋白（ C ）

A．角蛋白

B．染色质

C．组蛋白

D．蛋白聚糖

2．DNA中的一段5''-AGTCTGACT-3''序列等同于RNA中的哪一段（ A

A．5''-AGUCUGACU-3''

B．5''-UGTCTGUTC-3''

C．5''-UCAGUCUGA-3''

D．5''-AGUCAGACU-3''

3．DNA解链温度是指（ B ）

A．A260nm达到最大值时的温度

B．A260nm达到最大值50％的温度

C．DNA开始解链时所需要的温度

D．DNA完全解链时所需要的温度

4．1953年Watson和Crick提出（ A ）

A． 多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋

B． DNA的复制是半保留的，常常形成亲本－子代双螺旋杂合链

C． 三个连续的核苷酸代表一个遗传密码

D． 遗传物资通常是DNA而非RNA

5．以下哪一个在260nm波长下具有最大的单位质量吸收（ A ）

A．双链DNA

B．单核苷酸

C．RNA

D．蛋白质

6．pUC系列载体是第一次利用蓝-白斑进行筛选的载体，蓝-白斑筛选被用于（ A ）

A．检测外源DNA片段是否在细菌中表达

B． 检测质粒是否插入外源DNA片段

C． 检测细菌是否含有质粒

D．提示克隆化外源DNA片段的性质

7．.以下哪一个是大肠杆菌和真核生物染色体的共同之处（ B ）

A．DNA是环状的

B．DNA被包装成核小体

C．DNA位于核中 ）

D．DNA是负超螺旋

8．反密码子中哪个碱基对参与了密码子的简并性（摇摆）（ C ）

A． 第一个

B． 第二个

C． 第三个

D． 第一个和第二个

9．PCR扩增目的片段时，在第几个循环后才出现目的片段长度的双链DNA分子 （ B ）

A．第一个循环

B．第二个循环

C．第三个循环

D．第四个循环

10．原核生物中，后随链的引物是被（ C ）清除的

A．3’至5’外切核酸酶

B．DNA连接酶

C．DNA聚合酶I

D．DNA聚合酶III

11．.原核生物启动序列－10区的共有序列称（ A ）

A．TATA盒

B．CAAT盒

C．Pribnow盒

D．GC盒

12．由146bp DNA片段，组蛋白八聚体构成的复合体称为（ A ）

A．核小体

B．核小体核心

C．核糖体

D．螺线管

13．人体中的脱辅基脂蛋白B在肝细胞中产生一个512kDa的载脂蛋白B100，而在肠细胞中，由于脱辅基脂蛋白B前mRNA 第6666位的一个碱基C变换为U，结果产生一个终止密码子，因此在肠细胞中，脱辅基脂蛋白B只产生一个241kDa的截短的载脂蛋白B48，产生这种现象是因为（ B ）的结果

A．RNA可变剪接

B． RNA编辑

C． RNA翻译后加工

D．偶然突变

14．某限制性内切酶酶切割5 ’ „GG↓AATTCC„3 ’序列后产生（ A ）

A．5 ’突出末端

B．3 ’突出末端

C．5 ’ 及3 ’突出末端

D．平末端

15．原核生物的起始氨基酸是（ A ）

A．甲酰甲硫氨酸

B． 甲硫氨酸

C． 组氨酸

D．色氨酸

16．下面哪个结构域是DNA结合结构域（ C ）

A．螺旋-转角-螺旋结构域

B．螺旋-环-螺旋结构域

C．亮氨酸拉链

D．酸性激活结构域

17．DNA光复活修复中哪种酶起关键作用（ A ）

A．DNA光解酶

B．烷基转移酶

C．DNA糖基化酶

D．AP内切核酸酶

18．转化是（ A ）

A．细菌吸收一个质粒

B．细菌表达一个基因

C．细菌吸收一个噬菌体

D．从细菌中分离一个质粒

19．一种细菌mRNA 由360个核苷酸组成，它所编码的蛋白质长度是（D）

A．约360个氨基酸

B．约1080个氨基酸

C．120个氨基酸

D．少于120个氨基酸

20．SV40基因组是（ B ）

A．双链线状DNA

B．双链环状DNA

C．单链线状DNA

D．单链环状DNA

三．问答题

1.请简述遗传密码的特性

答：1.方向性：密码子的阅读方向是5到3端。

2.简并性：除蛋氨酸和色氨酸只有一个密码子外，其它氨基酸都有好几组密码子。

3.通用性：无论是病毒还是原核生物、真核生物，都共同使用一套密码字典，但有例外。

4.连续性：在mRNA上，从起始密码子到终止密码子，密码子的排列是连续的，既没有重叠也没有间隔。

5.有起始密码子和终止密码子。

6.变偶性：密码的简并性只涉及第三位碱基，即同一个氨基酸的不同密码子中，前两个碱基均相同，第三个不同。

2.请简要说明cDNA文库构建的步骤

答：经典cDNA文库构建的基本原理：用Oligo（dT）作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的cDNA 加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得cDNA文库。其基本步骤包括：（1）mRNA的提纯获取高质量的mRNA是构建高质量的cDNA文库的关键步骤之一。（2）cDNA第一条链的合成。（3）cDNA第二条链的

合成。（4）双链cDNA的修饰。（5）双链cDNA的分子克隆。（6）cDNA文库的扩增。（7）cDNA文库鉴定评价。

3. 在色氨酸操纵子中，弱化作用是如何实现对色氨酸合成的调控

答：大肠杆菌trp operon，前导区的碱基序列包括4个分别以1、2、3和4表示的片段，能以两种不同的方式进行碱基配对，1 - 2和3 -4配对，或2 - 3配对,3 - 4配对区正好位于终止密码子的识别区。前导序列有相邻的两个色氨酸密码子，当培养基中Trp 浓度很低时，负载有Trp 的tRNATrp也就少，这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体滞留1区，这时的前导区结构是2 - 3配对，不形成3 - 4配对的终止结构，所以转录可继续进行。反之，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前，核糖体就到达2区，这样使2 - 3不能配对，3 - 4 区可以配对形成终止子结构，转录停止。

4．原核生物与真核生物蛋白质合成有何异同点

答：由于内质网的主要功能有糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等最主要的是糖基化。而真核生物有内质网所以真核生物分泌的蛋白质基本上都被糖基化，但是原核生物中与蛋白质合成有关的细胞器只有核糖体所以原核生物中产生的蛋白质都是粗蛋白。

5. 请你谈谈RNAi的原理及应用前景。

答：1、原理: RNAi (RNA interference) 即RNA干涉，是近年来发现的在生物体内普遍存在的一种古老的生物学现象,是由双链RNA（dsRNA）介导的、由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。

2、应用前景：RNAi可用于结构基因的功能研究。使用dsRNA研究优美新小杆线虫、黑腹果蝇（D.melanogaster）、真菌、植物等低等生物基因组功能的研究已比较成熟，在较高级的哺乳动物和人类基因的功能研究中，Harborth ［14］ 等的结果发现利用RNAi技术得到的基因功能表现与以往使用基因剔除法获得的信息一致。利用RNAi技术可以干扰病毒的复制及相应蛋白质的翻译。使用siRNA或dsR-NA进行病毒感染的干扰实验已在植物及低等生物中取得满意的结果，而且在人体细胞内的实验还刚刚起步。

6.核酸具有哪些物理化学特性、光谱学和热力学特性？

答: （1）化学性质

①酸效应 ②碱效应 ③化学变性

（2）物理性质

①黏性 ② 浮力密度 ③稳定性

（3）光谱学性质

①减色性：dsDNA相对于ssDNA是减色的，而ssDNA相对于dsDNA是增色的。

② DNA纯度：A260/A280。

（4）热力学性质

①热变性 ② 复性：DNA的热变性可通过冷却溶液的方法复原。不同核酸链之间的互补部分的复性称为杂交。

7.真核生物mRNA前体如何加工成成熟的mRNA?

答：

1.在专一的酶促作用下，5‘端形成特殊的帽子结构

2.在RNA末端腺苷酸转移酶的作用下，在3’端添加polA尾巴。

3.通过特殊的机制，去掉内含子，将外显子连接起来

4.对链内特定的核苷酸进行甲基化修饰。

8.克隆载体应具备哪些特性，并简述DNA克隆过程。

答：

1、应具备的特征：

①要有可转移性，已进入宿主细胞

②要有自主复制或者是整合功能，能携带目的基因一起稳定复制或表达 ③要是足够大的装载量，如plasmid 15kb YAC 400kb

④要有合适的筛选标记，便于筛选

⑤有合适的多克隆位点，便于目的基因的插入

⑥要足够安全

2、DNA克隆过程：

一个完整的DNA克隆过程应包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞（转化子）。